TRIM29、SKP2、MLH1在早期胃癌及癌前病变表达意义的临床研究

贺海燕，张 淼，李 晶，梁沛芬，肖红燕，王 婧，牛牧文，李 静，王 平，朴文花,2

·论 著·

TRIM29、SKP2、MLH1在早期胃癌及癌前病变表达意义的临床研究

贺海燕1，张 淼1，李 晶1，梁沛芬1，肖红燕1，王 婧1，牛牧文1，李 静1，王 平1，朴文花1,2

目的探讨胃镜活检标本中早期胃癌与高级别上皮内瘤变及胃炎TRIM29、SKP2、MLH1抗体表达的差异性，寻找早期胃癌与高级别上皮内瘤变的诊断鉴别方法。方法使用免疫组织化学方法对46例胃炎标本、44例低级别上皮内瘤变组和42例高级别上皮内瘤变胃镜活检标本进行染色观察，采用统计学分析，比较其表达的差异性。结果40例胃炎组中TRIM29无表达，SKP2弱表达，MLH1有3例表达。44例低级别上皮内瘤变组中MLH1全部表达，TRIM29有18例表达，SKP2全部表达。42例早期高级别上皮内瘤变中TRIM29全部表达，SKP2有28例表达，MLH1全部表达。三种抗体在3组间的表达比较差异有统计学意义，且表达程度与胃癌恶性进程有明显相关性。结论TRIM29、SKP2、MLHI三种抗体可以作为胃镜活检标本中胃炎与上皮内瘤变及早期胃癌诊断的可靠标记物。

TRIM29；SKP2；MLH1；早期胃癌

随着现代内镜技术的进步，早期胃癌的病理诊断尤为重要。但早期胃癌的病理诊断却比较困难，目前病理医师仅依靠组织形态对胃癌及癌前病变进行诊断，个人主观性很大，易产生过诊断和漏诊断情况，给患者及临床带来极大风险。筛选几种抗体，用客观指标对可疑病例进行分子、蛋白水平检测，使病理医师对不同病变的判读获得可靠的参考依据是我们研究的重点。本研究旨在了解TRIM29、SKP2和MLH1三种因子在胃炎、早期胃癌和胃高级别上皮内瘤变中的表达特点和差异性。

1 材料与方法

1.1 材料：选取本院2015年1月-2016年3月门诊及住院胃镜活检患者132例作为研究对象，所有病历临床资料完整。所有病历资料，均由两名高年资医师按照WHO2016年诊断标准重新复核。按病理诊断分为胃炎组46例，低级别上皮内瘤变组44例，高级别上皮内瘤变组42例。

1.2 方法：HE及免疫组化染色方法：对所有病理标本均用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4 nm连续切片，切片后行HE染色。染色采用SP法，一抗、二抗及生物素卵白素及DNB显色液均购自北京中杉山生物试剂有限公司，即用型。使用DaKO Autostainer link 48型免疫组织化学自动染色机染色，严格按标准程序操作，用试剂盒提供的阳性切片进行对照，用PBS代替一抗做阴性对照，DAB显色。

1.3 HE诊断标准

1.3.1 胃炎：腺体呈管状，大小形态较均匀一致，细胞核圆形、淡染，染色质颗粒细，无核仁，核膜不明显，无核分裂像。

1.3.2 癌前病变：腺体呈管状，大小形态较不均匀，细胞核圆形、深染，染色质颗粒粗，无核仁或有小核仁，核膜不明显，无或可见分裂像。

1.3.3 早期胃癌：腺体呈管状，大小形态不一致，细胞层次增多，核圆形、卵圆形、深染，染色质颗粒粗，可见核仁，核膜明显，可见分裂像，累及黏膜全层。

1.4 免疫组化结果判断：切片背景清晰，肿瘤细胞根据抗体在胞浆、胞核和胞膜上特异性着色，呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。设阳性及阴性对照。染色部位：TRIM2细胞浆阳性，SKP2细胞核阳性，MLH1细胞核阳性。染色强度：<5%为弱阳性，25%～50%为中等阳性，>50为强阳性。

