不同产地甘松药材的质量评价研究

伍 杰，兰常军，杨 冬，余海清，彭克忠，刘燕云

(甘孜藏族自治州林业科学研究所，四川 康定 626001)

不同产地甘松药材的质量评价研究

伍 杰，兰常军，杨 冬，余海清，彭克忠，刘燕云

(甘孜藏族自治州林业科学研究所，四川 康定 626001)

目的评价不同产地甘松药材的质量。方法 采用ICP-OES、GC-MS、HPLC等方法，测定不同产地甘松药材中甘松新酮、绿原酸、挥发油、常量元素、水分、总灰分的含量。结果11批不同产地甘松药材的水分平均值为9.29%；总灰分平均值为5.98%。11批甘松药材均含有钙、镁、钾、钠4种元素，平均含量分别为 3 802 mg·kg-1、1 236 mg·kg-1、8 662 mg·kg-1和149.2 mg·kg-1，其中来自于泸定磨子沟的甘松样品镁、钾、钠含量明显高于其它10个产地样品。从11个产地甘松药材挥发油中共鉴别出80个化学成分，其中有6个共有成分，分别为桉叶油醇、4-甲氧基苯乙烯、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氢-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-环丙烷[a]萘、(-)-亚叶菊烯、白菖油萜、Espatulenol。11批不同产地甘松药材中绿原酸平均含量为0.27%，甘松新酮平均含量为0.47%；不同产地甘松样品中绿原酸和甘松新酮含量有一定的差异，产于泸定磨子沟的样品中绿原酸含量最高(0.54%)，而甘松新酮在乡城二道桥的样品中含量最高(1.86%)。结论 不同产地甘松药材中的挥发油、常量元素、绿原酸和甘松新酮成分有一定的差异，这可能与不同产地的气候、生长环境、土壤等因素有关。

甘松；质量评价；挥发油；HPLC；常量元素；ICP-OES

甘松为败酱科植物甘松(NardostachysjatamansiDc.)的干燥根及根茎，药用历史悠久，为藏医、中医常用药材。除药用外，在食品、化妆品等领域也被广泛应用，具有较高的经济价值和开发前景。甘松性辛、甘、温，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效，常用于治疗脘腹胀满、食欲不振、呕吐等症[1]。现代药理学研究表明，甘松药材具有抗心律失常、镇静、抗癫痫、抗惊厥、抗抑郁、抗心肌缺血、降血压、解痉、抗菌等诸多作用[2]。

现代研究表明[2]，甘松药材主要含有萜类成分，大多具有挥发性，因此挥发油为甘松药材的主要成分。另外，甘松还含有甘松新酮、绿原酸、白菖烯、马兜Espatulenol，以及微量元素等成分。目前，已有文献[3～4]分别测定了甘松药材中的挥发油、绿原酸、甘松新酮、无机元素等成分的含量，但这些方法大多仅测定了一种、两种或一类成分，而没有多类成分同时检测分析的报道，这显然不符合中藏药多成分、多靶点的整体性作用特征。鉴于此，本研究同时测定了不同产地甘松药材中的多类成分的含量，包括甘松新酮、绿原酸、挥发油、常量元素、水分和总灰分。其中，甘松新酮、绿原酸、挥发油为甘松药材中主要的有效成分，与其临床疗效和质量密切相关；水分、总灰分为药材质量评价的基本指标，一般药材的水分越高，贮藏过程中越容易霉变，药材的质量则越低；而总灰分主要由无机物组成，一般药材的总灰分含量越高，表明可能有泥沙等杂质的残留，则药材的质量越差。此外，常量元素是药用植物生长过程中必不可少的营养成分，与药材的质量形成有着重要的关系。因此，这些成分均与甘松药材的质量息息相关，通过检测分析，可为从整体上评价不同产地甘松药材的质量提供参考依据。

