自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血

王 辉 王 恬

南阳南石医院，河南 南阳 473002

·论著 临床诊治·

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血

王 辉 王 恬

南阳南石医院，河南 南阳 473002

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对脑出血患者外周血中内皮祖细胞活化度及神经功能的影响。方法 选择2014-06—2016-06南阳南石医院86例脑出血患者，依据治疗方案不同分为2组各43例。对照组仅采取常规微创血肿清除术治疗，观察组在对照组基础上联合自体BMSCs移植治疗，统计对比2组治疗后1周、2周、3周、4周外周血内皮祖细胞活化度与治疗后3周、4周神经功能缺损评分、日常生活能力评分及神经营养因子[神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)]水平。结果 观察组治疗后1周、2周、3周、4周内皮祖细胞活化度较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组治疗后3周、4周神经功能缺损评分较对照组降低，日常生活能力评分均较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组治疗后3周、4周NGF、BDNF水平均较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 对脑出血患者应用自体骨髓间充质干细胞移植治疗效果显著，可明显减轻患者神经功能损伤，提高内皮祖细胞与神经营养因子水平，促进其神经功能恢复，提升其日常生活能力。

骨髓间充质干细胞；脑出血；内皮祖细胞；神经功能

脑出血(cerebral hemorrhage)为神经系统常见疾病之一，其年发病率为(60～80)/10万，占全部脑卒中20%～30%，且急性期病死率为30%～40%，生存患者中大部分会遗留不同程度残疾，日常生活能力降低甚至丧失，严重影响其生命健康及生活质量[1-2]。微创血肿清除术为治疗脑出血主要方法之一，可有效清除脑血肿、降低颅内压，但因血肿压迫与血肿清除手术的创伤，患者术后常会遗留神经功能损伤。王旭等[3]研究指出，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)可通过向受损脑组织迁移及分化神经细胞，有利于患者神经功能恢复和重建。本研究为进一步观察自体BMSCs移植治疗对脑出血患者外周血中内皮祖细胞活化度及神经功能的影响，选择86例脑出血患者进行分组比较，报道如下。

1 资料及方法

1．1 一般资料 选择2014-06—2016-06南阳南石医院86例脑出血患者，依据治疗方案不同分为2组各43例。入选患者均经头颅CT与MRI检查确诊为脑出血，入院时格拉斯哥昏迷评分为5～12分，血肿相对稳定，均在脑出血后48 h之内入院实施血肿清除术，生命体征稳定，排除合并严重肝肾等其他脏器功能障碍者。其中观察组男28例，女15例；年龄34～76(51.48±8.26)岁；出血部位：基底节区34例，脑桥5例，丘脑4例，合并高血压27例，高血脂症13例。对照组男26例，女17例；年龄35～78(52.18±8.37)岁；出血部位：基底节区33例，脑桥5例，丘脑5例，合并高血压24例，高血脂症14例。2组基本资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经我院伦理委员会审核通过，患者均签署知情同意书。

1．2 方法

1．2．1 治疗方法：对照组仅采取常规微创血肿清除术治疗：依据CT血肿定位结果确定进针位置，穿刺后对血块进行抽吸，首次抽取量为总体积20%，之后注射尿激酶(河北智同生物制药有限公司，国药准字：H13020276)溶解血块并经由软管吸出。观察组在对照组基础上联合自体BMSCs移植治疗：局部麻醉，实施骨穿操作，抽取10 mL骨髓，将粒细胞分离并以DMEM细胞培养基实施培养，3 d后换液加入重组人碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子，继续培养2周，进行传代扩增，之后以全反式维甲酸、胶质源性神经生长因子、脑源性神经生长因子诱导分化，成功后将细胞密度调节至1×109个/L；应用分化后BMSCs分别于血肿清除治疗后第1天、1周、2周、3周、4周时经由腰椎穿刺输注至蛛网膜下腔，输注体积为1 mL；微创血肿清除术操作方法同对照组。

1．2．2 检测方法：外周血中内皮祖细胞活化度检测方法：分别在治疗前与治疗后1周、2周、3周、4周采集2组6 mL外周血，分离单个核细胞并孵育CD34、CD133单克隆抗体之后检测CD34+CD133+双阳性细胞所占比；神经营养因子检测方法：分别于治疗前与治疗后3周、4周采集2组5 mL外周血，离心获得血清，以酶联免疫吸附法检测NGF、BDNF水平。

1．3 观察指标 (1)检测对比2组治疗前与治疗后1周、2周、3周、4周外周血内皮祖细胞活化度。(2)分别在治疗前与治疗后3周、4周应用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)与Barthel指数量表评定2组神经功能缺损状况及日常生活能力，NIHSS得分越高表示神经功能缺损程度越为严重；Barthel指数分值越高说明日常生活能力越强[4]。(3)检测比较2组治疗前及治疗后3周、4周神经营养因子(NGF、BDNF)水平。

2 结果

2．1 2组外周血内皮祖细胞活化度比较 2组治疗前外周血内皮祖细胞活化度相比，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组治疗后1周、2周、3周、4周内皮祖细胞活化度较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组外周血内皮祖细胞活化度比较

2．2 2组NIHSS、Barthel指数评分比较 2组治疗前NIHSS、Barthel指数评分相比，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组治疗后3周、4周神经功能缺损评分将对照组降低，日常生活能力评分均较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2．3 2组NGF、BDNF水平比较 2组治疗前NGF、BDNF水平差异无统计学意义(P>0.05)；观察组治疗后3周、4周NGF、BDNF水平均较对照组提高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表2 2组NIHSS、Barthel指数评分比较分)

