hrHPV检测、亚型分析与TCT筛查结果联合在宫颈癌筛查中的应用研究

吴 涛，张俊华，何瑞芬，王 婧，马 雯，李永红，纳文霞，朴文花

·实验研究·

hrHPV检测、亚型分析与TCT筛查结果联合在宫颈癌筛查中的应用研究

吴 涛1,2，张俊华1,2，何瑞芬1,2，王 婧1,2，马 雯1,2，李永红1,2，纳文霞1,2，朴文花1,2

目的初筛不同年龄组 hrHPV阳性标本，同时行HPV亚型分析及液基细胞学检查，了解银川地区HPV感染基因型分布情况，探讨不同卫生资源条件下的宫颈癌筛查策略。方法选取妇科就诊16～70岁女性1 874名，采用新柏氏液基细胞学技术、HC2及HPV导流杂交分型等方法对宫颈刷出物进行检验，对细胞学异常者召回行阴道镜检查。结果HC2初筛阳性率为16.21%，液基细胞学异常率为6.1%，HPV 16型为最常见的HPV感染型别，感染率为 7.8%，HPV阳性率和HPV 16型阳性率均与细胞学病变级别呈正相关性(r为0.253、0.226，P<0.05)。结论HPV核酸检测对宫颈癌的筛查效率高于液基细胞学。HPV亚型分析与HC2在宫颈癌筛查敏感性方面差异无统计学意义，但HC2具备操作简便、筛查成本低等优点，不失为为宫颈癌筛查的首选方法，特别是在卫生资源相对欠缺地区。

HC2；HPV亚型；液基薄层细胞学；宫颈癌筛查

宫颈癌作为女性第三高发癌症，占所有癌症的13%。全球范围内每年有约52.8万妇女被确诊罹患宫颈癌，85%的病例出现在发展中国家，最终导致26.6万因此而丧生[1]。高危型人乳头状瘤病毒(hrHPV)持续感染被认为是浸润性宫颈癌发展的必要条件[2]。宫颈癌筛查已成功帮助降低了宫颈癌的发病率和死亡率，然而，传统宫颈癌筛查方案的几个方面在低资源国家或地区尚未实现[3]。本文以宫颈癌筛查资料为对象进行分类统计分析，并对筛查方法及策略、地区HPV基因型分布进行了讨论和评价，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 宫颈癌筛查资料:收集2015年3月-2017年3月宁夏人民医院妇科的宫颈癌筛查资料，包括hrHPV检测、新柏氏液基薄层细胞学、HPV基因分型检验。患者年龄16～70岁，按照16～20岁、21～30岁、31～40岁、41～50岁及≥51岁年龄划分5组进行统计。

1.2 仪器与方法:德国QIAGEN公司 Rotor Gene Q荧光定量PCR分析仪，德国QIAGEN公司 HPV检测系统，凯普核酸导流杂交仪，凯普KP-TC48扩增仪，美国BD公司 PREPSTAIN自动制片染色仪，所有仪器的操作均按照标准操作程序进行。

1.3 试剂:QIAGEN高危型人乳头瘤病毒检测试剂盒，BD PREPSTAIN自动制片染色仪配套试剂及染液，凯普12+2 HPV多重PCR试剂，凯普HPV导流杂交分型检验试剂，中山达安基因HPV斑点杂交分型试剂，所有试剂的使用均按试剂盒配套说明书制定标准操作程序指导操作。

1.4 统计学方法:计数资料以构成比、百分率表示，组间比较用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各年龄组hrHPV亚型分布情况:对妇科门诊1 874例hrHPV基因型按5个年龄组进行统计分析，结果见表1。

2.2 各年龄组hrHPV亚型检情况:对1874例hrHPV亚型在各年龄组的检出情况进行统计分析，结果见表2。

表1 各年龄组hrHPV亚型构成比

表2 各年龄组hrHPV亚型检出率分析

结果显示，16～20岁组的hrHPV检出率高达69.80%，与总检出率22.80%差异有统计学意义。

2.3 液基薄层细胞学对宫颈上皮细胞病变检出情况:收集5 744例患者采用TCT进行宫颈癌筛查资料进行分析，其中高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)8例(0.14%)、低级别上皮内瘤变(LSIL)47例(0.8%)和不典型鳞状细胞(ASC)90例(1.57%)。

2.4 各年龄组上皮病变分布分析:对145例上皮细胞病变的患者按HSIL、LSIL、ASC分组，分析三种类型上皮细胞病变在各年龄分组的分布情况，见表3。

表3 各年龄组宫颈上皮细胞病变145例的类型分布

结果显示，HSIL与LSIL的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，与ASC的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

根据各年龄组检出hrHPV亚型的构成比进行统计分析，HPV各亚型构成比从高至低，依次为52、16、58、53、39、18、51、33、66、68、31、59、56、45、35型。根据年龄组感染hrHPV亚型分布来看，16～20岁组感染hrHPV亚型前3位的是16、39、52型，21～30岁组则是52、16、58型，30岁以上各组均是52、16、53型，58型则排在第3位。hrHPV感染亚型分布及构成比与以往的一些报道存在差异[4-5]。除16～20岁组以外，其余4个组的52型与58型的构成比无显著性差异。而16～20岁组构成比与其他组不同，是否与标本量、患者就诊构成有关，有待进一步验证。

本研究中，hrHPV阳性的患者年龄最小为16岁，最大为70岁。各年龄组hrHPV的检出率平均为22.80%，16～20岁组的hrHPV检出率高达69.80%，与总的检出率22.80%有显著性差异。由于本地区为回族聚居区，孕育年龄提前现象较为普遍，该年龄段就诊患者多处于性生活活跃期，这一现象究竟是与年龄组相关，还是与样本量和患者就诊构成比相关，或者是一过性感染的检出，仍有待更深入的研究，这将对于青少年女性的性教育、降低HPV感染率有着重要意义。另外，除16～20岁组外，其余4组的hrHPV检出率均接近22%，无显著性差异。