1 仪器与试药

美国Agilent 1260高效液相色谱仪，配备自动进样器和柱温箱；Sartorius BP121s电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；2.5-12型箱式电阻炉(沈阳市节能电炉厂)；ULUP-I-10T优普超纯水机(成都超纯科技有限公司)；CQ-250超声波清洗器(上海必能信有限公司)；电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-OES)(Agilent Technologies)。

绿原酸对照品(批号：PS000630)购自成都普思生物科技股份有限公司；甘松新酮对照品(批号：MUST-16030615)购自成都曼思特生物科技有限公司；镁元素标准溶液(浓度：1 000 mg·L-1；标物号：GSB 04-1735-2004)、钙元素标准溶液(浓度：1 000 mg·L-1；标物号：GSB 04-1720-2004)、钾元素标准溶液(浓度：1 000 mg·L-1；标物号：GSB 04-1733-2004)、钠元素标准溶液(浓度：1 000 mg·L-1；标物号：GSB 04-1738-2004)；乙腈为色谱纯(Fisher)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。本文共收集了11批不同产地的甘松药材，经鉴定其为败酱科植物甘松(NardostachysjatamansiDC.)的干燥根及根茎，药材来源见表1。

2 方法与结果

2.1 甘松中水分、总灰分的测定

水分测定参照《中国药典》2015年版四部通则0832第四法。总灰分测定参照《中国药典》2015年版四部通则2302。不同产地甘松样品的水分和总灰分测定结果见表1。结果，11批不同产地甘松药材的水分在7.35%～10.53%之间，平均值为9.29%。《中国药典》2015版一部规定，甘松药材的水分不得过12.0%，结果表明本研究采集的所有甘松药材样品的水分均符合《中国药典》要求。此外，11批不同产地甘松药材的总灰分在4.06～11.23%之间，平均值为5.98%。

表1不同产地甘松药材中水分、总灰分和4种常量元素的含量测定结果

2.2 甘松中4种常量元素(钙、镁、钾、钠)的测定

取甘松样品约0.2 g，精密称定，置耐压耐高温微波消解罐中，加经纯化硝酸8 ml，静置10 min，再加2 ml双氧水，密闭并按微波消解仪的相应要求及一定的消解程序进行消解。消解完全后，消解液冷却至60 ℃以下，取出消解罐，放冷，将消解液转入25 ml容量瓶中，用少量超纯水洗涤消解罐3次，洗液合并于容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，待测。利用电感耦合等离子发射光谱仪对甘松样品中高含量的钙、镁、钾、钠4种元素进行了定量分析。按外标法计算各批次供试品中钙、镁、钾、钠的含量。测定结果见表1。

结果表明，甘松药材中均含有钙、镁、钾、钠4种常量元素，平均含量分别为 3 802 mg·kg-1、1 236 mg·kg-1、8 662 mg·kg-1和149.2 mg·kg-1。此外，11个样品中采集地为泸定磨子沟的甘松样品镁、钾、钠含量明显高于其它10个产地样品，镁、钾和钠的含量分别达到 1 728 mg·kg-1、13 149 mg·kg-1、573.0 mg·kg-1；采集地为乡城秋松岗的甘松样品，钙含量最高，达到 5 010 mg·kg-1，略高于泸定磨子沟的 4 818 mg·kg-1，明显高于其余9个产地的甘松样品。

2.3甘松药材中挥发油成分的GC-MS分析

2.3.1 挥发油的提取

取不同产地甘松药材粉末约30 g，按照《中国药典》2015年版四部通则2204甲法提取挥发油，经无水硫酸钠干燥，再以1∶5比例加正己烷稀释，取稀释液适量，过0.45 μm微孔滤膜，即得不同产地的甘松挥发油样品。

2.3.2 GC-MS条件

GC条件：安捷伦HP-5MS毛细管色谱柱(30 m × 0.25 μm × 0.25 mm); 柱温50 ℃(保留2 min)，以5 ℃·min-1升温至290 ℃，保持2 min；汽化室温度为280 ℃；载气为高纯He(99.999%)；柱前压为5.54 kPa；载气流量为1.0 ml·min-1；进样量为1 μl; 分流比为100∶1。MS条件：离子源温度为230 ℃；四极杆温度150 ℃；质量范围为35 Amu～550 Amu。

