原发性肝癌患者血清PCIII、IV-C、LN、HA的表达

李 林，王望东

(湖北省中西医结合医院 检验科，湖北 武汉430015)

原发性肝癌患者血清PCIII、IV-C、LN、HA的表达

李 林，王望东

(湖北省中西医结合医院 检验科，湖北 武汉430015)

原发性肝癌的确切的分子机制及发病原因尚未完全明确，迄今为止多数学者认为其由遗传和环境的因素共同作用，并且多个步骤、多种原因共同作用导致了其发生并进一步进展。肝脏纤维化是慢性肝脏炎症发展至肝硬化，乃至最后演变为肝癌必经的病理变化过程。肝脏纤维化是指在各种慢性肝脏疾病时，肝脏细胞受到各种刺激和炎症因子的作用，最后导致细胞发生坏死，机体与此同时发生了反复的自我修复反应，出现大量纤维组织的异常增生变化，长期持续发展会导致肝硬化的进一步发生，最后乃至演变为原发性肝癌。

胶原酶类、细胞因子和细胞外基质成分是肝脏纤维化的三大类血清学指标，其中相对常用的为细胞外基质成分。本研究探讨了四种细胞外基质成分水平在原发性肝癌患者和健康对照组人群中的变化，分别是血清透明质酸(HA)、血清III型前胶原(PCIII)、层粘蛋白(LN)、IV型胶原(IV-C)，旨在了解其水平变化与原发性肝癌及肝功能指标的相关关系。

细胞外基质成分较为复杂，而且其升高的机制也不尽相同，导致其测定某一种成分不足以正确判断肝纤维化的严重性及程度，近年来学者们开始推荐联合测定[1]，建立相关非创诊断体系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院肿瘤科2014年1月至2016年5月住院的原发性肝癌患者48例，其中男27例，女21例，平均年龄为46±15岁，其均为通过手术或肝脏穿刺活检病理学检查确诊，健康正常对照组为我院体检中心的健康自愿者52例，其中男29例，女23例，平均年龄为42±17岁。整项研究在原发性肝癌患者及健康体检者的知情同意下完成，并经过我院的伦理委员会批准。

1.2 方法

参与本研究的研究对象需在空腹(8-14 h无任何热量摄入)后，于次日早晨7-9点抽取肘前静脉血5 ml于EDTA抗凝管中，保存于-20℃的冰箱进行备用。血清透明质酸(HA)、IV型胶原(IV-C)、Ⅲ型前胶原(PCIII)、层粘蛋白(LN)(试剂来源:深圳新产业全自动化学发光免疫分析仪器配套试剂)检测均采用化学发光免疫法进行测定。采用全自动生化仪器(日本HITACHI公司)检测丙氨酸氨基转移酶(AST)、天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、胆碱醋酶(ChE)、腺苷脱氨酶(ADA)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、胆汁酸(TBA)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、AST/ALT、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、蛋白A/G比值(A/G)、甲胎蛋白(AFP)相关肝功能指标。

1.3 统计学处理

采用SPSS 18.0软件对实验数据进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，两组间临床变量比较采用不配对Studentt检验，肝纤维化指标与肝癌相关性应用spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 原发性肝癌患者组和健康正常对照组肝功能指标(见表1)

原发性肝癌患者组和健康对照组t检验提示年龄、血清AST、血清ALT、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰基转移酶、甲胎蛋白等指标有统计学差异(P<0.01)。原发性肝癌患者组高于健康对照组。

表1 原发性肝癌组和健康对照组肝功能指标检测结果±s)

2.2 患者常见无创指标与肝癌相关性的单因素相关分析(见表2)

Spearman等级相关分析提示：原发性肝癌患者人口学参数和常见血液指标中，除血清ALT、性别外，其他指标均与原发性肝癌有相关性，其中与γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液指标有显著相关性(P<0.01)。

表2 原发性肝癌与相关指标spearman's rho等级相关系数

表2 原发性肝癌与相关指标spearman's rho等级相关系数(续)

2.3 原发性肝癌患者组和健康正常对照组血清 PCIII、IV-C、LN、HA水平(见表3)

