灭菌后残留水分对外科器械发生二次污染的影响

阿斯古丽·热合曼，阿尼克孜·阿不都热西提，张弘炎

（新疆医科大学第一附属医院消毒配送中心供应室，新疆 乌鲁木齐 830054）

灭菌后残留水分对外科器械发生二次污染的影响

阿斯古丽·热合曼，阿尼克孜·阿不都热西提，张弘炎

（新疆医科大学第一附属医院消毒配送中心供应室，新疆 乌鲁木齐 830054）

目的 探讨残留水分对外科器械二次污染发生率的影响。方法 将手术器械分别置于可重复使用灭菌容器与双层无纺灭菌包中。并设置破坏了包装屏障完整性阳性对照与密封塑料的阴性对照，在蒸汽消毒后0，2，4，8，16天取出包装，并对包装内的陶瓷载体与残余水进行培养。结果 灭菌后可重复使用的容器内的残余水平均值为28.5 mL，双层无纺灭菌包内残余水为39.1 mL。两种包装实验样品内的残留水和陶瓷载体均未培养出微生物。可重复使用的容器内的阳性对照样品在存储0天，2天和4天后发现微生物污染。阴性对照样品则始终保持无菌状态。双层无纺布灭菌包内的载体和残余水样品（包括阳性和阴性对照）培养结果均为阴性。结论 灭菌后残余水分并不会增加外科器械在随后的储存期间发生二次污染的概率。

残留水，外科器械，污染

消毒器械所使用的包装的屏障的完整性是手术器械蒸汽灭菌后维持其无菌状态的关键。空气中的颗粒可能通过屏障进入包装内部并污染消毒后的器械。消毒后，手术器械中的残留水分可能会造成微生物增殖，导致二次污染。因此，通常采用的方法是丢弃消毒后含有残留水分的手术器械，进行二次消毒[1]。但是在实际操作中，这种操作方式延长了外科器械使用的等待时间，增加了成本[2]。本研究使用两种常用的消毒包装，评估蒸汽灭菌后外科器械残留水分对其再次发生微生物感染的影响。

1 方 法

1.1 分组

1.1.1 实验包装

将手术器械分别置于（1）可重复使用灭菌容器（包含适量的一次性过滤纸）与（2）双层无纺灭菌包中。

1.1.2 阳性对照包装（破坏包装屏障的完整性）

（1）不含过滤纸的可重复使用灭菌容器；（2）完成灭菌后立刻在5个不同位置穿孔的双层无纺包装。

实验包装和阳性对照包装均包括3个聚丙烯托盘，每个托盘内均含一套外科器械和5个具有高度微生物结合特性的用于培养微生物的空心陶瓷载体。

1.1.3 阴性对照

将5个用于培养微生物的空心陶瓷载体密封在塑料袋中。

将6个实验包装、1个阳性对照和1个阴性对照作为一组，进行蒸汽灭菌（135℃，18 min，1 min干燥阶段）。灭菌后，将包装存贮在常规货架中，维持环境温度23℃±1℃，相对湿度45%，分别储存0天，2天，4天，8天和16天后，测定各包装内残留水分（灭菌前后包装称重的差值）。

1.2 潜在的微生物污染的评估方法

达到实验要求储存日期后，在层流下无菌打开包装。将陶瓷载体取出并加入到含有10 mL胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）的玻璃培养管中。同时，如果包装中存在残留水，将1 mL残留水与10 mL TSB混合于玻璃培养管管中。将培养管在35℃±1℃条件下孵育0天，2天，4天，8天和16天，目测混浊度判定是否存在微生物污染。

1.3 空气微生物污染

在储存的第2天、4天和1 6天，使用空气取样器（100 L/min，10 min）对储存区域的空气污染进行测定。使用沙鲍洛琼脂培养基培养酵母和真菌，胰蛋白酶大豆琼脂培养基培养细菌。

通过菌落形态，染色和生长特性确定包装内与空气中所培养出的微生物的种类。

2 结 果

在灭菌后，可重复使用的容器内的残余水平均值为28.5 mL（22～35 mL），双层无纺灭菌包内残余水为39.1 mL（31～46 mL）。在第0天和第2天，在可重复使用的容器内存在残留水，但是这两天残留水和陶瓷载体内均未培养出微生物（表1）。储存4天后，可重复使用的容器内不再含残留水。可重复使用的容器内的阳性对照样品在存储0天，2天和4天后发现的污染。阴性对照样品则始终保持无菌状态。双层无纺灭菌包在储存0天，2天和4天后含有残留水，8天后干燥（表2）。双层无纺布灭菌包内的载体和残余水样品（包括阳性和阴性对照）培养结果均为阴性。

