猫爪草多糖对D-gal衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

韩红霞，吕小华*

（1．山西省中医院检验科，山西 太原 030001；2．广东医科大学药理教研室，广东 湛江 524023）

猫爪草多糖对D-gal衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

韩红霞1，吕小华2*

（1．山西省中医院检验科，山西 太原 030001；2．广东医科大学药理教研室，广东 湛江 524023）

目的 研究猫爪草多糖（Polysaccharide of Radix Ranunculi Ternati，RTP）对D-gal衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法 建立小鼠D-半乳糖（D-galactose，D-gal）亚急性衰老模型，研究RTP对D-gal衰老小鼠脾指数、胸腺指数，肝脏IL-2、TNF-α含量，脏器T-AOC、SOD活性及MDA含量的影响。结果 RTP各剂量组（100 mg/mL～400 mg/mL）可提高肝组织、肾组织、心组织匀浆T-AOC能力、SOD活力，降低其MDA含量，可提高D-gal衰老模型小鼠胸腺指数、脾指数，促进小鼠体内细胞因子IL-2和TNF-α的分泌。结论 RTP可延缓D-gal衰老模型小鼠组织及细胞结构及功能衰退，增强衰老小鼠免疫功能，提高体内抗氧化系统酶活性，较好地维护D-gal衰老模型小鼠体内氧化/抗氧化平衡状态。

猫爪草多糖；D-gal衰老模型小鼠；抗氧化；

随着老龄化社会的发展，对于中药抗氧化作用的研究越来越多，而D-gal衰老模型小鼠因其衰老变化明显，模型稳定，在抗衰老研究中被广泛应用。其原理为使机体细胞内过量的半乳糖，被还原成不能被细胞代谢的半乳糖醇，影响正常渗透压，导致细胞肿胀，致使动物组织细胞出现衰老的退行性变以及功能的改变。同时，在半乳糖代谢过程中产生大量的自由基超过机体的清除能力，大量的自由基攻击位于线粒体内膜上的脂类、蛋白质和mtRNA，影响线粒体的功能，导致细胞受损、免疫功能下降、衰老和疾病的发生[1]。前期研究发现猫抓草多糖在体外能够促进巨噬细胞，T，B淋巴细胞增殖活性及增强巨噬细胞吞噬能力和有较强的清除OH和抑制O2-的能力[2]，并且对CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤有保护作用[3]。本研究旨在探讨RTP对D-gal衰老模型小鼠的抗氧化作用，为RTP的进一步临床应用奠定理论基础。

1 材料

1.1 一般材料

药品、动物及试剂猫爪草多糖，本实验室以水提醇沉法提取，用蒽酮-硫酸法测多糖含量为95.12%，考马斯亮蓝法测定总多糖中蛋白含量为3.59%[3]；昆明小鼠，SPF级，♀♂各半，体重（20±2）g，由广东医科大学实验动物中心提供；总抗氧化能力（T-AOC），丙二醛（MDA）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、批号均为20090804，Mouse TNF-α ELISA Kit，Mouse IL-2 ELISA Kit（武汉博士德生物工程有限公司），D-半乳糖（美国SIGMA公司）。

1.2 方法

1.2.1 小鼠分组、建立模型[1]及给药

取昆明小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组，衰老模型组，RTP低、中、高剂量给药组。实验室常规饲养3天后，正常对照组每天颈背部皮下注射生理盐水，其余各组每天按200 mg/kg体重颈背部皮下注射D-gal，同时RTP给药组每天分别按100、200、400 mg/kg体重灌胃相应剂量的RTP，连续给药60 d。

1.3 实验指标的检测[4-6]

无菌剖取小鼠胸腺和脾脏，称重，计算脾指数和胸腺指数。脾指数=脾质量/小鼠体质量，胸腺指数=胸腺质量/小鼠体质量。取小鼠心脏，冰浴下匀浆并离心，取上清用考马斯亮蓝法测定组织中蛋白含量，按试剂盒操作测定组织中T-AOC、SOD活性及MDA含量及10%肝组织匀浆中IL-2、TNF-α含量。

1.4 统计学方法

运用SPSS 21.0统计软件统计，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组比较用方差分析，组间差异用t检验，以α=0.05为显著性检验标准。

