miR—21、miR—155、miR—210的临床表达意义及其与淋巴瘤病理特征的相关性分析

冯晓云++++++严玲玲

[摘要] 目的 分析miR-21、miR-155、miR-210的临床表达意义及其与淋巴瘤病理特征的相关性。 方法 选取2014年12月～2016年12月南通市肿瘤医院收治的62例经病理学证实的淋巴瘤患者作为研究对象，分别对淋巴瘤组织及正常淋巴组织中的miR-21、miR-155、miR-210表达量进行测定，同时分析miR-21、miR-155、miR-210表达量与患者年龄、性别、免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表达之间的关系。 结果 淋巴瘤组织miR-21、miR-155、miR-210表达量较正常淋巴组织高，差异有统计学意义（P < 0.05）。免疫分型中NK/T细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表达量均高于DLBCL，MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表达量均高于基因重排，BCL-6蛋白中表达的miR-21、miR-155表达量均低于未表达，差异有统计学意义（P < 0.05）。miR-21、miR-155表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表達有关系，miR-210表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有关系（P < 0.05）。 结论 miR-21、miR-155、miR-210参与淋巴瘤的发生与进展，miR的高表达量对淋巴瘤患者预后造成一定影响，在临床上对miR-21、miR-155、miR-210表达情况进行测定，对后续治疗及预后都具有一定的指导意义。

[关键词] miR-21；miR-155；miR-210；淋巴瘤；病理特征

[中图分类号] R733.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）08（b）-0084-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of miR-21， miR-155 and miR-210 and their correlation with the pathological features of lymphoma. Methods 62 cases of pathologically confirmed lymphoma patients from December 2014 to December 2016 in Nantong Tumor Hospital were chosen as the research objectes. Expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues and normal lymph tissues was determined respectively. And the correlation of age， gender， immunophenotype， MYC gene and B cell lymphoma 6 protein （BCL-6） with miR were also analyzed. Results The miR-21， miR-155 and miR-210 in lymphoma tissues were higher than those in normal lymph tissues， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21， miR-155， miR-210 of NK/T cell lymphoma， mucosa -associated lymphoma in immunological typing were higher than those of DLBCL， miR-21， miR-155， miR-210 of normal arrangement in MYC gene were higher than those of gene rearrangement， miR-21， miR-155 of expression in BCL-6 protein were lower than those of non-expression， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The miR-21 and miR-155 were associated with immunophenotyping， MYC gene and BCL-6 protein expression in lymphoma patients， miR-210 expression was associated with immune classification and MYC gene in patients with lymphoma （P < 0.05）. Conclusion The miR-21， miR-155 and miR-210 participates in the development and progression of lymphoma， the high expression of miR may influence the prognosis of patients with lymphoma. The expression of miR-21， miR-155 and miR-210 in clinic has certain guiding significance for the follow-up treatment and prognosis.

[Key words] miR-21； miR-155； miR-210； Lymphoma； Pathological characteristicsendprint

淋巴瘤是淋巴结及淋巴细胞病变疾病，属于一种免疫细胞恶性病变[1-3]。微小RNA（miR）由高等真核生物基因组编码而成，miR具有与靶基因mRNA碱基定向配对的功能，因此具有引导沉默复合体（RISC）将mRNA降解或阻碍mRNA翻译的作用[4]。研究发现，miR具有一定的特异性和时序性，其表达决定了机体组织和细胞的功能特异性，与机体生长和发育过程的多个环节存在关联，参与机体病毒过程，且与原癌基因有一定的关联[5]。研究发现，与其他恶性肿瘤相比，淋巴瘤患者体内miR-21、miR-155、miR-210表达情况存在明显失调[6-7]。为进一步探讨分析miR-21、miR-155、miR-210的临床表达意义及其与淋巴瘤病理特征的相关性，特对62例经病理学证实的淋巴瘤患者进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2014年12月～2016年12月南通市肿瘤医院（以下简称“我院”）收治的62例经病理学证实的淋巴瘤患者作为研究对象，其中男33例，女29例，年龄30～75岁，平均（58.31±13.38）岁。根据淋巴瘤患者原发部位进行分类：原发胃肠道患者25例，原发头颈部患者24例（鼻咽部11例、扁桃体9例、甲状腺4例），原发其他部位患者13例。免疫分型：弥散性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）型患者14例，NK/T细胞淋巴瘤型患者20例，黏膜相关淋巴瘤型患者28例。MYC基因分类：正常排列23例，基因重排39例。B细胞淋巴瘤6（BCL-6）蛋白情况：表达39例，未表达23例。本研究经过我院医学伦理委员会的批准后正式实施，所有患者及其家属均对本研究目的、检查方法知情同意，主动签署了知情同意书。

1.2 方法

所有研究对象入院后抽取2 mL淋巴瘤组织及正常淋巴组织的静脉血用样本标本，经EDTA抗凝后30 min，离心加速提取血细胞，离心速度定在3000 r/min，时间为5 min，经分离后将离心的血液标本置于-84℃的冰箱待检。一切准备就绪后，以let-7amiRNA作为内参基因，采用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增基因组RNA，采用2%的琼脂糖凝胶电泳检测基因组RNA扩增的目标片段，测定其进行顺序，进而测定miR-21、miR-155、miR-210表达水平；同时设计反应引物，以miR-21、miR-155、miR-210及let-7a颈环RT引物进行RNA逆转录，先于42℃的条件下进行30 min的逆向转录，再将温度升至95℃继续进行2 min的mRNA变性，随后将标本分别置于55、72、95℃的条件下分别进行15、30、30 s的RNA反复扩增，随着温度的降低将荧光信号进行采集，并计算miR-21、miR-155、miR-210的相对表达量。基因相对表达量=目的基因/内参基因。采用免疫组化法对淋巴瘤患者CD10、BCL-6、MUMI蛋白表达情况进行检测并进行免疫分型。