表1 可重复使用的容器中二次污染与残余水

表2 双层无纺包装中二次污染与残余水

陶瓷载体或残留水在TSB中培养出的污染物均为凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。储存区域的空气取样发现总空气污染物为10-250 CFU/m3，分离出的空气污染物中比例最高的同样为CNS。

3 讨 论

本研究结果表明，可重复使用的容器和双层无纺布灭菌包装在灭菌后均含有残留水，残留水量在容许限度内[3]。尽管存在残余水分，但所有这些包装残余水或陶瓷载体上没有发生灭菌后的二次污染。在破坏了包装屏障的完整性后，可重复使用的容器内阳性对照品在储存0，2和4天后均被污染，但是双层无纺布灭菌包内的阳性对照却没有培养出细菌。

即使破坏了包装屏障的完整性，仍未发生二次污染，这可能与灭菌包装所处的环境空气被控制在ISO 8级标准[4]相关，这一空气环境中的微生物浓度处于较低水平，使得阳性对照品能够保持无菌状态。对测试包装所处的环境进行定期空气质量监测也证实，储存期间，环境空气中的微生物浓度处于相对稳定的低水平。

同时，本研究结果中存在一些变异性：例如，一些对照样品包装在不止一个陶瓷载体中可培养出微生物，但从同一包装的多个托盘中收集的残留水却仍处于无菌状态。这个结果可能说明进入包装的污染物的数量的确很少，但是也可能是因为实验方法的限制所造成的。此外，如果使用其他方法，例如使用更高级的测试培养液，在包装内包含营养培养基，以及使用更宽范围的培养基和条件，可能会比本研究使用的方法增加测试样品和阳性对照样品的发生二次污染的概率。

在本研究中测定的结局指标是是否存在二次污染，而不是污染程度的变化或者包装屏障的有效性。研究结果显示没有发生二次污染，并且在两种类型的包装之间没有差异。然而，所谓的“无菌”概念，是一个相对的概念，10-6是目前公认的最低的可以接受的保证无菌的水平[5]。确定具有良好统计学信度的无菌状态并非本研究的目的。在后续研究中，可以通过增加样本量解决这一问题。

总之，本研究的结果表明在蒸汽灭菌后，双层无纺包装内残余水分多于可重复使用的容器包装，且存留时间更长。但二者内的残余水分均不会增加外科器械在随后的储存期间发生二次污染的概率，因此适合继续使用。但在这一研究结果被推广使用之前，需要进一步研究。

[1] Association of Perioperative Registered Nurses (AORN). Recommended practices for sterilization.In:Perioperative Standards and Recommended Practices.Denver,CO:AORN 2013:513-540.

[2] 张 剑,梁 辰,张 伟,等.残留水分对过氧化氢气体等离子体灭菌器灭菌管腔器械的影响.中国消毒学杂志,2015,32(5),421-426.

[3] Sterilization-steam sterilizers-large sterilizers.Document EN 285;1997.European Committee for Standardization website. Published 1997.Accessed January 19,2015.

[4] 中华人民共和国卫生部.消毒技术规范[S].2002.

[5] Dunkelberg H,Schmelz U.Determination of the efficacy of sterile barrier systems against microbial challenges during transport and storage.Infect Control Hosp Epidemiol.2009,30:179-183.

本文编辑：赵小龙

Ef f ect of residual moisture on microbial contamination after sterilization of surgical instruments

ASiguli·reheman,ANikezi·abudourexiti,ZHANG Hong-yan
(The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,supply and distribution center,Xinjiang 830054,China)

Objective To investigate the ef f ect of residual moisture on the incidence of microbial contamination after sterilization of surgical instruments.Methods Surgical instruments were placed in a reusable sterilization container or a double-layer non-woven sterilization package,with positive control (destruction of the packaging barrier integrity) and negative control (sealed plastic).0,2,4,8,16 days after steam sterilized,the carrier and residual water were cultured.Results After sterilization, the average residual moisture of reusable container was 28.5 mL,and 39.1 mL in the double layer non-woven sterilization package.The residual moisture and carrier in both kinds of packages were not infected.The positive control samples in reusable containers were microbial contamination after 0,2 and 4 days after sterilized.Negative control samples remained sterile.The carrier and residual water samples (including positive and negative control) in double layer non-woven fabric remain sterile.Conclusion Residual moisture after sterilization does not increase the probability in both kinds of packages of surgical instruments.

Residual moisture;Surgical instrument;Contamination

R612

B

ISSN.2096-2479.2017.08.15.02