1.5 统计学方法：应用SPSS 18.0统计软件，计数资料组间比较用χ2检验，不同因子与胃癌恶变程度相关性采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MLH1、TRIM29、SKP2在早期胃癌和癌前病变标本中的表达: 46例慢性浅表性胃炎组中6例TRIM29 阳性，40例阴性；26例SKP2弱阳性，2例中等阳性，18例阴性；MLH1中3例阳性，43例阴性。44例低级别上皮内瘤变组中，44例MLH1强阳性，0例阴性；12例TRIM29弱阳性，6例中等阳性，26例阴性；4例SKP2强阳性，28例中等阳性，12例弱阳性。42例高级别上皮内瘤变组中，40例MLH1强阳性，2例弱阳性，0例阴性；8例TRIM29强阳性，26例中等阳性，6例弱阳性，2例阴性；4例SKP2强阳性，34例中等阳性，4例弱阳性，0例阴性，见表1。

本研究结果显示，三种因子在慢性浅表性胃炎组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组3组 间的表达差异有统计学意义，而且随着病变逐渐加重，三个因子表达逐渐增强，阳性率逐渐增高。

2.2 MLH1、TRIM29、SKP2与胃病变程度的相关性分析： Spearman相关性分析结果显示，MLH1(r=-0.832，P<0.05)、TRIM29(r=-0.666，P<0.05)、SKP2(r=-0.358，P<0.05)和胃恶性变程度具有明显的相关性。三种抗体联合应用，可以用于鉴别诊断胃炎与上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变、上皮内瘤变和早期癌变。

表1 早期胃癌和癌前病变标本中MLH1、 TRIM29、SKP2的表达[n(%)]

3 讨论

胃癌是我国也是我区最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着广大患者的生命健康。目前我国发现的胃癌病例70%为晚期胃癌，手术后经放疗、化疗及生物治疗5年生存率只有30%左右，许多患者临床及病理诊断后已发生广泛转移，失去了手术治疗机会。因此，如何提高早期胃癌的确诊率，做到早诊断、早治疗成为广大病理工作者的一项重要课题。国内外研究资料表明，早期胃癌5年生存率可达90%以上，但早期胃癌的病理诊断仍比较困难，目前缺乏客观的诊断依据。通常低级别上皮内瘤变被认为是癌前病变，而高级别上皮内瘤变被是为早期胃癌，需要内镜下进行治疗，病理工作者的任务是能够明确诊断早期胃癌。

SKP2是F-box蛋白家族成员，主要参与降解CKD抑制蛋白，是细胞由G1期进入S期所必需，SKP2过表达与肿瘤的增殖分化及肿瘤形成密切相关[1-2]，具有癌基因的特性。国内外有关SKP2研究表明[3-4]，SKP2可能成为一些抑制细胞周期的抗肿瘤药物的新靶点。本研究显示，SKP2在慢性浅表性胃炎组和低级别上皮内瘤变组间差异无统计学意义，在低级别上皮内瘤变组间和高级别上皮内瘤变组间差异有统计学意义。说明在胃癌发生过程中，尤其是由低级别上皮内瘤变向高级别上皮内瘤变演变的过程中，随着其表达的升高趋势，参与了胃癌的发生，并且促进胃癌的发展。但本研究同时提示，在由胃炎向低级别上皮内瘤变转化的过程中，SKP2的作用不明显，国内外尚无相关研究报道[5]。结果提示SKP2可以作为早期胃癌和癌前病变鉴别诊断的有意义的标记物。

TRIM29蛋白属于TRIM蛋白家族的成员[6]，是近年来逐渐受到关注的具有多种生物学功能的蛋白，其表达有明显的组织和细胞特异性，推测是一种参与肿瘤的发生和分化的转录调节因子，多种肿瘤细胞表达明显增高[7]。在肺癌和胰腺癌中均有高表达的研究报道，与肿瘤的加速生长和淋巴结转移相关[8]。国内刘春晓[6]研究了TRIM2在肺非小细胞肺癌与癌旁组织中的表达情况，发现TRIM29表达明显高于癌旁组织，国内尚无TRIM29用于早期胃癌的相关研究。本研究显示，TRIM29在慢性浅表性胃炎组和低级别上皮内瘤变组间、低级别上皮内瘤变组间和高级别上皮内瘤变组间均存在明显统计学差异，说明TRIM29参与了胃癌发生的全过程。结果提示TRIM29可以作为胃炎与癌前病变、癌前病变与早期胃癌鉴别诊断的有意义的抗体。在今后的工作中，将进一步验证该抗体的作用及临床意义。

