紫外分光光度法测定晋产白芍芍药苷含量

温建英，李文伟，任 蕾，王京康

（山西中医学院，山西太原030024）

紫外分光光度法测定晋产白芍芍药苷含量

温建英，李文伟，任 蕾，王京康

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：建立晋产白芍中芍药苷含量的紫外分光光度测定方法。方法：用芍药苷为对照品，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）为展开剂，用5%香草醛硫酸溶液为显色剂，采用紫外分光光度法对白芍中芍药苷进行含量测定。结果：在230 nm处测得白芍中芍药苷含量为4.230%，回归方程为y=21.918x+0.059 2，芍药苷标准品在0.008 176～0.040 880 mg/mL浓度范围内与吸光度线性关系良好，加样回收率为95.42%，RSD为2.65%。结论：该方法操作简便、稳定可靠、准确度高，适用于白芍的质量控制。

白芍；芍药苷的含量测定；紫外分光光度法

白芍（Paeonia lactiflora）是毛茛科植物芍药去了皮的干燥根。白芍主产于浙江、安徽等地［1-2］，具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛、平抑肝阳等功效，用于治疗自汗、血虚萎黄、月经不调、腹痛等［3］。国内外对白芍的研究应用主要集中在化学成分、质量控制、药理作用、抗氧化应用等方面。研究表明白芍主要有效成分为白芍总苷，70%以上为芍药苷（paeoniflorin），具有扩张冠状动脉、增加冠脉流量、抗急性心肌缺血、降低血压等药理作用［4-5］。白芍的药用价值高，蕴藏着巨大的开发潜力。近年来，人工种植白芍方法不断改进推广，在山西也成立了白芍的人工种植基地。本文就山西本地所产白芍的指征性成分芍药苷的含量进行测定。

1 实验材料

1.1 实验仪器

QE-300克粉碎机（浙江屹立工贸有限公司），JA4003精密电子天平（上海良平仪器仪表有限公司），十万分之一分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司，型号：FA224），HH-6数显恒温水浴锅，TU-1810紫外可见分光光度计，硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，规格：50 ×100 mm），定性毛细管（上海积裕实验设备有限公司，规格：0.3×100），PHS-4C+智能酸度计。

1.2 药材与试剂

白芍，产自山西省静乐县杜家村，经山西中医学院中药鉴定教研室王兵老师鉴定，本实验所用芍药为正品。芍药苷标准品（中国食品药品检定研究院），三吡啶三吖嗪 （tripyridyl-triazine，TPTZ，Aladdin）（上海伊卡生物技术有限公司），硫酸亚铁、无水乙醇、三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、甲酸、香草醛硫酸均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 白芍中芍药苷的薄层定性鉴别

取白芍粉末0.5 g左右，加50%乙醇10 mL，超声15 min，用滤纸滤过，于蒸发皿中蒸干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供试品；再取芍药苷标准品加50%乙醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。分别用定性的毛细管各吸2管，交叉点于同一硅胶G薄层板上，用三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）为展开剂，展开完成取出，晾干，用5%香草醛硫酸溶液喷洒，以吹风机热风热至有显色斑点出现。在色谱中，对照品和供试品在相同的位置上有相同大小的浅蓝色斑点。结果见图1。

图1薄层色谱图

由图1可见，两份样品与对照品在相同的位置上有相同大小的浅蓝色斑点，说明样品中含有芍药苷成分。

2.2 白芍中芍药苷的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定芍药苷标准品5.11 mg，以50%乙醇溶液定容至25 mL容量瓶中，配制成0.204 4 mg/mL浓度的对照品溶液，摇匀，静置。得芍药苷对照品溶液。

2.2.2 最大吸收波长的确定 取对照品溶液适量，以 50%（V/V）乙醇溶液为参比，于 200～600 nm波长处进行全波长扫描，确定最大吸收波长。结果见图2。芍药苷在230 nm处有最大吸收波长。

图2 芍药苷标准品光谱图

2.2.3 标准曲线的绘制 分别精密移取2.2.1项下芍药苷对照品 0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2 mL于10 mL于5个容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，并以其作为参比，在230 nm处测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标（y），芍药苷浓度为横坐标（x）绘制标准曲线。结果如图3。

芍药苷回归方程为y=21.918x+0.059 2，相关系数r=0.999 5。由图3可知，芍药苷标准品在0.008 176～0.040 880 mg/mL浓度范围内线性关系良好。

