三种方法检测布鲁氏菌病病原的结果比较

李敏，李俐睿，岳建国，周立新

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

三种方法检测布鲁氏菌病病原的结果比较

李敏，李俐睿，岳建国，周立新

（四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

本试验采用试管凝集、虎红凝集和金标卡检测三种方法对3141份牛羊血清进行布鲁氏菌病病原检测，并对检测结果的敏感性、特异性和符合率进行分析，比较三种方法的一致性。结果证明这三种方法的敏感性都能达到100%，均能够检出全部阳性样品，其中虎红凝集试验和金标卡检测的特异性相对试管凝集试验而言能达到99%以上水平，虎红凝集试验的特异性和符合率稍高于金标卡检测，这两种方法均可用于对日常布病病原的筛查。

布鲁氏菌病；试管凝集试验；虎红凝集试验；金标卡检测法

布鲁氏菌病是一种变态反应性传染病，由布鲁氏菌属细菌入侵人体所引起，属人畜共患疾病[1-2]。布病严重影响家畜的生产力发挥和动物产品安全，给畜牧业发展造成了严重的经济损失[3]。我国将布病列为二类动物疫病，是法定检疫、扑杀被感染家畜的三大疫病（口蹄疫、布病和结核病）之一[4]。

目前，国家标准规定的布鲁氏菌病检测方法主要采用虎红平板凝集试验、全乳环状试验、试管凝集试验和补体结合试验[5-6]，适合于实验室检测的方法主要为虎红凝集试验和试管凝集试验。虎红凝集试验检测成本低、敏感性强、操作简单[7]，且反应快、耗时短，适合布病大规模血清学初筛。但其容易诱发交叉凝集反应，出现假阳性，特异性不强，需要加做其他试验来验证结果准确性[8]。试管凝集试验相对于虎红凝集试验来说，耗时较长（至少24h），操作步骤复杂，不适合大规模样品初筛，适合小量样品检测，但其特异性、准确性均高于虎红凝集试验[9]。总体来说，这两种方法各有利弊，一般采用虎红凝集试验进行初筛，试管凝集试验进行复核。但由于两种方法的结果判定均为肉眼判定，因此存在一定的误差。近年来，市面上推出了一种利用胶体金免疫层析原理制作的金标卡试剂，该检测方法方便快捷，易于判定结果，适合于大规模初筛检测，但其与虎红和试管凝集试验的符合率有待进一步的验证。本试验选取了市面上某厂家的金标检测卡，与虎红和试管凝集试验进行比较，现将结果报告如下：

1 试验材料

1.1 样品 牛、羊血清分别采自成都市22个区（市）县的规模场和散养户，共计3141份（其中牛血清128份、羊血清3013份）。样品共覆盖493个规模场，2203个散养户，8个交易场或屠宰场。采样时间从2016年2月至12月。

1.2 试剂

1.2.1 布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原（虎红凝集试验），批号：2016/06/20，购于中国兽医药品监察所。

1.2.2 布鲁氏菌病试管平板凝集试验抗原（平板凝集试验），批号：201501，购于中国兽医药品监察所。

1.2.3 布鲁氏菌病抗体快速检测卡（金标卡快速检测试验），批号：2301DG002，购于Y厂家。

1.2.4 布鲁氏菌病阳性血清（批号：201401），布鲁氏菌病阴性血清（批号：201403），均购于哈药集团生物疫苗有限公司。

2 试验方法

2.1 试验设计 将采集的所有样品用三种试验方法（平板凝集试验、虎红凝集试验和金标卡试验）进行检测，其中虎红凝集和金标卡试验各做一次重复。

2.2 结果判定 试验步骤严格按照GB/T 18646-2002动物布鲁氏菌病诊断技术和试剂盒说明书进行。所有试剂都在有效期内，试验结果按规定判定。

2.3 数据处理 以试管凝集试验数据为基准，计算另外两种试验方法相对于试管凝集试验的特异性、敏感性、和符合率，选出两种相对稳定且符合率高的方法，用于日常检测工作。