采用TCT进行宫颈癌筛查，其HSIL、LSIL、ASC的检出率依次增高，HSIL、LSIL的检出率无显著性差异，与ASC的检出率有显著性差异。在324例上皮细胞病变中，hrHPV亚型检出率依次为52、16、58、39、33、51、18型，且在HSIL、LSIL、ASC三种类型上皮细胞病变中没有显著性的变化。

对5 222例患者行TCT筛查，其阳性率仅为2.53%。对8 208例标本采用分子生物学方法进行HPV核酸检测，其阳性率达22.80%，与文献报道相近[6-7]。对1 882例HPV阳性的患者进行液基细胞学检查，检出上皮细胞病变294例，检出率15.62%。由此可见，单独使用hrHPV核酸检测对宫颈癌的筛查效率高于TCT，而且存在试验周期短、费用低等明显优势。但hrHPV检测及基因分型检测由于同时存在临床阈值设定、临床灵敏度过高等明显不足，容易检出hrHPV一过性感染。因此，合理选用适合本地区的宫颈癌筛查策略就显得尤为重要，特别是在宁夏作为低资源地区，医疗资源分配不足等问题更为突显。在医疗资源匮乏的地区，可以采用HC2行宫颈癌筛查，因为其具有费用低、检测周期短等优点[8-10]，同时由于设定了很好的临床阈值，一过性感染检出几率很低。经HC2检出的hrHPV阳性患者再进一步采用TCT分流，同时进行HPV亚型检测，分析患者所感染hrHPV基因型，为临床做进一步诊疗提供可靠依据。

[1] Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al.Cancer incidence and mortality worldwide:sources，methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].International Journal of Cancer，2015，136(5):359-386.

[2] Walboomers JM，Jacobs MV，Manos MM，et al.Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide[J].The Journal of Pathology，1999，189(1):12-19.

[3] Fitzmaurice C，Dicker D，Pain A，et al.The global burden of cancer 2013 global burden of disease cancer collaboration[J].Jama Oncology，2015，1(4):505-527.

[4] 黄伟强，杨艳梅.CA125、CYFRA21-1、HPV 联合检测 TCT 诊断宫颈癌的临床价值[J].国际检验医学杂志，2015，36(12)：1644-1646.

[5] 刘金凤.宫颈癌及高危型癌前病变HPV型别分布与多重感染[J].中国妇幼保健，2010，25(16)：2208-2209.

[6] 李红娟，王雅莉，张颖.中原地区妇女宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染各亚型分布特点[J].中国医学创新，2012，9(2)：83-85.

[7] 童红莉，田亚平，温新宇，等.宫颈脱落细胞HPV-DNA分型检测的临床意义[J].军医进修学院学报，2010，31(12)：1184-1185.

[8] 邓健康，陈梦岚，郭晓兰.四川省东北地区女性宫颈病变与感染人乳头瘤病毒基因型的关系[J].重庆医学，2014，43(36)：4914-4916.

[9] 高冬梅，龙梅，张璐，等.新疆维吾尔族宫颈癌组织中 HPV-DNA 表达及存在状态的研究[J].新疆医科大学学报，2014，37(7)：837-840.

[10] 段仙芝，宋艳波，王少明，等.宫颈液基细胞学结果与高危型人乳头瘤病毒的相关性[J].中国肿瘤，2015，24(1)：76-80.

ThecombinationofhrHPVsubtypeanalysisandtheresultsofTCTincervicalcancerscreening

WUTao1,2,ZHANGJunhua1,2,HeRuifen1,2,WANGJing1,2,MAWen1,2,LIYonghong1,2,NAWenxia1,2,PIAOWenhua1,2.

1.DepartmentofMedicalLaboratory,NingxiaPeople’sHospital,Yinchuan,750002,China; 2.TheFirstAffiliatedHospitalofNorthwestUniversityforNationalities,Yinchuan,750002,China

Correspondingauthor:PIAOWenhua,Email:wenhuapiao@163.com

ObjectiveTo screen the hrHPV positive specimen from different age groups,then analyze the subtypes and TCT screening,in order to unveil the HPV distribution of Yinchuan,and search the optimization strategy for cervical cancer screening under the imbalanced medical resource.MethodsA prospective clinical study was made and a total of 1874 women aged 16～70 were selected.Cervical brushes were retrospectively analyzed by thinprep cytologic test (TCT),HC2 and HPV hybridization methods.Those women with abnormal cytological results were referred to colposcopy.ResultsThe positivity of HC2 and cytology was 16.21% and 6.1% respectively.Subtype16 was the most common infective HPV types with a positive rate of 7.8%.Both the total HPV infection rate and subtype16 infection rate were positively associated with the grade of cytological abnormity with a correlation coefficient of 0.253 and 0.226 respectively (P<0.05).ConclusionThis study shows that HPV nucleic acid detection is an effective method than TCT.HPV subtypes analysis and HC2 have approximate sensitivity,but HC2 is easy to manipulate and has the lower cost.For primary screening cervical cancer,it may be the best choice,especially on the worse medical region.

HC2;HPVsubtype;Thinprepcytologictest;Cervicalcancerscreening

1.宁夏人民医院，宁夏 银川 750002 2.西北民族大学第一附属医院，宁夏 银川 750002

朴文花，Email:wenhuapiao@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170814.1453.020.html

10.13621/j.1001-5949.2017.08.0722

R37

A

2017-02-16 [责任编辑]王凯荣