液/质-质色谱法测定蔬菜中氟虫腈残留含量

韩继新，李占军，曹天泽，徐红颖

（1.内蒙古化工职业学院，内蒙古呼和浩特010070；2.内蒙古自治区人民医院，内蒙古呼和浩特010010）

液/质-质色谱法测定蔬菜中氟虫腈残留含量

韩继新1，李占军1，曹天泽2，*，徐红颖1

（1.内蒙古化工职业学院，内蒙古呼和浩特010070；2.内蒙古自治区人民医院，内蒙古呼和浩特010010）

对样品进行氟虫腈的含量测定。采用液/质-质法测定氟虫腈含量，采用石墨化碳作为吸附剂，多壁碳纳米管净化的方式。此方法具有灵敏度高、重复性好、分离效果彻底完全，可操作性好等优点，适合蔬菜中氟虫腈残留含量的测定。

液质-质色谱法；氟虫腈；多壁碳纳米管；蔬菜

Abstract：The fluorine content determination of worm nitrile for samples.LC/MS-MS（liquid mass spectrometry-mass spectrometry）method was used to determine fluorine content of nitrile，used the graphitized carbon as an adsorbent，purification of multi-walled carbon nanotubes.This method has high sensitivity，good repeatability，thoroughly completely separation effect，as well as good operability，suitable for the determination of fluorine worm cyanide residue content in vegetables.

Key words：LC/MS-MS；fipronil；multi-walled carbon nanotube；vegetables

氟虫腈是苯基吡啶类新型高活性杀虫剂，上世纪90年代后期在我国大范围推广及使用，用于防治多种农业害虫。由于氟虫腈对甲克类生物和蜜蜂具有高风险，在水和土壤中降解慢等原因，我国于2009年开始对该农药禁用[1-4]。随着人们生活水平和食品安全意识的提高，氟虫腈等农药在蔬菜水果中的残留引起了人们的高度重视。

目前，氟虫腈最普遍的检测方法有超高效液相色谱-串联质谱法[3]、分散液液微萃取-气相色谱质谱法[4]、气相色谱-电子轰击质谱法[5]、气相-电子捕获法[6]、高压液相色谱法[7]、气相色谱法[8]、液相色谱-串联质谱法[9]、气相色谱-质谱联用法[10]、UPLC-MS/MS（超高效液相色谱-串联质谱，Ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry）[11]。随着LC/MS-MS（液相色谱-串联质谱，Liquid Chromatography/mass spectrometry-mass spectrometry）联用检测技术兴起，由于其灵敏度高、样品用量少、分析速度快等优点，此方法也逐渐应用于农药残留的检测。本文采用了LC/MS-MS方法测定蔬菜中的氟虫腈残留含量，参考文献[12-13]，基于 QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe的缩写，一种用于农产品检测的快速样品前处理技术）萃取的基础上，加以了改进，采用石墨化碳和PSA（N-丙基乙二胺固相吸附剂，primary secondary amine）为吸附剂，多壁碳纳米管净化的方式。QuEChERS的快速富集和多壁碳纳米管的彻底净化，以及LC/MS-MS的高分辨能力相结合，具有灵敏度高、重复性好、分离效果彻底完全，可操作性好等优点，适合蔬菜中氟虫腈残留含量的测定。

1 仪器与试剂

1.1 样品及其来源

芹菜、菠菜、韭菜、白菜、油麦菜、芥菜：呼和浩特东瓦窑菜市场。

1.2 仪器

XEVO TQS-Smicro相色谱串联质谱仪：沃特世科技（上海）有限公司；TGL-16G高速离心机：北京佳缘兴业科技有限公司；JJ-2B捣碎机：金坛市金南仪器制造有限公司；EL104电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司；HH-4恒温水浴锅（50℃～80℃）：金坛市华城润华实验仪器厂；多炭壁纳米管；氮吹仪（型号为ND2001）：杭州瑞诚仪器有限公司。

1.3 试剂

乙腈（光谱纯）：天津市科密欧化学试剂有限公司；甲醇、甲酸、乙酸胺、N-丙基乙二胺、石墨化碳、四氯化碳、丙酮、氯化钠：天津大茂化学试剂厂；试验用水均为超纯水；氟虫腈标准品：农业部环境保护科研监测所。

2 方法

2.1 色谱条件

2.1.1 液相色谱条件

色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱温 40℃；进样体积 1.0 μL；流速：0.3 mL/min。流动相A甲醇，流动相B（0.1%甲酸+0.1%乙酸铵的水溶液），梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序Table 1 Gradient elution program

2.1.2 质谱条件

电离模式：ESI负离子；毛细管电压：2.0 KV；锥孔电压：20.0 V；离子源温度：140℃；脱溶剂温度：550℃；脱溶剂气体流速：650 L/h，锥孔气体流速：50 L/h。离子对条件见表2。