1.3 评价指标

①分别测定正常淋巴组织及淋巴瘤组织中的miR-21、miR-155、miR-210表达量，比较不同组织中miR的表达情况。②分析miR-21、miR-155、miR-210的临床表達与淋巴瘤病理特征的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，多因素相关性采用COX回归分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-21、miR-155、miR-210的临床表达情况

淋巴瘤组织miR-21、miR-155、miR-210表达量均高于正常淋巴组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 miR-21、miR-155、miR-210的临床表达与淋巴瘤病理特征的相关性

2.2.1 单因素相关性分析 免疫分型中NK/T细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴瘤的miR-21、miR-155、miR-210表达量均高于DLBCL，差异有统计学意义（P < 0.05）；MYC基因中正常排列的miR-21、miR-155、miR-210表达量均高于基因重排，差异有统计学意义（P < 0.05）；BCL-6蛋白中表达的miR-21、miR-155表达量均低于未表达，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.2.2 多因素相关性分析 经回归分析结果显示，miR-21、miR-155表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表达有关系，miR-210表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有关系（P < 0.05）。见表3。

3 讨论

近年来，受环境改变和生活方式的影响，国内外淋巴瘤的发病率逐年攀升。该病发病机制尚不明确，但随着病情的进一步发展、恶化，给疾病治愈带来了很大程度的困难，不仅给家庭、社会带来巨大的经济负担，而且患者所承受的痛苦也是难以想象[8-9]。包括淋巴瘤在内的所有肿瘤疾病，都与原癌基因、抑癌基因及信号传导通路等有关，研究发现，与其他恶性肿瘤相比，淋巴瘤患者体内miR-21、miR-155、miR-210表达情况存在明显失调[10]。在实际临床中对淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表达情况进行测定，不但可以指导主治医生对患者病情进展及预后进行相应评估，还可以指导其根据患者实际情况制订合理的治疗方案[11-12]。

本研究结果显示，淋巴瘤组织miR-21、miR-155、miR-210表达量明显高于正常淋巴组织，NK/T细胞淋巴瘤及黏膜相关淋巴瘤类型的淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210表达量明显高于DLBCL，差异有统计学意义（P < 0.05）。DLBCL、NK/T细胞淋巴瘤及黏膜相关淋巴瘤类型的区别在于免疫组化技术检测CD3、CD10、CD20、BCL-6、MUM-1蛋白是否有表达，NK/T细胞淋巴瘤及黏膜相关淋巴瘤患者miR-21、miR-155、miR-210的高表达量与既往研究结果一致[13-14]。另外，回归分析结果显示，miR-21、miR-155表达量与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表达有关，miR-210表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因有关，差异有统计学意义（P < 0.05）。MYC基因属于癌基因的一种，MYC蛋白是MYC基因编码的转录产物，MYC蛋白的形成密切影响着细胞周期，正常细胞处于静止和停止分化的状态，MYC基因无法正常表达，mRNA水平降低，导致MYC基因重排[15]。研究显示，MYC基因重排与淋巴细胞远处转移有关，且中枢系统并发症较为高发，影响淋巴瘤患者的预后[16]。另一方面，miR-21、miR-155表达水平偏高时，对MYC基因的正常序列造成影响，引起基因的重排，进而影响预后[17]。可见对淋巴瘤患者进行miR-21、miR-155、miR-210表达量的测定，对预测患者预后有一定的临床意义[18]。BCL-6基因编码的蛋白有706个氨基酸共同组成，过去的研究发现，大部分DLBCL患者均显示过量表达BCL-6[19]。BCL-6通过与特异的DNA序列结合，可对B细胞发育和功能起关键作用的基因进行转录调控，是调节机体生长发育的重要因子[20]。有研究称，BCL-6异常表达与B细胞淋巴瘤具有一定的相关性，且与淋巴瘤的发展密切相关[21]。本研究显示，BCL-6阴性表达的淋巴瘤患者miR-21、miR-155的表达量较BCL-6阳性表达的淋巴瘤患者高（P < 0.05）。BCL-6与MYC基因重排存在逆相关，BCL-6的阳性表达会引起机体内MYC基因的重排，进而对淋巴组织内浆细胞的分化造成影响；当BCL-6表达受到抑制时，细胞的增殖、分化将受到影响，细胞的凋亡机制也会发生异常，最终导致细胞恶质增殖、分化，引起淋巴瘤的远传转移及进展恶化[22]。本研究证实了miR-21、miR-155、miR-210表达与淋巴瘤患者免疫分型、MYC基因及BCL-6蛋白表达的关系，从而提示实际临床治疗中，可对淋巴瘤患者进行miR-21、miR-155、miR-210水平的调节与控制，促进MYC基因的重排及BCL-6蛋白的阳性表达，进而控制淋巴瘤患者病情的进展，保证预后的恢复。endprint

总之，miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤组织内的表达量要高于其他淋巴组织细胞，且与淋巴瘤的发生与进展，miR的高表达量对淋巴瘤患者预后会造成一定影响，在临床上对miR-21、miR-155、miR-210表达情况进行测定，对后续治疗及预后都具有一定的指导意义。

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