溶血标本对化学发光方法检测献血者四项传染病指标的影响

万小春

【摘要】 目的 探索溶血标本对化学发光方法检测献血者四项传染病指标的影响。方法 无偿献血者乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）单项检测结果阳性标本各30份， 人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）检验结果阳性标本10份及随机选取四项传染病检测结果均阴性的标本30份。将实验分为4组， 分为原血清组、轻度、中度和重度溶血组。原血清组标本不做任何处理， 人为造成轻、中、重度溶血， 血红蛋白浓度≤2 g/L为轻度溶血组， 2 g/L<血红蛋白浓度≤4 g/L为中度溶血组， 血红蛋白浓度﹥4 g/L为重度溶血组。在全自动免疫分析仪上进行了化学发光法检测。结果 轻度、中度、重度溶血组HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的测定值与原血清组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 溶血标本用化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的结果没有明显影响， 化学发光法可用于献血者传染病四项筛查。

【关键词】 溶血标本；化学发光法； 献血员；传染病检测

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.113

依据《血站技术操作规程（2012 版） 》第4章节“血液检测”所规定了的可经输血传播感染的检测项目包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP， 检测模式为两种不同厂家生产的酶联免疫吸附剂测定（ELISA）试剂进行初复检[1]。2016年， 国家卫计委要求献血者筛查在原来的基础上对前三项病毒增加一次核酸检测。ELISA检测技术具有成本低、灵敏度和特异性相对较好而作为基本检测方法。近年来， 化学发光法作为一种新的检测技术， 以其敏感性高、特异性强、简便快捷、重复性好、影响因素少等优点而广泛应用于临床检测， 而标本溶血作为不可避免的现象影响实验的准确性， 有学者认为ELISA检测方法中标本溶血可导致假阳性结果的出现[2， 3]。为研究標本溶血对化学发光方法检测献血者四项传染病指标是否有影响， 设计本实验， 报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 收集本血站2016年5～6月无偿献血者HBsAg、抗-HCV、抗-TP单项检测结果阳性标本各30份， 抗-HIV检验结果阳性标本10份及随机选取四项传染病检测结果均阴性的标本30份， 采用EDTA抗凝管留取5 ml。所有收集的标本在离心后， 肉眼观察血清无溶血、无黄疸、无混浊。

1. 2 仪器与试剂 全自动免疫分析仪（日本 SYSMEX HISCL-5000， 化学发光法）， 化学发光试剂：HISCL Anti-HBsAg、Anti-HCV、HIVAg+Ab和Anti-TP Assay Kit， 由希森美康医用有限公司提供， 生产批号：ZS6108。

1. 3 方法 使用1.5 ml EP管将所有标本分装为4组， 分别标为原血清组、轻度、中度、重度溶血组。对照组标本不做任何处理， 实验组标本用竹签搅动人为造成溶血， 离心后测量其上清液中的游离血红蛋白浓度， 血红蛋白浓度≤2 g/L为轻度溶血组， 2 g/L<血红蛋白浓度≤4 g/L为中度溶血组， 血红蛋白浓度﹥4 g/L为重度溶血组[4]。按照仪器操作说明书进行化学发光法检测， 所有标本进行平行两次检测， 取其平均值， HBsAg结果以 IU/ml表示；抗-HCV、抗-TP、抗-HIV以C.O.I表示。

1. 4 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

轻度、中度、重度溶血组HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的测定值与原血清组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论

输血安全是全社会广泛关注的重要问题之一， 献血者安全筛查方法的选择关乎患者感染经输血传播疾病的风险， 因此， 国家高度重视献血者经血源传播性疾病的筛查， 明确规定了其检测项目及检测方法， ELISA仍然是此类检查的主体方法。该方法在临床应用已有几十年的历史， 具有成本低廉、稳定性较好、操作相对简单、可实现批量自动化检测等优点， 但文献资料显示也有钩状效应（HOOK效应）引起的假阴性、非特异反应、检测时间长、易交叉污染引起的假阳性和灵敏度较低、检测窗口期时间较长、容易导致假阴性等问题[5]。尤其是溶血标本对ELISA技术有明显的影响， 主要原因是因其游离血红蛋白（Hb）具有过氧化物酶活性， 与辣根过氧化物酶作用相似， 可以催化底物显色导致假阳性结果[6， 7]。

化学发光法引入于20世纪90年代， 是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合， 用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫（RIA） 和酶免疫（EIA） 相似， 不同之处是借助发光底物自身的发光强度直接进行测定[8]， 测得的光量子数和待测样本中的抗原/抗体浓度成正比， 可用于定性和定量/半定量测定， 其检测原理上与ELISA不同， 不受游离Hb中类过氧化物酶活性的影响， 不产生颜色反应而干扰检测结果。与ELISA 相比， 化学发光技术是异相免疫分析， 抗原抗体能够高效结合；灵敏度可达10～22 mol/L；线性范围宽， 其发光强度在4～6个量级之间， 与测定物质浓度间呈线性关系；分析方法简便快速， 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式， 操作全自动化；结果稳定、误差小， 不需要任何光源照射， 免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响， 使分析结果灵敏、稳定、可靠；检测时间短、速度快、可随时检测， 特别适应于急诊快速检验， 因而有取代ELISA检测的趋势。endprint

本次实验研究中， 通过分析溶血标本对化学发光法检测献血者传染病四项指标的实验结果显示， 轻度、中度、重度溶血组HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的测定值与原血清组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。表明溶血标本对化学发光法检测上述四种传染病检测结果的准确性并不受影响， 与本方法检测在理论上保持了一致性， 这在白洁等[8]所报道的相关文章中得到证实， 溶血标本中游离Hb的存在对此类检测没有干扰。但从具体每项检测结果发现， 随着溶血程度的增加， 检测值呈现逐渐降低的趋势， Mann-Whitney U检验中Z值为负值， 其差异成一定程度上的负相关， 具体原因不明， 有待进一步研究。

本实验和文献检索结果显示， 化学发光法对献血者传染病四项检测更具有优势， 是否可以建议采用化学发光法取代ELISA檢测， 或一次ELISA加一次化学发光法检测取代现有的两种ELISA试剂进行初复检， 供同道们参考。

参考文献

[1] 朱为刚， 曾劲峰， 李彤.一种化学发光检测试剂在血液筛查中的应用评估. 中国输血杂志， 2016， 6（29）：581-583.

[2] 高丹， 李丁. ELISA 法检测HIV 抗体需注意的问题.中国卫生检验杂志， 2005， 15（1）：115.

[3] 李红叶. ELISA 法检测HIV 抗体的注意事项.兵团医学， 2005， 3（1）：58-60.

[4] 贺伟.溶血标本对48项生化检验结果的影响.国际检验医学杂志， 2016， 37（15）：2102-2104.

[5] 吴忠华， 罗鹏， 吕沁风. HIV 实验室检测及其研究进展.中国国境卫生检疫杂志， 2009， 32（4）：285-292.

[6] 王雪梅， 李代渝， 江灵，等. 溶血对ELISA与化学发光免疫检测HIV抗体的影响. 现代检验医学杂志， 2014， 29（2）：94-96.

[7] 张利泉， 杨杰， 孟淑欣. 溶血对ELISA方法检测HIV抗体的影响. 中国卫生检验杂志， 2008， 18（10）：2161-2162.

[8] 白洁， 何灵， 周建，等. 传染病四项不同检测方法的临床应用价值对比分析. 标记免疫分析与临床， 2016， 23（6）：688-690.

[收稿日期：2017-03-17]endprint