女性生殖道乳酸杆菌密度与阴道病分类的相关性

黄业亚，唐维政，孙鸿高，许丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南医学院第二附属医院东湖分院检验科，海南海口570203)

女性生殖道乳酸杆菌密度与阴道病分类的相关性

黄业亚，唐维政，孙鸿高，许丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南医学院第二附属医院东湖分院检验科，海南海口570203)

目的探讨女性生殖道乳酸杆菌和细菌性阴道病(BV)、真菌性阴道病(VVC)及滴虫性阴道病(TV)的相关性。方法选取2016年12月至2017年5月在海南医学院第二附属医院东湖分院门诊就诊患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染者100例作为观察组，体检健康人员130例作为对照组。应用阴道微生态图象诊断系统检测阴道分泌物中细菌种类和密度，干化学检测pH、H2O2、白细胞酶和唾液腺酶，将观察组中的BV、VVC及TV患者和对照组健康者中阴道分必物的乳酸杆菌含量及相关指标进行比较。结果BV、VVC及TV患者的pH值分别为(4.8±0.3)、(4.4±0.3)和(5.4±0.4)，均明显高于对照组的(4.1±0.2)，差异均有统计学意义(P＜0.05)；BV、VVC及TV患者的Nugent评分分别为(7.0±1)分、(3.0±1)分和(4.0±1)分，均显著高于对照组的(0.2±0.1)，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)；对照组的H2O2阴性率为100%(130/130)，BV组为5.3%(8/136)，VVC组为18.3%(23/130)，TV组为9%(9/100)，各观察组患者的H2O2阴性率明显低于对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)；观察组患者的乳酸杆菌密度明显低于对照组，阴道加特纳菌/普雷沃菌明显高于对照组，经Ridit分析，差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论乳酸杆菌的缺失或降低是阴道疾病的重要因素，治疗过程中，乳酸杆菌数量的恢复可作为评估疗效的标准之一。

阴道微生态；乳酸杆菌；细菌性阴道炎；真菌性阴道炎；滴虫性阴道病

细菌性阴道病(BV)、真菌性阴道病(VVC)及滴虫性阴道病(TV)是妇科的常见病、多发病。长期以来人们的治疗方法是杀菌杀虫，忽视了阴道微生态的建立，常造成疾病的复发和再感染。自20世纪70年代，加拿大泌尿科医师Andrew Bruc首次提出恢复阴道乳酸杆菌的含量可作为防止阴道感染的概念后，医学界逐渐重视对阴道微生态的重建。近几年对阴道微生态的重建和生殖道疾病防治关系有不少的报道，但多数都是单独报道BV或VVC治疗过程中如何建立阴道微生态平衡，而对于乳酸杆菌和上述几种阴道病的关系鲜有报道。本文回顾性分析近年来在我院妇科门诊就诊且应用阴道微生态系统检测的患者的临床资料，以探讨其乳酸杆菌和BV、VVC及TV的相关性，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2016年12月至2017年5月在海南医学院第二附属医院东湖分院门诊就诊患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染100例作为观察组，体检健康人员130例作为对照组。入选标准：(1)具有临床症状；(2)经微生态检测系统检测发现滴虫、真菌或大量的加特纳菌/普雷沃菌；(3)半年前未经过抗菌、抗滴虫、抗真菌治疗者。排除标准：(1)VVC及TV、VVC和BV、TV及BV混合感染者；(2)糖尿病、HIV感染及其他免疫系统疾病患者。依据BV、VVC和TV感染者分为3个观察组。对照组和3个观察组之间的年龄及未经用药时间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1。

表1 对照组和3个观察组的年龄和之前未用药时间比较(x-±s)

1.2 仪器设备山东仕达思生物产业有限公司生产的阴道微生态检测系统。

1.3 检测方法

1.3.1 标本处理分别取患者阴道分泌物涂片凉干，革兰氏染色油镜镜检，剩下的分泌物加8滴稀释液充分洗脱，取一滴作湿片检测。留取洗脱液进行干化学测定(pH、H2O2、白细胞酶、唾液腺酶测定)。

1.3.2 Nugent革兰氏染色评分以油镜观察，按以下形态区分，革兰氏阳性大杆菌(乳酸杆菌)、革兰氏染色不定的小杆菌(阴道加特纳菌)、革兰氏染色不定的弯曲杆菌(动弯杆菌)。根据每个油镜视野细菌数量，分别用+～++++表示(+：1～9个；++:10～99个；+++：100～1 000个；++++：细菌聚集成团或密集覆盖黏膜上皮细胞)。根据乳酸杆菌、加纳菌/普雷沃菌、动弯杆菌的密度按表2进行Nugent评分(总积分=乳酸杆菌+加特纳菌和普沃菌+动弯杆菌评分)。

