HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂中阿奇霉素的含量研究

关慧 岳俊丽

北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司 150000

HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂中阿奇霉素的含量研究

关慧 岳俊丽

北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司 150000

目的：探讨如何利用高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂中的成分含量。方法：采用WatersXbridgeC18柱（150mm ×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH9.0）-乙腈（45∶55）为流动相，流速为0.35mL·min-1，柱温为30℃，检测长为215nm。结果：线性范围为467.70¯1434.51μg·mL-1，r=0.999 758，平均回收率（n=15）为99.9%（RSD=1.1%）；本方法重复性和精密度良好（RSD＜2.0%）。结论：采用HPLC法来测定阿奇霉素的含量，不但准确率高，且重复性较好，操作也简单方便，十分适用于对阿奇霉素干混悬剂进行主要成分含量测定。

阿奇霉素干混悬剂；HPLC法；成分；含量；测定

作为一种常见抗生素，阿奇霉素在抗菌消炎方面有着显著疗效。从药物成分类型上讲，阿奇霉素是一种15元氮环内酯类抗生素，在其他西药抗生素中，红霉素的抗菌效果与阿奇霉素较为相似。但与红霉素相比，阿奇霉素的服用更加方便，且用量更少，效果更好。所以阿奇霉素比红霉素的使用更为广泛，也更受患者的欢迎。目前，阿奇霉素的制剂形式有片、胶囊、干混悬剂等多种类型。其中干混悬剂已经被广泛使用，但是与其他制剂相比，对干混悬剂的含量测定难度更大。现本文就以HPLC法为例，探讨其含量测定方法。

1、仪器与试剂

Waters液相色谱仪（Waters2695泵及自动进样器，Wa-ters2487紫外检测器）；Agilent1100液相色谱仪（四元泵，紫外检测器，自动进样器）；梅特勒 XS105电子天平；色谱柱 WatersXbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）。

阿奇霉素工作对照品（含量946μg·mg-1，批号：0601，石家庄欧意药业有限公司）；阿奇霉素杂质A工作对照品（含量95.4%，批号：aza060801，石家庄欧意药业有限公司）；阿奇霉素干混悬剂（规格为 100mg，批号：063070521、063070301、063070302，石家庄欧意药业有限公司）；乙睛为色谱纯，美国Fisher公司产品；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2、方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流动相：0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH9.0）-乙腈（45∶55）；流速：0.35mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：215nm；进样体积：20μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称定阿奇霉素对照品25mg和阿奇霉素杂质A对照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取阿奇霉素干混悬剂，求出平均装量，将装量差异项下的内容物混匀，精密称取适量（约相当于阿奇霉素25mg），置25mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验

按上述色谱条件，进样对照品溶液20μL，结果理论塔板数按阿奇霉素峰计算≥1 500；阿奇霉素峰与阿奇霉素杂质A峰分离度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子≤2.0，对照品溶液重复进样主峰面积的RSD＜2.0%（n=5）。

2.4 线性关系试验

按对照品溶液阿奇霉素浓度的50～150%制定5个不同浓度梯度，分别是50%、80%、100%、120%、150%，每个浓度梯度平行制备3份样品溶液，共15份样品溶液，每份样品都加入处方量辅料，用流动相溶解并定量稀释制成规定浓度，即得系列供试品溶液。按上述色谱条件，分别进样20μL，记录阿奇霉素峰面积，以浓度（μg·mL-1）为横坐标，以相应的阿奇霉素峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：Y=3.21e+003X-5.36e+004r=0.999758

结果表明：在467.70-1434.51μg·mL-1范围内，阿奇霉素浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.5 回收率试验

溶液制备同线性关系试验供试品溶液，按外标法以峰面积计算供试品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根据含量结果计算回收率，结果5种浓度回收率（n=3）分别为99.2%（RSD=0.5%），98.6%（RSD=0.9%），100.0%（RSD=0.3%），101.2%（RSD=0.7%），100.7%（RSD=0.3%）；平均回收率（n=15）为99.9%（RSD=1.1%）。说明此方法得到的测定结果准确可靠。

2.6 精密度试验

2.6.1 重复性

取同一批（063070521）阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下方法制备所需溶液，平行测定6次的含量结果，RSD值为0.8%。

2.6.2 中间精密度

取3批阿奇霉素干混悬剂，在不同时间，由不同的化验员，按“3”项下方法制备所需溶液分别测定，二人测定的同批含量结果的相对平均偏差063070521为0.8%，063070301为0.6%，063070302为1.6%。

2.7 稳定性试验

按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液（批号：063070521），每间隔1h，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样13次，量取主峰面积，计算几次进样结果峰面积的RSD值。对照品溶液RSD为0.9%，样品溶液RSD为0.8%，表明对照品溶液和样品溶液至少在12h内稳定。

2.8 样品测定

取3批阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下分别进样20μL，按外标法计算含量，结果与抗生素微生物法比较见下表。

从表结果可看出本法与药典采用的抗生素微生物效价法测定阿奇霉素干混悬剂的含量无显著性差异。

3、结论

3.1 本文参考有关文献，对流动相的组成进行了探讨，发现采用本文的流动相即0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH9.0）-乙腈（45：55），峰形稳定，分离较好。

3.2 溶剂的选择。由于阿奇霉素干混悬剂的辅料较多，故溶剂选择比较困难。本法采用流动相和乙腈试验对比，结果发现均可溶样，但因纯乙腈毒性较大且价格较贵，故最后溶剂定为流动相。

3.3 样品浓度选择。采用阿奇霉素浓度为 1mg·mL-1时峰形对称，和相邻杂质峰分离较好；浓度过大，峰拖尾严重且辅料量大而不好过滤；浓度过小，准确度受影响。

3.4 干扰试验 将溶剂和按处方工艺配制不含阿奇霉素的空白辅料，按“3”项下方法制备空白供试液，记录色谱图，结果显示空白溶剂和空白辅料对本法测定无干扰。见图1。

图1 HPLC色谱图A-空白基质；B-对照品；C-供试品

3.5 测定条件流动相的流速±0.05mL，柱温度±5℃，乙腈相比例±5%，缓冲盐pH±0.4等进行小的变动，系统适用性均能达到试验要求，说明此方法适用范围较广。

综上所述从实验结果可以看出，使用高效液相色谱法对阿奇霉素干混悬剂中的阿奇霉素含量进行测定，不但具备简单方便的特点，且准确性和重现性都很好，样品溶液也较为稳定，由此可见，HPLC法是一种很好的阿奇霉素干混悬剂含量测定方法。

[1]曾国富，黄玉英.HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂中阿奇霉素的含量[J].海峡药学，2014（3）：66-67.

[2]吴燕，刘园，徐荣.HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂的有关物质[J].中国药房，2011（4）：371-373.

[3]程红杰，张晔.HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂的溶出度[J].药学研究，2010，29（5）：280-282.

R915.877

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1672-5018（2017）02-011-1