Twist和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系

卓 越 梁 冬

(农垦三亚医院呼吸科，海南 三亚 572000)

Twist和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系

卓 越 梁 冬

(农垦三亚医院呼吸科，海南 三亚 572000)

目的探讨Twist和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征、患者预后的关系。方法选取经手术切除的非小细胞肺癌患者共76例和癌旁组织为对照，采用免疫组织化学法检测Twist和VEGF，分析Twist、VEGF与非小细胞肺癌的临床病理特征、预后的关系。结果Twist和VEGF在非小细胞肺癌中阳性表达率(77.63%和80.26%)明显高于癌旁组织(27.63%和25.00%)(P<0.05)；非小细胞肺癌中Twist和VEGF的阳性表达与患者的淋巴结转移相关(P<0.05)；Twist和VEGF阳性表达患者的无病生存率(71.9%和71.7%)低于阴性表达患者(78.9%和81.3%)，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论非小细胞肺癌患者标本中出现Twist和VEGF阳性表达可能易发生淋巴结转移，且阳性表达患者预后较差。

Twist；血管内皮生长因子；非小细胞肺癌；无病生存

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常见的类型，发病率约占肺癌80%〔1～3〕。肿瘤细胞的转移和复发侵袭是目前影响肺癌预后不良的重要因素〔4〕。Twist是具有碱性螺旋-环-螺旋(BHLH)结构转录因子的成员之一，是上皮-间质转变过程中的关键因子，对肿瘤细胞的凋亡有重要影响，是肿瘤侵袭和转移的关键〔5～10〕。血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管生成促进因子，研究证明VEGF在NSCLC肿瘤组织中的阳性表达率较癌旁组织高〔11，12〕。孙景洲等〔13〕研究显示VEGF对促进和培养肿瘤细胞的生长有重要作用。本研究观察Twist和VEGF在NSCLC中的表达及其临床病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取农垦三亚医院2011年1月至2012年12月经手术切除的NSCLC患者共76例。标本经中性甲醛溶液固定、石蜡包埋制成4 μm厚度切片。男45例，女31例，年龄45～80〔平均(53.53±9.72)〕岁。选取76例配对癌旁组织作为对照组。纳入标准：①术前未经过化疗及放疗；②经过病理学确诊为NSCLC〔14〕；③临床资料完整；④签署知情同意书及获得医院伦理委员会批准。排除：①无明确病理诊断；②合并心、肝、肾和造血系统疾病；③妊娠期和精神疾病患者。

1.2试剂和仪器 Twist鼠抗人单克隆抗体、VEGF鼠抗人单克隆抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)，浓度均为1∶50；免疫组化染色剂(深圳中洪博元生物技术有限公司)；磷酸盐缓冲液(PBS，Thermo Fisher Scientific)；二氨基联苯胺(DAB)显色液(北京华越洋生物科技有限公司)。石蜡切片机、烤片机(沈阳誉德电子仪器有限公司)；压力锅(日本SANYO公司)；电泳仪(上海伯楷安生物科技有限公司)。

1.3实验方法 ①免疫组化：标本经二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱水后进行抗原修复，经过高温、灭活细胞内过氧化物酶，经PBS冲洗，5 min/次，共3次，经室温37℃孵育25～30 min，滴加鼠抗人单克隆抗体Twist、鼠抗人单克隆抗体VEGF，保温盒内4℃过夜，PBS冲洗；②显色：DAB显色，按照说明书上严格进行，标本经苏木素复染核；③封片：标本经梯度乙醇脱水，二甲苯透明后用中性树胶封片。

1.4染色结果判定 细胞核或胞质中出现黄色或棕褐色颗粒为阳性表达，以5个高倍视野(400倍)检测1 000个肿瘤细胞，阳性细胞比例评分：阳性细胞计数<5%计0分，计数5%～25%计1分，计数26%～50%计2分，计数51%～75%计为3分；>75%计4分；染色强度：细胞中无着色计为0分，淡棕或淡黄色为1分，棕黄色为2分，深棕色为3分。将染色强度和阳性细胞比例积分相乘，<4分者为阴性，≥4分者为阳性。