表3 2组NGF、BDNF水平比较

3 讨论

脑出血为一种临床常见多发疾病，应用微创血肿清除术虽能有效清除脑血肿、降低颅内高压症状，但术后由于血肿压迫及手术创伤，患者常会遗留不同程度神经功能损伤，如大小便障碍、失语、肢体运动障碍等。

BMSCs为处于骨髓网状间质内的一种非造血干细胞，有多项分化潜能。研究[5]指出，其可横向分化成神经细胞，有助于修复由于出血、外伤、缺血等原因导致的神经损伤，同时BMSCs还可加速神经元生长、防止细胞凋亡，可促进神经功能恢复及重建。此外，BMSCs分离纯化与体外培养技术均较为成熟，具有良好均一性，且来源于自体组织的BMSCs不会产生排斥反应。闫禹等[6]研究报道，BMSCs可下调血肿周围髓鞘相关糖蛋白(MAG)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)等轴突生长抑制因子表达水平，促进脑出血大鼠神经功能恢复。胡炜等[7]研究报道，动员BMSCs主要为单核细胞，可进一步分化为内皮祖细胞，内皮祖细胞可大量动员并且参与到病灶侧支循环形成中，进而加速局部血管形成，促进患者神经功能重建。本研究结果显示，观察组治疗后3周、4周神经功能、日常生活能力均优于对照组，观察组治疗后内皮祖细胞活化度均高于对照组(P<0.05)。提示采用自体BMSCs移植治疗，可提高内皮祖细胞水平，促进患者神经功能重建，提高患者日常生活能力。BMSCs对于神经功能的重建主要依靠多种神经营养因子的生成及分泌，其中NGF可加速神经元发育、促进轴突形成及延长；BDNF能促进神经元分化与成熟并加速轴突再生，且能减轻血肿中毒副产物对于神经细胞的损害。本研究显示，观察组治疗后3周、4周NGF、BDNF水平均较对照组提高(P<0.05)。提示采取自体BMSCs移植治疗，可加速神经营养因子生成及分泌，从而加速神经功能重建。

综上，对脑出血患者应用自体BMSCs移植治疗效果显著，可明显减轻患者神经功能损伤，提高内皮祖细胞与神经营养因子水平，促进其神经功能恢复，提升其日常生活能力。

[1] 曹文锋，谢旭芳，张洪连，等．自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血临床研究[J]．中国实用神经疾病杂志，2014，17(7)：10-12．

[2] 田少辉，许磊，李盼祥，等．老年脑出血血肿周围组织T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3表达及在脑出血发病中的意义[J]．中国老年学杂志，2016，36(6)：1 325-1 327．

[3] 王旭，张志彬，杨宏，等．自体骨髓间充质干细胞动脉和静脉移植治疗急性脑梗死的疗效对比[J]．中国老年学杂志，2015，35(6)：1 483-1 484．

[4] 谭支强．微创穿刺引流术联合干细胞移植治疗对高血压脑出血患者恢复情况、神经功能的影响[J]．海南医学院学报，2016，22(21)：2 512-2 515．

[5] 张化明，杨冰，杨海，等．自体骨髓间充质干细胞移植联合康复治疗高血压脑出血的效果观察[J]．中国综合临床，2014，30(9)：967-969．

[6] 闫禹，王燕琳，宋波，等．骨髓间充质干细胞移植脑出血模型大鼠血肿周围轴突生长抑制因子MAG及OMgp的表达[J]．中国组织工程研究，2012，16(19)：3 457-3 461．

[7] 胡炜，杨枫，唐尤佳．脑出血微创术后自体骨髓间充质干细胞动员对神经功能恢复的影响[J]．中国医科大学学报，2014，43(5)：437-440．

(收稿2017-01-05)

责任编辑：张喜民

Autologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of patients with intracerebral hemorrhage

Wang Hui，Wang Tian

Nanshi Hospital of Nanyang City，Nanyang 473002，China

ObjectiveTo investigate the effect of autologous bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transplantation on the activation of EPCs and Neurological function in peripheral blood of patients with cerebral hemorrhage．MethodsTotally 86 patients with cerebral hemorrhage were admitted to Nanshi Hospital from June 2014 to June 2016．They were divided into groups according to different treatment schemes，each with 43 cases．The control group received routine minimally invasive hematoma removal treatment，while the observation group was treated with autologous BMSCs transplantation on the basis of the control group．The activity of EPCs in peripheral blood between the two groups after 1 week，2 weeks，3 weeks and 4 weeks was compared with the neurological deficit scores，daily living ability scores and neurotrophic factors[nerve growth factor (NGF) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF)]levels at 3 and 4 weeks after treatment．ResultsThe activation rate of EPCs in the observation group after 1，2，3 and 4 weeks was higher than that of the control group．The difference was statistically significant (P<0.05)．After 3 weeks and 4 weeks，the scores of neurological impairment in the observation group were lower than that in the control group，and the scores of daily living ability were improved compared with the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．The levels of NGF and BDNF in the observation group after 3 weeks and 4 weeks were higher than those in the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．ConclusionAutologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation is effective in the treatment of intracerebral hemorrhage．It can obviously alleviate the damage of nerve function，raise the level of EPCs and neurotrophic factors，promote the recovery of nerve function and enhance their daily living ability．

Bone marrow mesenchymal stem cells；Cerebral hemorrhage；Endothelial progenitor cells；Neurological function

R743.34

A

1673-5110(2017)17-0025-03

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.17.008

王辉(1976-)，男，本科。Email：15093036622@163.com