表2 Nugent革兰氏染色评分标准

1.3.3 干化学测定将洗脱液滴至干化学测试板中，置微生态测定仪15 min后可测出结果。pH在3.8～4.5、H2O2≥2 μmol/L(阴性)说明乳酸杆菌功能正常，为优势种群。白细胞酶阳性说明有白细胞，或白细胞溶解释放出酶。唾液酸酶阳性说明有加特纳菌/普雷沃菌。

1.4 统计学方法应用SPSS19统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，各组各类菌群密度分布情况比较采用Ridit分析，均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组和各观察组患者的Nugent革兰氏染色评分和pH值比较各患者组患者的pH值均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；各观察组患者的Nugent革兰氏染色评分均显著高于对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，见表3。

表3 对照组与各观察组患者的Nugent革兰氏染色评分和pH值比较(x-±s)

2.2 对照组和各观察组患者的H2O2比较对照组患者H2O2阴性率为100%(130/130)，BV组为5.3%(8/136)，VVC组为18.3%(23/130)，TV组为9%(9/100)，各观察组患者的H2O2阴性率明显低于对照组，差异均具有显著统计学意义(χ2=233.8、195.7、177.8，P＜0.01)。

2.3 各观察组患者和对照组乳酸杆菌、加特纳菌/普雷沃菌、动弯杆菌密集度比较BV、TV及VVC组患者的乳酸杆菌密度均显著低于对照组，差异均有显著统计学意义(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC组患者的加特纳菌/普雷沃菌密度均显著高于对照组，差异均有显著统计学意义(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC组患者的动弯杆菌密度与对照组比较差异均无统计学意义(u＜1.96，P＞0.05)，见表4。

表4 各观察组患者和对照组的乳酸杆菌、加特纳菌/普雷沃菌、动弯杆菌密集度比较[例(%)]

3 讨论

随着医学的发展，疾病的诊断、治疗和疗效的评估逐步从单一因素、局部考虑向多因素和系统性评估转变。中华医学会妇产科分会近10年来对阴道性疾病的诊治和疗效已逐步摒弃了“单一以白细胞升高诊断炎症”的观念。而是从阴道微生态的角度诊断和治疗阴道炎症并及进行疗效评估。检验科也从经典的霉菌加特纳菌或滴虫检测，发展为阴道微生态系统检测。微生态系统不仅可以动态检测阴道菌群的密度、微生物多样性、优势菌群、炎性反应等，而且还可以检测阴道pH、H2O2、唾液酸酶、白细胞酯酶等多个指标，可以向临床提供全面的微生态信息。

本文通过阴道微生态系统检测表明BV组阴道分必物乳酸杆菌密度分布明显低于对照组，经Ridit分析差异有显著统计学意义(P＜0.01)。由于乳酸杆菌减少，产H2O2的量也显著下降，同时pH值明显升高。有研究证明，乳酸杆菌的抗菌性能与扩散抑制物质，主要是乳酸有关；乳酸杆菌产生的H2O2及其他微生物因子，可抑制和杀灭其他细菌增殖[1]。一旦乳酸杆菌在阴道菌群中失去优势，其他菌群就会过度生长，造成阴道菌群的失调，引发疾病[2]。从BV组的Nugent的评分和加特纳菌/普雷沃菌的的密度比较和pH的结果也充分说明这一点，而BV组患者的动弯杆菌的密集度和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，可见本地区细菌性阴道炎主要是由加特纳菌/普雷沃菌引起，而弯动杆菌感染少见。VVC组患者阴道分泌物乳酸杆菌密度分布和对照组相比也低于对照组，Nugent评分和pH值均高于对照组，说明真菌感染时阴道乳酸杆菌处于低水平状态。肖冰冰等[2]报道VVC患者阴道微生态乳酸杆菌可正常，亦可减少或消失。本文也发现有VVB患者阴道分必物乳酸杆菌正常，pH值正常，H2O2下降。但这类患者不多，VVC患者还是乳酸杆减少，pH升高，H2O2阳性为多数。TV患者阴道分泌物乳酸杆菌密度分布和对照组相比明显低于对照组，Nugent评分pH值高于对照组。上述阴道疾患者重阴道分泌物的乳酸杆菌下降程度、pH高低及Nugen评分评分有所不同，但和对照组相比都有显著差异。另外我们还发现，有些镜检标本乳酸杆菌含量达到60%～70%，但干化学测定H2O2阳性，有些没发现乳杆菌的标本却H2O2阴性。因此乳酸杆菌不一定是H2O2阴性，H2O2并非是乳酸杆菌产生，诊断时要根据具体情况作出判断。