1.5随访方式 以电话或门诊的方式对76例患者进行随访，无病生存期(DFS)从手术日至随访截止(2014年12月)。将肿瘤复发、转移及死亡列为事件发生。

1.6观测指标 比较Twist和VEGF的阳性表达率在NSCLC和癌旁组织中的表达差异，分析Twist与VEGF表达与NSCLC患者临床病理特征的关系。统计检查后1年的DFS。

1.7统计学方法 采用SPSS17.00软件进行χ2检验，Spea-rman相关分析，Kaplan-Meier生存曲线分析。

2 结 果

2.1Twist、VEGF在NSCLC组织和癌旁组织的表达 Twist与VEGF蛋白定位于NSCLC细胞的细胞质中，呈现棕黄色颗粒。Twist在NSCLC中阳性表达为59例(77.63%)，VEGF在NSCLC阳性表达为61例(80.26%)。两者阳性表达率均高于癌旁组织〔21例(27.63%)和19例(25.00%)，χ2=38.106,P=0.000;χ2=46.550,P=0.000〕，见图1。

图1 VEGF及Twist在NSCLC中阳性表达(DAB，×100)

2.2Twist、VEGF阴性表达与NSCLC临床病理特征的关系 Twist和VEGF阳性表达与淋巴结转移相关(P<0.05)，与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、分化程度及TNM分期无明显相关性(P>0.05)。见表1。

2.3NSCLC组织中Twist、VEGF阳性表达相关性 Twist和VEGF在NSCLC中阳性表达呈正相关(r=0.894，P=0.000)。

2.4Twist、VEGF表达与NSCLC预后的相关性 见图2、图3。

表1 Twist、VEGF阳性表达与NSCLC临床病理特征的关系〔n(%)〕

图2 Twist表达差异患者的无病生存率

76例NSCLC患者随访时间为3～36(中位20)个月。Kaplan-Meier生存曲线结果显示Twist呈现阳性表达和阴性表达患者随访期间无病生存率分别为71.9%和78.9%，二者无统计学差异(P=0.205)；VEGF阳性表达及阴性表达患者无病生存率分别为71.7%和81.3%，二者无统计学差异(P=0.162)。

图3 VEGF表达差异患者的无病生存率

3 讨 论

研究表明〔15〕，肿瘤细胞在长期缺氧情况刺激下，HIF-1α增高从而促使调控血管新生，促使细胞发生上皮间质转化等途径适应缺氧，从而促进肿瘤的生长和转移。肿瘤细胞获得恶性表型的机制是缺氧的环境下HIF-1α高表达促进细胞分泌VEGF促使血管生成的同时，通过上调Twist促使细胞发生上皮间质转变〔16〕。由此可见，Twist、VEGF在NSCLC组织中的转移、侵袭中起着重要作用。本研究显示Twist、VEGF在NSCLC组织中的阳性表达呈明显正相关，与相关研究结果一致〔17〕，Twist和VEGF高表达与NSCLC患者淋巴转移明显相关，进一步说明Twist和VEGF的高表达可促进NSCLC患者发生淋巴结转移。阎红娥等〔18〕研究显示Twist和VEGF阳性表达与NSCLC患者分化程度相关，VEGF与淋巴结转移、TNM分期相关；孙景洲等〔13〕研究结果表明Twist和VEGF阳性表达与淋巴结转移、浸润深度呈明显相关性。VEGF与Twist互相影响表达，从而诱导上皮间质转变，增加了肿瘤细胞转移侵袭能力而向血管淋巴管发生转移。但本文结果中显示Twist和VEGF与临床分期无关，猜测原因可能与患者病情的特异性及临床分期不一致有关〔19〕。

综上所述，Twist和VEGF在NSCLC癌组织标本中表达较高，Twist和VEGF阳性表达患者出现淋巴结转移较多，且预后较阴性表达患者差，在患者手术预后治疗中应结合两者的检测结果对患者进行必要的检测。

1Jemal A，Siegel R，Ward E，etal.Cancer statistics 2009〔J〕.CA Cancer J Clin，2009；59(4)：225-49.