图3 芍药苷标准曲线

2.2.4 供试品溶液的制备 白芍饮片粉碎，过80目筛。精密称取白芍粉末1.000 g于250 mL锥形瓶中，加入50%乙醇50 mL，采用超声提取法，提取33 min。减压抽滤，50%乙醇定容至100 mL，摇匀，吸取1 mL原溶液于50 mL容量瓶中，50%乙醇定容至刻度，得样品溶液，即供试品溶液。将一定量的白芍供试品溶液全波长扫描，来确认最大吸收波长。结果白芍的供试品溶液在230 nm处有最大吸收波长。结果见图4。

图4 白芍供试品溶液的光谱图

2.2.5 精密度试验 取适量的供试品溶液，以50%（V/V）乙醇溶液为参比，于230 nm处测定吸光度，平行测定5次代入回归方程计算芍药苷含量。结果见表1。

表1 精密度试验结果

结果：该RSD值为0.27%，证明仪器精密度良好。2.2.6 稳定性试验 取适量的供试品溶液于试管中，分别在 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h 测定吸光度值。结果见表2。

表2 稳定性试验结果

结果：该RSD值为0.64%，证明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验 称白芍粉末5份，每份1 g，精密称定，用2.2.4法制备供试品溶液，在230nm下测定其相应的吸光度值，并计算芍药苷含量。结果见表3。

表3 重复性试验结果

结果：含量的RSD值为2.88%，证明该实验重复性较好。

2.2.8 加样回收率试验 取5份已知含量的样品，每份约50 mg，精密称定，分别加入定量芍药苷对照品溶液（0.204 4 mg/mL）10 mL，在 230 nm处检测吸光度值，计算平均回收率。结果见表4。

表4 加样回收率试验结果

结果：平均回收率为95.42%，RSD为2.65%，证明本法回收率良好，测定结果较准确。

2.2.9 含量测定 平行精密称定白芍粉末5份，各约1.000 g，依照2.2.4制备供试品溶液，以50%乙醇溶液为参比，于230 nm处测定吸光度值，计算白芍饮片中芍药苷含量。结果见表5。经测定吸光度均值为0.245 2，代入回归方程，求得白芍芍药苷含量为0.008 461 mg/mL，占白芍药材粉末百分比为4.230%。

表5 样品含量测定结果

3 讨论

通过紫外分光光度法对山西本地所产白芍饮片中的芍药苷的含量进行测定，经测定芍药苷标准品在0.008 176～0.040 88 mg/mL浓度范围内线性关系良好，白芍芍药苷含量为4.230%，符合《中国药典》的规定。经相应的方法学考察，结果均较为理想。用紫外分光光度法测定白芍中芍药苷的含量，该方法稳定可靠，准确度高，且操作简便，可用于白芍中芍药苷含量的测定。

［1］中国药材公司，测绘科学研究院.中国药材资源地图集［M］.北京：科学出版社，1994：14-15，35-36.

［2］胡世林.中国道地药材原色图说［M］.济南：山东科学技术出版社，1998：112，246.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：6.

［4］张晓燕，工金辉，李铣.白芍的化学成分研究［J］.沈阳药科大学学报，2001，18（1）：30-32.

［5］刘鹰翔，马玉卓.白芍的化学成分和药理研究进展［J］.中草药，1995，26（8）：437-440.

（编辑：张世霞）

Content determination of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba from Shanxi by ultraviolet spectrophotometry

Wen Jianying，Li Wenwei，Ren Lei，Wang Jingkang
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method for determination of Paeoniflorin in Radix Paeonian Alba of Shanxi Province.Methods：The content of peony paeoniflorin was detected by UV with paeoniflorin as reference substance.The solvent system trichloromethane-methanol-ethyl acetate-formic acid（40∶2∶5∶0.2）was used as a developer and 5%vanillin aldehyde sulfuric acid as the spray reagent.Results：The content of Paeoniflorin in the samples was 4.230%.On the basis of statistical analyseso，a regressive equation between concentration（x）and absorbance（y）was established as below：y=21.918x+0.059 2.The standard curve of Paeoniflorin was linear in the concentration range of 0.008 176 to 0.040 88 mg/mL.The average recovery was 95.42%with the relative standard deviation（RSD）2.65%.Conclusion：The method is simple，stable and reliable，accurate and suitable for the quality control of Radix Paeoniae Alba.

Radix Paeonian Alba；determination of the content of the Paeoniflorin；ultraviolet spectrophotometry

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0014-03

温建英，助教，硕士，E-mail：50285213@qq.com