某猪场猪沙门氏菌病的诊断和药敏试验

赵 琼 刘晓云 江苏省丹阳市动物疫病控制中心 212300周 凯 江苏省丹阳市司徒镇动物防疫站 212331

某猪场猪沙门氏菌病的诊断和药敏试验

赵 琼 刘晓云 江苏省丹阳市动物疫病控制中心 212300周 凯 江苏省丹阳市司徒镇动物防疫站 212331

猪沙门氏菌病又名猪副伤寒，是由猪霍乱沙门氏菌引起的仔猪传染病。某猪场共饲养168头猪，有32头发病，先后死亡9头。临床上主要表现为体温明显升高（40～41.5℃），精神沉郁，生长停滞，贫血，腹泻不止，排出黄绿色恶臭水样物，后躯粘有灰褐色粪便。初步诊断为猪沙门氏菌病。对分离细菌进行生化试验，进一步确诊为猪沙门氏菌病。进行药敏试验，发现猪沙门氏菌对土霉素、强力霉素和呋喃制剂有较强的敏感性。

猪沙门氏菌病；诊断；药敏试验

某猪场共饲养100头猪，有30头猪发病，先后死亡8头，通过临床症状及剖检初步诊断为猪沙门氏菌病。对分离细菌进行生化试验，进一步确诊为猪沙门氏菌病。对沙门氏菌进行药敏试验，根据药物敏感性的判定标准得知，对猪沙门氏菌有较强敏感性的药物是土霉素、强力霉素和呋喃制剂，中度敏感的药物有卡那霉素、多粘菌素E和青霉素，不敏感的药物有链霉素、磺胺制剂和氯霉素。

1 发病情况

2016年6月，丹阳市某猪场共饲养168头猪，已接种过猪瘟、高致病性蓝耳和口蹄疫疫苗。其中发病32头，先后死亡9头。畜主口述治疗3天未见效，病猪主要集中在75～85日龄。

2 临床症状

病猪体温明显升高，达40～41.5℃。精神沉郁，生长停滞，贫血，腹泻不止，排出黄绿色恶臭水样物，后躯粘有灰褐色粪便[1]。

3 病理解剖

肠道特别是回肠和大肠黏膜有纤维素性坏死性渗出物，病变突出于肠黏膜，表面粗糙，被覆有柔软的糠麸样伪膜，除去伪膜发现溃疡。肝有轻微肿大[2]。

4 实验室诊断

（1）细菌分离与培养。材料：病料来自临诊时疑似沙门氏菌病的病死猪。对病死猪进行解剖，无菌采取肝脏、肺脏作为病原分离材料，根据需要剪取适当大小的组织块，盛于无菌的容器(如平皿)内，在4℃下存放。培养基为麦康凯琼脂。将各种成分加入蒸馏水中均匀混合制成，pH7.3±0.2。三糖琼脂。除酚红指示剂外，将各成分加热溶解，调至pH7.4，然后加入酚红指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15分钟，制成分层较厚的斜面。

沙门氏菌增菌液(四硫磺酸盐煌绿增菌液)。具体制备方法如下：

基础液。除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10分钟，加热煮沸至完全溶解，再加入碳酸钙，调至pH7.0±0.1，高压灭菌20分钟。

硫代硫酸钠溶液。硫代硫酸钠(含5个结晶水)，将蒸馏水加至100mL，高压灭菌20分钟。

碘溶液。将碘化钾充分溶解于少量蒸馏水中，再投入碘片，摇动玻瓶至碘片完全溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，存于褐色瓶内，塞紧瓶塞备用。

煌绿水溶液。将煌绿放入蒸馏水中，充分溶解后存放于暗处1天，使其自然灭菌。

牛胆盐溶液。将牛胆盐放入蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，高压灭菌20分钟。

制备。临用前按上列顺序无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分摇匀，然后再加入另一种成分。最后分装于灭菌玻璃瓶内，每瓶100mL或25mL。

方法。细菌分离。接种时先用烧灼灭菌的手术刀片烧烙组织表面灭菌，然后在烧烙处用烧灼灭菌的手术刀片切开组织，并取一块组织直接放入沙门氏菌增菌液中，37℃恒温需氧培养18～24小时。用烧灼灭菌的接种环挑取增菌培养物,划线接种麦康凯琼脂平板。连续划线法。右手按接种环，通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许。左手持起培养基平板，先将标本涂于琼脂平板的一角，然后用接种环从涂布部位开始，向左向右并逐渐向下移动，连续划出若干条分散的平行线。划线完毕后倒置(琼脂平板的低部向上)，37℃恒温需氧培养18～24小时，取出观察细菌生长情况。

细菌的纯培养。取出上述接种的麦康凯琼脂平板，选择典型灰白色菌落做纯培养。用烧灼灭菌的接种环小心挑取单个菌落移种于麦康凯琼脂平板，用接种环先将培养物涂布在平板第一区并作数次划线，再在二、三、四区依次用接种环划线，每划一个区域，将接种环烧灼1次，待冷却后再划下一个区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。划线完毕后倒置，37℃恒温需氧培养18～24小时后，于4℃条件下存放。