表2 离子对条件Table 2 Ion pair condition

2.2 溶液配制及其样品的预处理

2.2.1 标准溶液的配制

精确称取氟虫腈标准品0.100 0 g适量，用甲醇溶解并定容到100 mL，配置成浓度为10 μg/mL的标准溶液。

2.2.2 样品预处理

取样品中可食用部分，缩分，切碎，混匀，放入粉碎机中粉碎，制成溶液，于-20℃冰箱中保存。

2.2.2.1 氟虫腈的提取

称取处理过的样品20 g于80 mL具塞离心管中，加入40 mL乙腈，用均质器以12 000 r/min，均质2 min，加入5 g氯化钠，振荡，离心机上以5 000 r/min离心5 min，取上层清液20 mL于100 mL烧杯中，加入100 mg PSA（N-丙基乙二胺）和75 mg石墨化碳作为吸附剂，涡旋5 min，于5 000 r/min离心5 min。取上层清液旋转蒸发至1 mL，于离心式管中，加入5 mL纯化水，再加入 30 μL 四氯化碳，振荡 30 s，5 000 r/min 离心使之分层，用注射器吸取底部有机溶液于1.5 mL离心管中，60℃的水浴条件下用氮气吹至近干，再加入乙腈复溶，待净化。

2.2.2.2 氟虫腈的净化

将提取好的样品中加入2 mL丙酮，溶解后，再加入20 mg多壁炭纳米管净化，盖上盖子振荡5 min，将上层清液经过0.2 μm滤膜，待进样。

3 结果与讨论

3.1 提取液的选择

比较甲醇、丙酮和乙腈的提取效果，结果乙腈提取的效果最好。甲醇的提取效果虽然能达到要求，但是不能使有机相和水相有效的分离；丙酮提取效果也可以，但是必须通过二氯甲烷等溶剂萃取，增加了提取步骤；乙腈极性大，穿透力强，并且可以通过盐析使有机相和水相完全分离，更容易通过后续加入吸附剂除去基质物质的干扰。

3.2 吸附剂的选择

吸附剂选择石墨化碳和PSA，加入后可更加有效地去除基质中的干扰物质对待测物出峰的影响，同时可以减少杂质对仪器和色谱柱的损耗。

3.3 净化试剂的选择

净化时选择多壁碳纳米管净化的方式，因其能够有效地去除色素，而且回收率在96.32%～99.35%之间。比较了加入20、25、30、35 mg，回收率由高到低的顺序为 25 mg＞30 mg＞20 mg＞35 mg，考虑到节约试剂的原则，选择了加入25 mg。比较结果见表3。

3.4 线性关系

将氟虫腈标准品溶液逐级稀释成浓度为0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/L 的标准使用液，对照 2.1色谱条件进行测定，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线见图1，其线性回归方程为Y=14.632X+143.22，R为0.999 8。该测定条件下，氟虫腈的标准品的色谱图见图2，保留时间为3.98 min。

表3 净化试剂量的选择Table 3 Selection of the quality of the purifying agent

图1 氟虫腈标准曲线Fig.1 The standard curve of fipronil

图2 氟虫腈色谱图Fig.2 The chromatogram of fipronil

3.5 精密度

精密吸取氟虫腈的使用液浓度为0.04、0.06、0.08 μg/mL分别进样5次，RSD分别为1.6%、2.1%、2.3%、3.2%、2.5%；2.1%、2.7%、1.4%、1.9%、3.0%；2.8%、3.1%、1.4%、2.9%、3.2%；1.2%、2.0%、1.5%、2.3%、3.2%，均小于5%，说明此方法的精密度好。

3.6 回收率

吸取一定体积 80、120、160 μL 的 10 μg/mL 的氟虫腈标准溶液加入20 g样品中，即添加的浓度点为0.004、0.008、0.012 mg/kg，分别加入到芹菜的样品中，经预处理按2.1色谱条件进行测试，计算回收率，结果表明，不同加标量的回收率均在96.67%～100.02%之间，RSD（n=3）均小于5.0%，满足检测的需要，表明本法准确性好，回收率高。回收率结果见表4。

表4 回收试验结果Table 4 Results of recovery rate

3.7 结果

将所有的样品，按照试验条件分别配制供试溶液，按色谱条件分别进样、计算，结果表明，样品中均未有氟虫腈检出。

4 结论

采用了LC/MS-MS方法测定蔬菜中的氟虫腈残留含量，基于QuEChERS萃取的基础上，加以改进，采用石墨化碳作为吸附剂，净化时采用多壁碳纳米管净化的方式。结果QuEChERS的快速富集和多壁碳纳米管的彻底净化，以及LC/MS-MS的高分辨能力相结合，具有灵敏度高、重复性好、分离效果彻底完全，可操作性好等优点，适合蔬菜中氟虫腈残留含量的测定。

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Determination of Fipronil Residues in Vegetables by LC/MS-MS

HAN Ji-xin1，LI Zhan-jun1，CAO Tian-ze2，*，XU Hong-ying1
（1.Inner Mongolia Vocational College of Chemical Engineering，Hohhot 010070，Inner Mongolia，China；2.The Inner Mongolia People's Hospital，Hohhot 010010，Inner Mongolia，China）

2017-03-07

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.032

韩继新（1983—），女（蒙古），讲师，硕士，研究方向：天然药物化学与功能食品研究。

*通信作者：曹天泽（1973—），副主任医师，研究方向：抗肿瘤与功能食品研究。