2 结 果

2.1 RTP对D-gal衰老模型小鼠心组织T-AOC、SOD活性及MDA含量的影响

与正常对照组比较，模型组心组织T-AOC 、SOD水平降低（P＜0.01），MDA含量升高（P＜0.01）。与模型组比较，各RTP组能升高心组织T-AOC、SOD水平（P＜0.01或P＜0.05），降低心组织MDA含量（P＜0.05或P＜0.01），其中以中剂量组作用最明显（P＜0.01）。见表1。

表1 RTP对D-gal衰老模型小鼠心组织T-AOC、SOD活性及MDA含量的影响（x±s）

2.2 RTP对D-gal衰老模型小鼠脾指数和胸腺指数的影响

与正常对照组比较，模型组小鼠脾指数、胸腺指数水平降低（P＜0.01）。与模型组比较，各RTP组能显著升高小鼠脾指数、胸腺指数（P＜0.01），其中以中剂量组作用最明显。见表2。

2.3 RTP对D-gal衰老模型小鼠肝组织匀浆中IL-2、TNF-α含量的影响

与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织IL-2、TNF-α水平降低（P＜0.01）。与模型组比较，各RTP组能显著升高肝组织IL-2、TNF-α（P＜0.01），其中以中剂量组作用最明显。见表3。

表2 RTP对D-gal衰老模型小鼠脾指数、胸腺指数的影响（x±s）

表3 RTP对D-gal衰老模型小鼠肝组织中IL-2、TNF-α含量的影响（x±s，n=10）

3 讨 论

SOD能清除超氧阴离子自由基保护细胞免受损伤。其活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力。MDA是脂质过氧化过程中产生的一种醛类物质，可使组织细胞受损伤，通过检测MDA含量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映出机体受自由基攻击导致细胞损伤的严重程度[7-8]。MDA水平升高，SOD活性降低，即可引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚至细胞死亡。实验结果表明：RTP可以通过升高小鼠体内脏器T-AOC水平、SOD活性，降低MDA含量达到抗氧化、抗衰老的目的。

检测D-gal衰老模型小鼠的脾指数、胸腺指数，结果表明RTP可增强D-gal衰老模型小鼠的脾细胞和胸腺细胞的增殖功能，增加小鼠脾指数、胸腺指数，使D-gal衰老模型小鼠免疫功能有所恢复。细胞因子是免疫活性细胞和相关细胞产生的具有调节机体免疫功能的一类高活性、多功能的蛋白质物质。本实验结果显示，RTP可增加D-gal衰老模型小鼠体内细胞因子IL-2和TNF-α的含量。

综上所述，RTP可以通过升高D-gal衰老模型小鼠脏器的T-AOC水平、SOD活性，降低MDA含量达到抗氧化、抗衰老的目的。同时RTP能增加衰老小鼠脾指数、胸腺指数，促进D-gal衰老模型小鼠分泌细胞因子IL-2和TNF-α，表明RTP能增强衰老小鼠的免疫功能，防止免疫衰老。

[1] 秦红兵,杨朝晔,范忆江,等.D-半乳糖诱导衰老小鼠模型的建立与评价[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(7):1275-1277.

[2] 吕小华,王慧敏,韩红霞,等.猫爪草多糖免疫调节及抗氧化活性研究[J].中国中药杂志,2010,35(14):1862-1865.

[3] 韩红霞,吕世静.猫爪草多糖对急性肝损伤小鼠保护作用的研究[J].检验医学与临床,2010,7(9):76.

[4] 陈 奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2000:943.

[5] 程宝鸾.动物细胞培养技术[M].广州:华南理工大学出版社,2001.

[6] 鄂 征.组织培养技术[M].北京:人民卫生出版社(第一版),1982.

[7] Melov.S.Therapeutics aganinst mitochondrial oxidative stress in animal models of aging[J]. Ann NY Acad Sci,2002,95(9):330-40.

[8] Leutner S.Ecket A,Muller WE.ROS generation,lipid peroxidation and antioxidant enzyme activities in the aging brain[J]. J Neural Transm,2001, 108(8-9):955-67.

本文编辑：王雨辰

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