结果与分析。共分离6株疑似沙门氏菌，在麦康凯琼脂培养基上37℃培养24小时，均形成圆形、光滑、边缘整齐、稍隆起、湿润的菌落。革兰氏染色镜检，可见两端钝圆、中等大小的直杆菌，革兰氏阴性菌无夹膜、不形成芽孢、有鞭毛、能运动。

（2）生化试验。材料：葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖微量生化管，购自于长沙佳格生物技术有限公司。方法：糖（苷、醇）类发酵实验原理。不同细菌含有不同发酵糖类的酶，分解糖的能力各不相同，产生的代谢产物也随细菌种类而异。观察细菌能否分解各类单糖（葡萄糖）、双糖（麦芽糖、乳糖、蔗糖）和醇类（甘露醇），是否产酸或产气。

实验方法与结果判定。无菌操作，用接种针取纯培养的待检菌接种于各糖类微量发酵管，倒置于37℃温箱内培养18～24小时观察结果。如细菌能分解此种糖类产酸，则指示剂呈酸性变化，发酵管中颜色发生改变；不分解此种糖类，则无颜色变化；产气可见倒置的小管内出现气泡。

5 结果与分析

表1 生化实验结果

糖类及醇测验结果见表1。6株均产酸产气，符合沙门氏菌的生化特征。

（3）吲哚实验。方法：有些细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等具有色氨酸酶，能分解培养基中蛋白胨中的色氨酸，生成丙酮酸、靛基质(吲哚)、氨等并产生能量。靛基质与试剂中的对二甲氨基苯甲醛发生作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，为阳性。

取待检菌纯培养物接种至5mL蛋白胨水培养基中，37℃培养3～5天。先加少量乙醚，摇动试管以萃取和浓缩吲哚，待其浮出培养液表面后，再沿管壁徐徐加入欧-波二氏试剂数滴，查看反应结果。

结果与分析。试管的接触面呈红色为阳性反应，可以更加准确地确定6株均为沙门氏菌。

（4）药敏试验。材料：土霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素、强力霉素、磺胺制剂等药敏纸片，购自于杭州微生物试剂有限公司。方法：沙门氏菌对抗菌类药物（抗菌素、磺胺类及中药等）的敏感性各异，而且在抗菌药物使用不当时，常导致抗药性的产生，对抗体反而造成不良作用。所以在对沙门氏菌（其他细菌也如此）疾病的防治过程中，如能对分离的菌株做药敏实验，选用具有高度抑制能力的药物则可明显提高治疗效果。

实验方法和结果判定。于纯培养平板上，将待测菌液或挑取单个菌落均匀涂布于普通营养琼脂平板内，用无菌小镊子夹取各种药敏试片，平贴于琼脂表面。然后倒置并37℃培养24小时平板，取出后仔细观察在药敏纸片周围有无抑菌圈形成，按抑菌圈直径的大小可判定菌株对各药敏纸片的敏感性。

结果与分析。猪沙门氏菌药物敏感性见表2。

表2 药敏实验的菌落抑制直径

根据药物敏感性的判定标准得知，对猪沙门氏菌有较强敏感性药物有土霉素、强力霉素、呋喃制剂，中度敏感的药物有卡那霉素、多粘菌素E、青霉素，低度敏感的药物有链霉素、磺胺制剂、氯霉素。

6 讨论

（1）预防。猪沙门氏菌病防治的重要环节在于加强饲养管理，消除发病诱因。要让初生仔猪早吃初乳。断奶分群时不要突然改变环境，猪群可尽量分小一些。在断奶前后（1个月以上）应给仔猪口服仔猪副伤寒冻干疫苗。仔猪副伤寒菌苗口服一般没有反应或反应很小，可将仔猪副伤寒冻干弱毒菌苗用20%氢氧化铝稀释，肌肉注射1mL，免疫期达9个月。注射免疫后有的猪出现减食、体温升高、局部肿胀及呕吐和腹泻等症状，一般1～2日即可自行恢复，严重者需注射肾上腺素急救。以应用本群和从当地分离的菌株制成的单价灭活疫苗效果为好，而应用灭活多价苗效果不理想。在该病流行地区，应定期给仔猪进行接种。

发生该病后，要将病猪隔离治疗，对污染的猪舍彻底消毒。耐过的猪多数带菌，应隔离肥育或予以淘汰。病死的猪不准食用，以防食物中毒。

（2）药物治疗。猪沙门氏菌病对抗菌类药物(抗菌素、磺胺类及中药等)的敏感程度各异，而且在抗菌药物使用不当时，常导致抗药性的产生，对抗体反而造成不良作用。所以在沙门氏菌病的防治过程中，如能对分离的菌株做药敏实验，选用具有高度抑制能力的药物则可明显提高治疗效果。通过此次猪沙门氏菌病的药敏测试得到如下结果，即对该猪场患猪的药物治疗，应选用对猪沙门氏菌病有较强敏感的药物土霉素、强力霉素、呋喃制剂；对中度敏感的药物卡那霉素、多粘菌素E、青霉素，可以适当选用；对不敏感的药物氯霉素、磺胺制剂、链霉素则不能使用。

[1]贾玉梅,梁玉发,梁明伟.猪沙门氏菌病的临床诊治[J].河南畜牧兽医,2004,12:41.

[2]李国徽,田兵.猪沙门氏菌病的诊断与防治[J].畜牧兽医科技信息,2011,11:69.