王改平,倪梦梦,裴香萍,孙 琳,魏孟玲,刘红凤
(1.山西中医学院,山西太原030024; 2.山西大医院,山西 太原030032)
高效液相色谱法测定清热止痛胶囊中蒙花苷的含量
王改平1,倪梦梦1,裴香萍1,孙 琳1,魏孟玲2,刘红凤2
(1.山西中医学院,山西太原030024; 2.山西大医院,山西 太原030032)
●中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂,医方是“除疾保性命之术”,而剂则有“调百药齐,和之所宜”之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术,开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。
目的:研究清热止痛胶囊的定量控制方法。方法:采用C18柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸溶液(26∶23∶1),检测波长为 334 nm,柱温为 25 ℃,进样量 10 μL。结果:蒙花苷在 0.092 μg~0.736 μg范围内线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率100.29%,RSD=2.20%(n=6)。结论:该方法简便易行,重复性好,可为清热止痛胶囊的质量控制提供依据。
高效液相色谱法;清热止痛胶囊;蒙花苷
清热止痛胶囊来源于医院制剂,主要由野菊花、延胡索、败酱草、大血藤、紫花地丁、蒲公英、当归、川芎、小茴香等十二味药材组成,具有清热解毒、散寒止痛之功效,主要用于治疗急慢性盆腔炎、盆腔炎性包块(月经期和孕妇慎用)。方中野菊花、延胡索为君药,野菊花清热解毒,延胡索活血止痛,共奏凉血清热、活血止痛之功[1],为盆腔炎热毒炽盛而设。臣药中清热药有败酱草、大血藤、紫花地丁、蒲公英等,其中败酱草清热解毒、消痈排脓、祛瘀止痛[2],大血藤清热解毒、理气活血、祛风杀虫、消肿散结[3],蒲公英、紫花地丁均具清热解毒之功,为治疗痈疮疔毒之要药[4]。方中配伍活血化瘀药当归以及行气药川芎,共奏清热止痛、活血行气之功。小茴香散寒止痛、理气和胃,有助于缓解痉挛、减轻疼痛[5],佐制以上药物寒凉太过。全方以清热止痛作用为主,兼行气。为了有效控制其质量,为其临床应用提供疗效保证,实验采用高效液相色谱法测定清热止痛胶囊中蒙花苷的含量。
美国Waters2996高效液相色谱仪;KQ3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);马头牌架盘药物天平BP-Ⅱ型(上海医疗器械八厂)。
对照品蒙花苷(成都曼斯特生物科技有限公司,批号:MUST-141221207);样品清热止痛胶囊(医院制剂,批号:201501,201502,201503,201504,201505,201506);甲醇(色谱纯,sigma科技有限公司),水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1)为流动相,柱温为25 ℃,蒙花苷检测波长为334 nm,理论塔板数按蒙花苷峰计算应不低于3 000。进样量:10 μL。结果显示:阴性对照在蒙花苷保留时间处无干扰峰出现,结果见图1~图3。
图1 对照品溶液色谱图(蒙花苷)
图2 供试品溶液色谱图
图3 阴性溶液色谱图
取蒙花苷对照品(MUST-141221207批)适量,精密称定,加甲醇溶解制成每1 mL含46 μg蒙花苷的溶液,即得。
取清热止痛胶囊(201501批)粉末(过三号筛)约0.6 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇100 mL,称重,加热回流3 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减去的重量,摇匀后经孔径0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
分别按处方比例及制剂制备工艺制备不含野菊花的阴性样品,再按“2.3”项下方法制备,即得。
分别精密吸取蒙花苷对照品(MUST-141221207批,浓度为 0.046 mg/mL)2μL、4μL、8μL、12μL、16 μL,注入高效液相色谱仪,以进样量 X(μg)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标作图,并进行线性回归,得回归方程为Y=6 000 000X+71 625,r=0.999 6,表明蒙花苷在 0.092 μg~0.736 μg 范围内进样量与峰面积线性关系良好。结果见表1。
表1 蒙花苷对照品溶液线性关系结果
取0.046 mg/mL蒙花苷对照品溶液,在上述色谱条件下重复进样6次,测定峰面积,结果RSD=0.22%。
取同一份供试品(201501批)溶液,按含量测定方法,分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 进样测定,RSD=1.13%。结果表明,蒙花苷在12 h内稳定性良好。
取同一批号(201501批)样品6份,按“2.3”项下方法制备,精密吸取10 μL,按给定的色谱条件进样分析,测得平均含量2.536 mg/g,RSD=1.29%(n=6),表明该方法重复性良好。
称取(201501批)样品6份,每份约0.3 g,精密称定,另精密吸取对照品溶液(0.046 mg/mL)16 mL置锥形瓶中,依“2.3”项方法制备。平均回收率100.29%,RSD=2.20%。结果见表2。
表2 加样回收率试验
2.10 样品含量测定
取样品6批,按“2.3”项方法操作,分别制备供试品溶液,按上述色谱条件测定含量,结果见表3。
由表3可知,每粒胶囊蒙花苷的平均含量为2.568 mg/g,考虑大生产的因素,向下浮动20%,暂规定每粒胶囊蒙花苷的含量不得低于2.054 mg/g。
实验中流动相选择曾采用乙腈-0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液-磷酸(30∶70∶0.06)溶液[6],色谱峰未达到基线分离。后经多次实验摸索,采用甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1)为流动相,色谱峰分离效果较好,无前延和拖尾现象。
表3 样品含量测定
实验中对供试品溶液进行了提取比较,采用甲醇、70%甲醇、50%甲醇等不同提取溶剂,并考察了超声提取 30 min、45 min、60 min 以及回流 1 h、2 h、3 h的不同提取方法,最终确定文中的制备方法。
在对样品进行含量测定时,样品中蒙花苷含量不均,推测可能与原料的产地、药材二次提取、工艺等有关。
蒙花苷为清热止痛胶囊中野菊花中的主要成分,本实验研究表明,以蒙花苷为指标的含量测定方法专属性高,精密度及重复性良好,简单易行,可作为清热止痛胶囊的含量测定方法。
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(编辑:张世霞)
Determination of linarin in Qingre Zhitong capsules by HPLC
Wang Gaiping1,Ni Mengmeng1,Pei Xiangping1,Sun Lin1,Wei Mengling2,Liu Hongfeng2
(1.Shanxi College of Traditional Chinese Medicine,Taiyuan Shanxi 030024;2.Shanxi Dayi Hospital,Taiyuan Shanxi 030032)
Objective:To establish a method for determination of linarin in Qingre Zhitong capsules.Methods:The analysis was performed on a Diamonsil-C18column with a mobile phase of methanol-water-glacial acetic acid (26∶23∶1)solution at a detection wavelength of 334 nm,column temperature was 25 ℃,injection volumes of sample were 10 μL.Results:The content of linarin showed a good linear relationship in the range of 0.092 μg~0.736 μg(r=0.999 6).The average recovery rate was 100.29%,RSD=2.20%(n=6).Conclusion:This method is simple,sensitive,accurate and reproducible.It can provide the experimental basis for quality control of Qingre Zhitong capsules.
HPLC;Qingre Zhitong capsules;linarin
R285
:A
:1671-0258(2017)03-0012-03
王改平,主管中药师,在职研究生,E-mail:122514746@sohu.com
裴香萍,副教授,硕士,E-mail:peixp69@163.com