黄连解毒流浸膏质量控制的研究

■文/河南省驻马店技师学院 杨 静

黄连解毒流浸膏质量控制的研究

■文/河南省驻马店技师学院 杨 静

为了建立黄连解毒流浸膏的质量标准，试验采用高效液相色谱法对黄连解毒流浸膏中的小檗碱和黄芩苷进行鉴别，并测定它们的含量。结果表明，黄连解毒流浸膏中的小檗碱和黄芩苷与其对照品保留时间一致。黄连解毒流浸膏中的小檗碱和黄芩苷的线性方程、精密度、稳定性、回收率等均符合高效液相色谱法含量测定要求。结论：建立的质量标准简便可行，可用于黄连解毒流浸膏的质量控制。

黄连解毒流浸膏；质量标准；高效液相色谱法

近年来，国内养猪生产中各种原因引起的高热、败血症和毒血症的发病率和死亡率越来越高。化学合成药物的作用较为单一，多不能同时具备抗炎、退热、抗菌和抗病毒的作用。黄连解毒汤由黄连、黄柏、黄芩和栀子等4味药材组成[1]，是清热解毒方剂的常用代表方剂，具有良好的清热、苦寒和解毒的功能[2]，适用于畜禽的各种急性热毒病和各种急性炎症[3～9]。颗粒剂具有吸收快、疗效好、易携带、久置不易霉变等优点。本试验通过对黄连解毒流浸膏中小檗碱和黄芩苷的含量[10～12]等进行了研究，初步制订出了《黄连解毒流浸膏的质量标准草案》。为黄连解毒颗粒剂制备做准备。

1 试验仪器与材料

DHG-9141A型电热恒温干燥箱，Sartorius BS 110S精密分析天平，Waters高效液相色谱仪，黄芩苷原料药(含量85.7%)，盐酸小檗碱(含量98%)，自制3批连柏流浸膏，3批芩栀流浸膏，甲醇，无水甲酸。

2 试验内容

2.1 含量测定

2.1.1 方法学考察

2.1.1.1 对照品溶液制备 准确称取黄芩苷对照品8mg，小檗碱对照品5mg，于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，滤过，即得。

2.1.1.2 供试品溶液制备方法 分别取比重为1.28～1.30的连柏流浸膏1mL、芩栀流浸膏2mL于烧杯中，加入50mL甲醇溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即分别得到连柏流浸膏的样品溶液A和芩栀流浸膏的样品溶液B。

取2mL连柏流浸膏的样品溶液A与2mL芩栀流浸膏的样品溶液B混合，即得到连柏流浸膏和芩栀流浸膏的混合样品溶液A+B。进样量均为20μL，按下述方法测定流浸膏中小檗碱和黄芩苷的含量。结果见表1。通过测定可发现，低浓度的流浸膏供试品溶液混合后，黄芩苷和小檗碱的含量基本没有变化，可将两浸膏供试品溶液混合同时测定小檗碱和黄芩苷的含量。

2.1.1.3 色谱条件 采用迪马Diamonsil C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)；以0.46%甲酸-0.3%三乙胺的乙腈溶液(A)和0.46%甲酸-0.3%三乙胺的水溶液(B)为流动相；梯度洗脱：0～37min，A从10%线性升至32%，37～45min，A从32%线性升至50%保持5min后，将梯度变回A为10%，再保持5min；检测波长：260nm；进样量：20μL；流速：1.0mL/ min；柱温：30℃。

表1 混合对小檗碱和黄芩苷含量的影响(n=3)

图1 黄芩苷线性关系图

图2 小檗碱线性关系图

表2 精密度试验结果

表3 稳定性试验结果(n=6)

2.1.1.4 线性关系考察 将混合对照品溶液(黄芩苷含量为336μg/mL，小檗碱为200μg/mL)用甲醇逐级稀释，分别得到5个浓度混合对照品溶液，每种浓度取20μL重复进样3次，记录3种成分的峰面积，利用峰面积Y对浓度x做直线回归，求得黄芩苷和盐酸小檗碱标准曲线方程。试验结果见图1和图2。由图可知，黄芩苷的相关系数R=0.9990，小檗碱的相关系数R=1，表明：黄芩苷在21～336μg/ mL，小檗碱在12.5～200μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.1.5 精密度试验 取含黄芩苷和小檗碱的混合对照品溶液连续进样6次，测定峰面积，试验结果见表5，计算相对黄芩苷的峰面积RSD为0.19%，小檗碱的峰面积RSD为0.08%，表明仪器精密度良好。

2.1.1.6 稳定性试验 分别取连柏流浸膏制成的供试品溶液2mL和芩栀流浸膏制成的供试品溶液2mL，将2种供试品溶液混合后，按0h、2h、4h、8h、12h、24h进样，记录色谱图中峰面积并计算，试验结果见表3，RSD均小于2，表明24h流浸膏中小檗碱和黄芩苷含量基本不变，样品溶液性质稳定。

2.1.1.7 加样回收率 取已知含量的连柏流浸膏1mL于100mL烧杯中，按照浸膏中小檗碱含量的80%、100%、120%加入含量为98%的小檗碱原料药，加入50mL甲醇，超声溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。每个水平配置3个平行样品。

另取已知含量的芩栀流浸膏1mL，于100mL烧杯中，按照浸膏中黄芩苷含量的80%、100%、120%加入已知含量的黄芩苷原料药，50mL甲醇，超声溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。每个水平配置3个平行样品。

测定前将连柏流浸膏供试品溶液和芩栀供试品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色谱仪，测定小檗碱和黄芩苷的含量，计算回收率，试验结果见表4，小檗碱的平均回收率为100.5%，黄芩苷为99.2%，符合回收率的要求。

表4 流浸膏加样回收率试验结果(n=3)

表5 流浸膏中小檗碱和黄芩苷的含量检测结果

2.1.2 样品含量检测 取黄连40g、黄柏80g、黄芩80g、栀子60g(实验室可做的最大量)，按照试验一中最佳提取工艺制备3批黄连解毒流浸膏(比重为1.28～1.30)，取连柏流浸膏1mL于100mL烧杯中，加入50mL甲醇，超声溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

另取芩栀流浸膏2mL于100mL烧杯中，加入50mL甲醇，超声溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定前将连柏流浸膏供试品溶液和芩栀供试品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色谱仪，测定小檗碱和黄芩苷的含量。试验结果见表5，流浸膏中小檗碱和黄芩苷总的含量为6.00g和5.88g。

3 小结

本试验所用含量测定方法线性关系良好，精密度、稳定性、回收率均良好，方法简单，可以作为黄连解毒流浸膏的含量测定方法。■

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