HPLC法测定刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量

焦玉红

哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心 150076

HPLC法测定刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量

焦玉红

哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心 150076

目的：采用高效液相色谱法对刺五加注射液中总异嗪皮啶进行含量测定，并对方法的适用性进行考察。方法：采用Agilent Zorbax Eclipse XDB色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)，以乙腈-水-磷酸(95∶4∶1)作为流动相，在341nm波长进行检测，流速1.0ml/min，进样量为10μl，柱温为40℃。结果：该方法在27.06～541.24μg/ml范围内线性关系良好、该方法溶液稳定性、精密度、加样回收率良好。结论：本方法用于刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量测定，准确且易于操作。

高效液相色谱，刺五加注射液，总异嗪皮啶，含量

刺五加来源于五加科植物刺五加，用药部位为根和根茎，刺五加具有益气补虚、补肾安神、健脾和胃之功效，常用于治疗食欲不振、体虚乏力，腰膝酸痛等病症[1]。刺五加经过提取灭菌后制得的注射液在临床广泛用于治疗心脑血管疾病，具有确切的治疗效果[2]。异嗪皮啶( Isofaxidin) 是刺五加中主要活性成分之一，其含量的高低是评价刺五加质量优劣的重要指标之一。本文采用高效液相色谱法对刺五加注射液中总异嗪皮啶进行含量测定，并对方法的适用性进行考察，为后续质量控制方法的深入研究提供支持。先将研究过程及结果报告如下：

1.仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent1260 UV检测器 美国安捷伦公司）

电子天平（BS124S 德国赛多利斯公司）

1.2 试药

刺五加注射液（哈尔滨珍宝制药有限公司生产，批号161214，规格每支20ml）

异嗪皮啶对照品（中国食品药品检定研究院生产，110837-201608，含量99.2%）

试验用水为经过二次蒸馏处理的纯化水

乙腈、甲醇为色谱纯（迪马科技公司）

磷酸为色谱纯（天津科密欧公司）

2.色谱条件与系统适用性试验

采用Agilent Zorbax Eclipse XDB色谱柱(4.6mm×200mm，5 μm)，以乙腈-水-磷酸(95∶4∶1)作为流动相，在341nm波长进行检测，流速1.0ml/min，进样量为10μl，柱温为40℃。

精密称取异嗪皮啶对照品13.64mg置25ml量瓶中，加甲醇适量溶解，稀释至刻度，摇匀作为对照品贮备液。精密量取刺五加注射液10ml置250ml锥形瓶中，加甲醇 60ml，超声处理45min后放冷，抽滤，取适量甲醇将滤渣冲洗干净后，将滤液收集置沸水浴蒸干，用少量甲醇溶解残渣并用少量甲醇多次冲洗，合并冲洗液转移至10ml量瓶中，定容后摇匀。

3.方法学研究

3.1 线性关系研究

分别精密量取对照品贮备溶液适量，分别加甲醇稀释制成含异嗪皮啶 27.28μg/ml、54.56μg/ml、109.12μg/ml、272.8μg/ml、545.6mlμg/m的溶液。分别精密吸取上述溶液各10μl 注入色谱仪，记录图谱。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程： y=19.953x+3.027(r2=0 9999)，线性范围为27.28～545.6μg/ml。

3.2 溶液稳定性研究

精密量取对照品贮备溶液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。溶液完成配制后的第 0、1、2、4、6、8小时精密量取10μl 注入高效液相色谱仪，每个时间点进样一针，记录峰面积。6次测定峰面积分别为 1092.24、1084.67、1091.33、1082.34、1089.49、1067.21，6次测定 RSD为 0.87%。结果表明：异嗪皮啶溶液在8小时内基本稳定。

3.3 精密度试验

取刺五加注射液市售品（批号：161214），分别取相同批号样品6份分别制备供试品溶液, 取上述溶液10μl 注入色谱仪，记录峰面积，计算相对标准偏差。6次测定峰面积分别为1066.7、1072.54、1071.38、1069.37、1079.34、1080.95，6次测定RSD为0.53%。结果表明：该方法精密度良好。

3.4 精加样回收率试验

分别量取异嗪皮啶对照品贮备液0.5ml、1.0ml和2.0ml各3份置于 10ml量瓶中，分别加入刺五加注射液（批号：161214）供试品溶液 5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取上述溶液 10μl注入色谱仪，记录峰面积。计算异嗪皮啶含量，计算回收率和相对标准偏差。具体结果如下：

加入量（μ g）测得量（μ g）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)27.06 27.09 100.11 99.92 0.41 27.06 26.98 99.70 27.06 26.89 99.37 54.12 54.22 100.18 54.12 54.37 100.46 54.12 53.95 99.69 108.25 107.66 99.45 108.25 107.92 99.70 108.25 108.44 100.18

3.讨论

我国刺五加药材资源储备丰富，剌五加的化学成分以及药理作用研究开始于上世纪五十年代，科研工作者们发现并证实了刺五加药材中的多种活性成分，并对其其药理作用进行了深入研究，目前我国生产并投入临床使用的为刺五加混合物成分 [3]。《中国药典》2010年版中对刺五加药材测定紫丁香苷含量进行质量控制[4]。中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十八册WS3-B-3425-98中对刺五加注射液测定总黄酮含量进行质量控制。本文建立高效液相色谱法测定刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量，该方法在27.06～541.24μg/ml范围内线性关系良好、该方法溶液稳定性、精密度、加样回收率良好。本方法用于刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量测定，操作简便、准确。

[1] 汪琢, 姜守刚, 郭晓帆,等.刺五加中异嗪皮啶提取工艺优化及其抗肿瘤、抗氧化活性研究[J].天然产物研究与开发,2015, 27(6):1092-1098.

[2] 范惠霞, 邓志鹏, 王福文,等.刺五加注射液在正常大鼠与脑缺血-再灌注损伤疾病大鼠体内药动学比较[J].中成药,2015, 37(6):1215-1221.

[3] 樊星, 闫静.刺五加的研究进展[J].医药,2016(1):00297-00297.

[4] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部.北京:化学工业出版社,2010:192-193..

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1672-5018（2017）05-279-01