3 结果与分析

3.1 检测结果 用以上三种试验方法检测3141份牛、羊血清样品，结果见表1。

表1 三种试验方法检测结果汇总 份

3.2 检测结果分析

根据三种方法的检测结果比较分析，分别计算虎红凝集试验和金标卡试验相对于试管凝集试验的敏感性、特异性和符合率，结果见表2。

表2 两种试验方法的敏感性、特异性和符合率比较

经检测，试管凝集试验检测到117份阳性样品，另外两种方法也检测出阳性，其检测敏感性均为100%（117/117）。特异性如下：虎红凝集试验为99.74%（3016/3024）、99.67%（3014/3024），金标卡试验为 99.40%（3006/3024）、99.60%（3 012/3024）。相对于试管凝集试验，检测结果符合率：虎红凝集试验为99.75%[（117+3016）/3141]、99.68%[（117+3014）/3 141]，金标卡试验为99.43%[（117+3 006）/3 141]、99.62%[（117+3012）/3141]。

4 分析讨论

本试验通过对三种方法的检测结果进行比较，发现虎红凝集试验、金标卡检测与试管凝集试验的敏感性都能达到100%，均能够检出全部阳性样品。就特异性和敏感性而言，虎红凝集试验和金标卡检测都能达到99%以上水平，而虎红凝集试验的特异性和符合率稍稍高于金标卡检测，可见用虎红凝集试验和金标卡检测方法均能对日常布病病原进行筛查。

在工作中，可以根据实际情况选择检测方法，但虎红凝集、金标卡检测方法与试管凝集试验相比，结果还存在一些假阳性，因此，通过初筛之后的阳性样品应进一步采用试管凝集试验进行确诊。经比较，我们发现胶体金免疫层析法适合在基层推广和使用，且免疫层析技术正朝着定量、高灵敏度、多标记检测等方向发展[10]。在选用金标卡检测方法时，应注意选择正规厂家生产的稳定性好、特异性高的试剂盒，以免造成假阳性高或者特异性差的检测结果，误导诊断。

[1]林爱明，徐勇，刘佳骐，等.早期颅骨修补及脑室腹腔分流在脑外伤治疗中的临床效果[J].实用临床医药杂志，2014，18（24）：61-62.

[2]饶国利，高芳.试管凝集试验与虎红平板凝集试验判断布鲁氏杆菌病的比较[J].疾病监测与控制杂志，2014，8（4）：248.

[3]吴彤，王慧煜，吴绍亮，等.动物布鲁氏菌病快速诊断方法研究进展[J].中国人兽共患病学报，2016，32（8）：746-751.

[4]Tiller R V，Gee J E，Lonsway D R，et al.Identification of an unusual brucella strain（BO2）from a lung biopsy in a 52 year-old patient with chronic destructive pneumonia[J].BMC Microbiology，2010，10（1）：23.

[5]中国农科院哈尔滨兽医研究所.动物布鲁氏菌病诊断技术（GB/T 18646-2002）[S].北京：中国标准出版社，2002.

[6]内蒙古自治区兽医工作站.动物布氏杆菌病控制技术规范（NY/T 907-2004）[S].北京：中国标准出版社，2005.

[7]McGiven J A.New developments in the immunodiagnosis of brucellosis in livestock and wildlife[J].Rev Sci Tech，2013，32（1）：163-176.

[8]Chothe S K，Saxena H M.Innovative modifications to Rose Bengalplate testenhance its specificity,sensitivity and predictive value in the diagnosis of brucellosis[J].Journal of Microbiological Methods，2014，97（1）：25-28.

[9]Galinska E M，Zagorski J.Brucellosis in humansetiology，diagnostics，clinical forms[J].Ann Agric&Environ Med，2013，20（2）：233-238.

[10]任志奇，吴英松，刘天才，等.新型免疫层析技术的研究进展[J].广东医学，2013，34（2）：312-314.

The Comparison of the Results of Three Types of Brucellosis Test Methods

LI Min，LI Lirui，Yue Jianguo，et al.
（Animal Disease Prevention and Control Center of Chengdu City，Sichuan Chengdu 610041，China）

In this study， we selected 3 141 cattle and sheep serums， and detected the brucellosis pathogen of them by the SAT，RBPT and Gold labeled methods respectively，then analyzed the sensitivity，specificity and coincidence rate of the three methods.The results showed that the sensitivity of all the three methods could reach 100%，and could check out all the positive samples.Compared with the SAT method，the specificity of the RBPT and Gold labeled methods could reach 99%，and the specificity of the RBPT was slightly higher than Gold labeled methods.In general，both of the RBPT and Gold labeled methods could be used for the routine screening of brucellosis.

Brucellosis；SAT；RBPT；Gold labeled method

S854.43

B

1001-8964（2017）09-0029-03

2017-05-31

李敏（1986-），女，四川成都人，兽医师，硕士，现从事实验室检测工作。