2李 岩，李 欣，吴爱萍，等.SRF、Slug和E-cadherin在非小细胞肺癌中表达的临床意义〔J〕.中国医刊，2014；49(6)：83-5.

3Petrelli NJ，Winer EP，Brahmer J，etal.Clinical cancer advances 2009：major research advances in cancer treatment，prevention and screening-a report from the American Society of Clinical Oncology〔J〕.J Clin Oncol，2009；27(35)：6052-69.

4冯 凯，胡德宏，张居民，等.Twist与RECK在非小细胞肺癌中的表达及其对预后的影响〔J〕.中国医学创新，2011；8(29)：11-4.

5田家军，徐 伟.Twist基因及其相关因子与肿瘤转移〔J〕.国际耳鼻喉头颈外科杂志，2010；34(1)：10-2.

6杨丽娜，吴 娟，赵 静，等.Twist 和 VEGF 在上皮性卵巢癌中的表达〔J〕.西安交通大学学报(医学版)，2015；26(3)：341-4.

7张 凌，颜 浩，韩 娟，等.Twist、VEGF在肺癌患者组织及血清中的表达〔J〕.四川医学，2015；36(4)：460-3.

8陈 芳，刘文臻，刘云香，等.子宫内膜样腺癌组织Twist和HIF-1α及E-cadherin表达的临床意义〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2015；22(11)：858-62.

9尉春艳，张 熙，孙学军，等.重组质粒pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响〔J〕.山西医科大学学报，2014；45(8)：695-8，785.

10魏 洁，徐 勤，杨丽华，等.Twist在中晚期宫颈癌组织中的表达及临床意义研究〔J〕.昆明医科大学学报，2014；35(1)：25-7.

11Färkkilä A，Anttonen M，Pociuviene J，etal.Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor VEGFR-2 are highly expressed in ovarian granulosa cell tumors〔J〕.Eur J Endocrinol，2011；164(1)：115-22.

12陈建忠，顾利江.肺癌患者血清CEA、NSE、CA19-9和VEGF检测的临床意义〔J〕.中国现代医生，2011；49(8)：28-9.

13孙景洲，金光玉，陈友权，等.TWIST、HIF-1α、VEGF在胃癌中的表达及意义〔J〕.中国免疫学杂志，2012；28(8)：748-51.

14Noman MZ，Messai Y，Carré T，etal.Microenvironmental hypoxia orchestrating the cell stroma cross talk，tumor progression and antitumor response〔J〕.Crit Rev Immunol，2011；31(5)：357-77.

15Patel-Hett S，D′Amore PA.Signal transduction in vasculogenesis and developmental angiogenesis〔J〕.Int J Dev Biol，2011；55(4-5)：353-63.

16颜 浩，韩 娟，徐 英，等.Twist、VEGF在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究〔J〕.四川医学，2011；32(8)：1175-8.

17阎红娥，刘 甡，李 爽，等.Twist蛋白在非小细胞肺癌中的表达水平及其与VEGF的关系〔J〕.中国老年学杂志，2011；31(20)：3944-5.

18姜 瑶，陈叶珊，李振宇，等.Twist和VEGF在非小细胞肺癌中的表达及临床意义〔J〕.临床肿瘤学杂志，2012；17(4)：321-4.

〔2015-07-08修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

R73

A

1005-9202(2017)18-4558-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.057

2014年三亚市医疗卫生创新项目(No.yw1210)

梁 冬(1973-)，女，主任医师，博士后，硕士生导师，主要从事呼吸内科疾病研究。

卓 越(1979-)，男，主治医师，主要从事肺癌临床研究。