MLH1是人类错配修复基因家族中的一个重要基因，在保持遗传信息的完整性，避免遗传突变的产生具有重要的作用[9-10]，在多种肿瘤组织中均有表达。MLH1基因定位于3p21.3，是DNA错配修复的高密度分布区，启动区CPG岛甲基化后，引起MLH1基因的沉默，导致了错配修复(MMR)的失活，进而导致肿瘤的发生。MLH1基因表达于细胞核，MLH1的功能位点缺陷被认为是肿瘤发病的重要机制，成为今年来研究的热点[11-12]。本研究显示，MLH1在慢性浅表性胃炎组中仅3例表达，但在低级别上皮内瘤变组和高级别上皮瘤组中全部表达。说明在MLH1正常胃黏膜中几乎不表达，但从胃黏膜增生、更新到发生癌前病变甚至早期胃癌的过程中，却不停地发挥错配修复的功能[13]，在恶性病变中持续高表达，MLH1无法区分早期胃癌和癌前病变，但可以作为胃黏膜炎症性病变和上皮内瘤变的有意义的抗体。

本研究结果表明，三种抗体在3组 间的表达比较差异有统计学意义，且表达程度与胃恶性进程存在明显相关性。但同时三种抗体各自又有其表达特点，可以区分胃炎及胃上皮内瘤变，低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变。三种抗体联合应用，必将明显提高早期胃癌及癌前病变的检出率，对提高患者生存率和延长寿命有十分重要的意义。

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Theclinical?significanceofRIM29，SKP2，MLH1inearlygastriccancerandprecancerouslesions

HEHaiyan1,ZHANGMiao1,LIJing1,LIANGPeifen1,XIAOHongyan1，WANGJing1,NIUMuwen1,LIJing1,WANGPing1,PIAOWenhua1,2.

1.DepartmentofAnatomyPathology,NingxiaPeople'sHospital,Yinchuan750002,China； 2.TheFirstAffiliatedHospitalofNorthwestUniversityforNationalities,Yinchuan750002,China

Correspondingauthor:PIAOWenhua,Email:wenhuapiao@163.com

ObjectiveTo explore the diversity of TRIM29,SKP2,MLH1 in gastroscope biopsy specimens of early gastric cancer,high-grade intraepithelial neoplasia and gastritis in order to look for the differential diagnosis methods.to the early gastric cancer and high level intraepithelial neoplasia.MethodsThe differences of the expression from Specimens in 40 cases of gastritis,44 cases of low level intraepithelial neoplasia and 42 cases of high level intraepithelial neoplasia gastroscope were performed by immunohistochemical methods.ResultsTRIM29 were no expressed,while SKP2 weak expressed,3cases had MLH1 in 40 cases with gastritis group; MLH1 were all expressed,while TRIM29 had 18 cases expression,SKP2 all expressed in 44 cases of low level intraepithelial neoplasia group; TRIM29 were all expressed in the group,SKP2 28 expressed,MLH1 all expressed in 42 cases of high level intraepithelial neoplasia.The expression level among three kinds of proteins was significantly difference,and the expression level was related with gastric malignant process.ConclusionTRIM29,SKP2,MLHI can be used as a reliable marker of early diagnosis in gastric cancer and intraepithelial neoplasia.

TRIM29;SKP2;MLH1;Earlygastriccancer

宁夏自然科学基金项目(NZ1502)

1.宁夏人民医院病理科，宁夏 银川 750002 2.西北民族大学第一附属医院，宁夏 银川 750002

贺海燕(1963-)，男，河南籍，主任医师，从事临床病理诊断工作

朴文花，Email:wenhuapiao@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170814.1453.010.html

10.13621/j.1001-5949.2017.08.0679

R735

A

2017-02-14 [责任编辑]王凯荣