2.3.3 样品测定

不同产地甘松药材中挥发油的GC-MS分析结果见表2。从11个产地甘松药材的挥发油中共鉴别出80个化学成分，其中有6个共有成分，分别为桉叶油醇、4-甲氧基苯乙烯、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氢-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-环丙烷[a]萘、(-)-亚叶菊烯、白菖油萜、Espatulenol。在11个产地中，含量较高的成分主要有1-甲基双环[3.2.1]辛烷(1.55%～9.56%)、(1aR)-1aβ, 2, 3, 3a, 4, 5, 6, 7bβ-八氢-1,1,3aβ, 7-四甲基-1H-环丙烷[a]萘(2.91%～8.74%)、白菖油萜(8.15%～19.00%)、Espatulenol(1.58%～3.41%)。

表2不同产地甘松药材中挥发油GC-MS分析结果

续表2

序号化合物名称理塘金矿洞理塘兔儿山乡城二道桥乡城秋松岗理塘63K理塘45K理塘上业务理塘苗圃泸定磨子沟理塘白塔理塘军马场48十氢二甲基甲乙烯基萘酚-0．170．353．02--1．56---1．77491⁃(4⁃羟基苯基)⁃2⁃丁烯⁃1⁃酮-4．50--5．115．16-6．53-5．474．8450Α⁃毕橙茄醇-1．85--1．57---1．441．81-51佛手苷内酯-0．95--1．141．93-0．45--0．4852(4-甲基苯甲酰基)丙酮-9．48--7．64-----53对氟苯乙腈-0．560．8----0．54-0．220．4754γ⁃衣兰油烯-0．280．37--------55cis⁃Muurola⁃4(15)，5⁃diene-0．29-0．570．340．51-0．400．200．51-56(+)⁃香橙烯--0．111．01---0．62--0．7557L⁃B⁃甜没药烯0．91--0．931．061．160．851．280．421．140．8958赤霉⁃4(15)，7⁃二烯⁃1β。醇--6．3611．78---6．588．627．838．16591⁃甲基⁃3⁃乙基金刚烷--1．83-0．87------604⁃(1⁃甲基乙基)⁃2⁃环己烯⁃1⁃酮---0．430．150．590．150．460．38--61异紫杉醇⁃5⁃酮--0．13--1．77-----621⁃甲基⁃1⁃(2⁃甲基⁃2⁃丙烯基)环戊烷---0．074．04------631，1，3⁃三甲基⁃1H⁃茚---0．12-0．21--0．070．18-64葫芦烯------0．33--0．3365优葛缕酮---0．49-----0．32-66a⁃Selinene--0．660．63-0．410．59--0．640．70671⁃石竹烯---0．27---0．39-0．16-683⁃苯基吡咯烷---0．52-----1．020．50692⁃甲氧基⁃6⁃甲基苯甲酸---0．34-----0．30-702，5⁃二甲基氢醌---0．100．10--0．08-0．12-714⁃乙基⁃2⁃甲基⁃苯酚---0．04-0．11-0．07-0．160．0972别香橙烯----0．13-1．10---0．87732，6，6⁃三甲基⁃1，4⁃环己二烯⁃1⁃甲醛--0．09-0．50------74α⁃法尼烯----0．53--0．16---753，3，6⁃三甲基⁃1，5⁃庚二烯⁃4⁃醇----0．34--0．05--0．2076白菖烯环氧化物--0．14-0．05-0．270．160．340．200．1577γ⁃4⁃二甲基⁃苯丁醛-----0．210．28-0．35--782⁃异丙烯基⁃1，3，5⁃三甲基苯-----3．271．17----795⁃甲酰水杨酸-----0．430．20----80d⁃绿花白千层醇--0．12---1．86-0．37--