综上所述，乳杆菌是维持阴道微生态平衡的重要菌群，其通过粘附定植、免疫调节、分泌细菌素、类细菌素物质等多种途径抑制其他微生物的生长。同时乳酸杆菌自身的生存也容易受到如阴道微环境、性生活等多种因素的影响，导致阴道微生态失衡，诱发多种妇科疾病[3]。在治疗这些疾病的过程中常用杀菌和杀虫的药物，在杀菌杀虫的同时也杀灭了乳酸杆菌，使阴道微生态失去了平衡，很容易造成复发或再感染。据有关文献报道经过抗菌治疗后用乳菌杆菌治疗重建阴道微生态平衡，复发率远远低于单一的抗生素治疗[4-7]。因些在日常生活和疾病的治疗过程中都要注意建立阴道微生态的正常平衡，以提高疗效，降低复发率。

[1]李娜,邱晓红.乳酸杆菌与阴道微生态关系的研究进展[J].凝难病杂志,2016,15(4):432-435.

[2]肖冰冰,刘朝晖.阴道微生态评价在阴道炎中的应用[J].中国妇产科临床杂志,2016,17(6):483-485

[3]刘杰,宁玉梅.乳杆菌在阴道微生态中生存状态的研究进展[J].中国微生态杂志,2016,28(6):733-736.

[4]陈利辉.重建阴道微生态对阴道假丝酵母菌治疗效果观察[J].医学理论与实践,2015,28(13):1770-1771.

[5]赵军,董艳.乳酸杆菌与阴道微生态在治疗阴道炎中的作用[J].临床医药文献杂志,2016,3(21):4310-4311.

[6]郑晶晶,王菲,于聪祥,等.乳杆菌制剂及恢复阴道微生态平衡在细菌性阴道病治疗中的应用研究[J].现代生物医学进展,2016,36(13):7051-7053.

[7]许爱华,张利,刘红梅.小剂量甲硝唑联合乳酸杆菌治疗妊娠期滴虫性阴道病疗效观察[J].河北医药,2014,16(21):3284-3286.

Correlation of lactobacilli and bacterial vaginosis,vulvovaglnal candidiasis and trichomonal vaginitis in female reproductive tract.

HUANG Ya-ye,TANG Wei-zheng,SUN Hong-gao,XU Dan-ni,QIU Hai-ping,PAN Fang-die.Department of Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570203,Hainan,CHINA

ObjectiveTo evaluate the correlation of lactobacilli with bacterial vaginosis(BV),vulvovaglnal candidiasis(VVC)and trichomonal vaginitis(TV)in female reproductive tract.MethodsGynecological outpatients in our hospital from December 2016 to May 2017 were enrolled in the study,including 136 BV patients,126 VVC patients,and 100 TV patients.Besides,130 healthy subjects for physical examination were selected as the control group.Vaginal microecology diagnostic system was used to detect the bacteria and the density of bacteria in vaginal discharge.Dry chemistry method was used to detect pH,H2O2,leukocyte enzymes and salivary gland enzymes.The levels of lactobacilli in BV patients,VVC patients,TV patients,and the control group were compared.ResultsThe pH values were(4.8±0.3)in BV patients,(4.4±0.3)in VVC patients,and(5.4±0.4)in TV patients,which were significantly higher than(4.1±0.2)in control group(P＜0.05).The Nugent scores were(7.0±1)in BV patients,(3.0±1)in VVC patients and(4.0±1)in TV patients,which were significantly higher than(0.2±0.1)in the control group(P＜0.05).The H2O2negative rates were 5.3%(8/136)in BV patients,18.3%(23/130)in VVC patients,and 9%(9/100)in TV patients,which were significantly lower than 100%(130/130)in the control group(P＜0.01).The density of lactobacillus in BV,VVC,TV patients was significantly lower than that in the control group,and that ofGardnerella vaginalis/Prevotella intermediuswas significantly higher than that of the control group(P＜0.05).ConclusionLoss or reduction of lactobacillus is an important factor in vaginal diseases during the treatment process,and the recovery of the number of lactobacilli can be used as one of the criteria to evaluate the efficacy.

Vaginal microecology;Lactobacilli;Bacterial vaginitis(BV);Vulvovaglnal candidiasis(VVC);Trichomonal vaginitis(TV)

R711.73

A

1003—6350（2017）18—3001—04

2017-07-17)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.18.022

黄业亚。E-mail：huangyeya@126.com