崇明地区2014年单增李斯特菌监测检测结果

张蓓洁 蔡藕菊 李娉婷

崇明疾病预防控制中心 上海 202150

崇明地区2014年单增李斯特菌监测检测结果

张蓓洁 蔡藕菊 李娉婷

崇明疾病预防控制中心 上海 202150

了解崇明地区常见食品中单增李斯特菌的污染情况。方法：每月随机采取3类食品共216份，采用国标法进行增菌，分离，初筛，鉴定。结果：从216份标本中共检出单核细胞增生性李斯特菌8份（未做其他分型），检出阳性率为3.70%。3类食品污染情况依次是新鲜生肉，冷冻生肉，蔬菜结论：崇明地区的3类食品不同程度的受到单增李斯特菌的污染，应引起重视。

单增李斯特菌，食品，污染

李斯特菌（Listeria monocytogenes），又名单核细胞增多性李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门，取名自约瑟夫·李斯特。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源性病原体之一[1] 。李斯特菌在环境中广泛存在，在很多食品中能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已经被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，2000年WHO食品安全工作将其列为重点检测的食源性致病菌之一。我们在本县每月采样品进行检测分析，结果如下：

1 材料与方法

1.1 样品来源 每月采集 3类食品蔬菜，生猪、牛、鸡、鸭肉等样品，2014年共216份,均来自县超市及农贸市场，肉类一部分为新鲜，一部分为冷冻食品。

1.2 培养基与试剂 李氏增菌液LB(LB1、LB2) 、PALCAM琼脂、三糖铁琼脂、SIM动力培养基、TSB—YE肉汤、TSA-YE琼脂、1%萘啶酮酸钠盐、1%盐酸吖啶黄、来源于上海市疾病预防控制中心，在有效期内使用。甲基红和V-P，糖发酵管，来源于杭州天和生物有限公司，在有效期内使用。李斯特显色培养基来源于科玛嘉生物有限公司，在有效期内使用。APIlisteria 103000生化鉴定试剂盒 ，来源于生物-梅里埃公司。

1.3 主要仪器 恒温培养箱、电子天平 细菌鉴定仪

1.4 参考菌株 单核细胞增生李斯特菌 ATCC 54002

1.5 方法

1.5.1 增菌 按照国标[2]以无菌操作取样品25g(mL)加入到含有225 mL LB1增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质 1min-2min;或放入盛有225mL LB1增菌液的均质杯中，8000r/min-10000r/min均质1min-2min.于30ºC±1 ºC培养24h，移取0.1 mL，转种于10 mL LB2增菌液内，于30ºC±1 ºC培养18 h -24h。

1.5.2 分离 取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼脂平板和李斯特氏显色培养基上，于 36ºC±1 ºC培养 24h-48h，观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在 PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷；典型菌落在科玛嘉李斯特氏菌显色培养基上为小的圆形蓝色菌落，周围有白色晕圈。

1.5.3 初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落，分别接种于木糖、鼠李糖发酵管，于36ºC±1 ºC培养24h；同时在 TSA-YE平板上划线纯化，于 30ºC±1 ºC培养24h-48h。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。

1.5.4 鉴定方法 经过上述增菌、分离、初筛出可疑菌落对其进行革兰染色镜检、触酶试验及溶血试验，若结果为革兰，阳性短小杆菌，伞形或月牙形生长，血平板有狭小透明溶血环，过氧化氢酶阳性，MR-VP +/+的可疑培养物接种于APIlisteria 103000生化鉴定试剂盒进行鉴定。

2.结果

2.1 三类食品中李斯特菌的检出情况 从216份标本中共检出单核细胞增生性李斯特菌 8份（未做其他分型），检出阳性率为 3.70%。各类食品的检出情况：新鲜生肉 48份，检出阳性率为8.33%，冷冻生肉72份，检出阳性率为4.17%.蔬菜96份，检出阳性率为1.04%。（见表1）

表1 各类食品中单增李斯特菌的污染检出情况

2.2 8株单增李斯特菌的生化试验结果 8株单增李斯特菌均在血平板上有狭小透明溶血环，过氧化氢酶+，MR-VP +/+，触酶+，木糖-、鼠李糖+, 七叶苷+，APIlisteria 103000生化鉴定试剂盒鉴定结果为单核细胞增生性李斯特菌。

3 讨论

单增李斯特菌在自然界中广泛存在，可以引起蔬菜和食品的污染，从而引起食物中毒。我国目前没有大规模的单增李斯特菌引起的食物中毒，但日常监测中食品上检出的情况，提示我们因单增李斯特菌引起食源性疾病的可能性。崇明地区216份样品中单核增生性李斯特菌的污染率为 3.70%，与国内报道基本一致[3,4]，表明崇明地区存在单核增生性李斯特菌引起食源性疾病的可能性，应引起我们的高度重视，加强食品的管理。

本次的监测中新鲜生肉(鸡肉、猪肉、牛肉、羊肉各一份)的单增李斯特菌检出率为8.33%，提示了上述各种肉类均存在食源性疾病的风险。同时冷冻生肉的单增李斯特菌检出率为4.17%，提示冷冻后的肉类仍能检出单增李斯特菌。单增李斯特菌能在冷藏条件（4 ºC）下生长繁殖，但冷冻后（-20 ºC）也能检出该菌，但冷冻后检出的单增李斯特菌是否具有致病性，值得进一步研究。

[1][美]杰伊，[美]罗西里尼，[美]戈尔登.现代食品微生物学，北京 ：中国农业大学出版社，2008.

[2]林秋云 食品中李斯特菌污染调查极其改良检验方法[B].中国热带医学，2006,6(7):1247-1248.

R473.5

A

1672-5018（2017）05-215-01