图1 绿原酸对照品

2.4 HPLC测定甘松药材中绿原酸和甘松新酮的含量

2.4.1 色谱条件

InertSustain®C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL；检测波长：254 nm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，0～10 min乙腈15%～20%，10 min～20 min乙腈20%～50%，20 min～45 min乙腈50%～75%。在该色谱条件下，甘松样品中绿原酸和甘松新酮与其他色谱峰分离度良好，见图1。

2.4.2 供试品溶液的制备

取甘松样品约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，称定重量，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.3 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸5.00 mg、甘松新酮1.47 mg，分别定容于5 mL容量瓶中，得绿原酸和甘松新酮对照品贮备溶液(浓度分别为1.0 mg·mL-1和0.294 mg·mL-1)。

2.4.4 线性关系考察

精密吸取绿原酸对照品贮备溶液1 ml至10 ml容量瓶中，得绿原酸对照品溶液浓度为0.1 mg·mL-1，分别取绿原酸对照品溶液1 μL、3 μL、5 μL、8 μL、10 μL、12 μL、15 μL，取甘松新酮对照品贮备溶液1 μL、3 μL、5 μL、8 μL、10 μL、12 μL注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，以其对照品峰面积值为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得绿原酸的回归方程为Y=985.85X+ 19.286，r2=0.9993，线性范围为0.1 μg～1.5 μg，甘松新酮的回归方程为Y=1 645.6X+56.977，r2=0.999 2，线性范围为0.294 μg～3.528 μg，其浓度与峰面积线性关系良好。

2.4.5 样品含量测定

取不同产地甘松样品约0.5 g，精密称定，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进行HPLC测定，记录绿原酸和甘松新酮的峰面积，根据标准曲线法计算两种成分的含量，结果见表3。

表3不同产地甘松药材中绿原酸和甘松新酮的含量测定结果

编号产地绿原酸(%)甘松新酮(%)1理塘金矿洞0．210．252理塘兔儿山0．240．493乡城二道桥0．071．864乡城秋松岗0．230．475理塘63K0．260．336理塘45K0．260．187理塘上业务0．240．358理塘苗圃0．400．249泸定磨子沟0．540．3910理塘白塔0．300．2711理塘军马场0．260．30平均值0．270．47

结果表明，11批不同产地甘松药材中绿原酸含量在0.07%～0.54%范围内，平均值为0.27%；甘松新酮含量在0.18%～1.86%范围内，平均值为0.47%。《中国药典》2015版一部规定，甘松药材中甘松新酮含量不得低于0.10%。从表3可知，本研究采集的所有甘松药材中甘松新酮的含量均高于0.10%，符合《中国药典》要求。此外，不同产地甘松样品中绿原酸和甘松新酮含量有一定的差异，产于泸定磨子沟的样品中绿原酸含量最高(0.54%)，其次为理塘苗圃产地样品(0.40%)，而产于乡城二道桥的样品中绿原酸含量最低(0.07%)。与绿原酸不同，甘松新酮在乡城二道桥的样品中含量最高(1.86%)，其次为理塘兔儿山产地样品(0.49%)，而在理塘45K产地的样品中含量最低(0.18%)。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版[M].北京:中国医药科技出版社, 2015, 86.

[2] 袁捷，韩祖成，王敏，等.中药甘松研究概况[J].中国民族民间医药，2012, 21(16)：57～59.

[3] 张旭，胡晓梅，罗霄，等.HPLC测定甘松中的蒙花苷[J].华西药学杂志，2007，22(6): 690～692.

[4] 李艳忙，刘国林，乔晶，等.HPLC 同时测定不同产地甘松中绿原酸和甘松新酮的含量[J].中医药信息，2015，32(6)：27～30.

2017-01-10

伍杰(1975-)，男，本科，高级工程师，主要研究方向为林木培育。

10.16779/j.cnki.1003-5508.2017.04.008

S789.3

:A

:1003-5508(2017)04-0034-05