肝纤维化的血清学指标在原发性肝癌患者组和健康对照组比较采用不配对Studentt检验，存在显著性差异(P<0.01)。结果说明原发性肝癌各项肝纤维化血清学指标PCIII、IV-C、LN、HA显著高于健康正常对照组。

表3 原发性肝癌组和健康对照组PCIII、IV-C、LN、HA检测结果

3 讨论

原发性肝癌高发地带位于我国东南沿海地区，是我国地区较为常见的恶性肿瘤之一，目前其发病机制和发病原因尚未十分明确。随着通过不同检查手段，实现了早期诊断，早期治疗原发性肝癌，而且其总体治疗效果出现了明显的提高。甲胎蛋白AFP是一种白蛋白，此种蛋白通常由胚胎干细胞分泌，但其在出生后两周的胎儿中，会发现AFP从血液中消失，该生化指标是到迄今为止最广泛地被应用于早期筛查和诊断原发性肝癌的。血清AFP水平与分化程度、生物学特性和肿瘤大小明显相关，是反映治疗效果和病情变化的较为敏感的指标。有大量相关文献报道在原发性肝癌患者中血清AFP水平早期就会升高，而且随着原发性肝癌的进一步进展，其AFP水平就会越高[2]。本研究中原发性肝癌组AFP水平显著高于健康对照组(P<0.01)。

慢性肝炎是由于各种因素导致肝细胞损伤，随之以胶原纤维为主的细胞外基质在肝内发生增生、沉积，最后导致了肝脏纤维化的发生[3]。正常肝脏细胞外基质的主要成分有蛋白多糖、层粘蛋白和胶原。HA是一种蛋白多糖，肝脏纤维化的程度被证实与其血清的含量相一致[4]。慢性肝炎患者的PCIII持续升高提示了病情向肝硬化发生了进一步进展，而其血清含量的降低则预示了病情有所缓解。在肝脏纤维化早期合成PCIII的速度较快，然而越到晚期其合成速度愈慢，因而PCIII可作为诊断活动性纤维化的辅助检测指标。何云等[5]报道，PCIII诊断肝硬化的阴性预测值在91.3%-93.2%之间，故可作为排除肝硬化的一项辅助检测指标。IV型胶原含量升高能较为灵敏地反映出来肝脏纤维化程度的进展，可在早期辅助发现及诊断肝脏纤维化。IV型胶原被相关学者证实能较敏感的反映出来肝脏纤维化的进展程度，随着病程的进展，血清含量中的IV-C胶原逐渐升高。层粘蛋白是一种非胶原性结构蛋白，为基底膜中特有，与门静脉压力和肝脏纤维化活动程度呈正相关，在原发性肝癌、肝硬化和慢性活动性肝炎患者血清中均出现了明显的升高。LN被证实也可以反映肝脏纤维化严重程度及其进展的过程。作为细胞基质成分之一的透明质酸酶，能较为准确并灵敏地反映肝细胞受损状况和肝脏内合成的纤维含量，是肝硬变和肝纤维化检测的敏感性指标。血清HA在慢性迁延性肝炎、急性肝炎时被发现其轻度增高，在慢性活动性肝炎患者中其血清含量明显升高，在肝硬化患者中其血清含量发生了极度的升高。HA是一种蛋白多糖，肝组织发生纤维化时其分泌会明显增加，其进入体循环还可通过侧支分流，同时其内皮细胞受体相应减少，造成其降解减少，因此肝脏纤维化时，HA变化最大，是反映肝脏纤维化较为敏感的一项生化指标[6]。

对血清 PCIII、IV-C、LN和HA 进行联合的检测在肝纤维化和肝硬化中的研究的报道相对较多，在原发性肝癌中是不是有价值的报道比较少见。本文经过检测发现原发性肝癌组的PCIII、IV-C、LN和HA相对于健康对照组显著的升高了。PCIII、IV-C、LN和HA既可以反映肝功能的损害程度，也可以反映肝脏纤维化程度，并与血清肝功能ALT、AST、ALP、γ-GT具有显著的相关性。本研究显示肝癌的发生可能是由于肝细胞受损导致纤维化和肝功能的损害的共同作用所致。

目前临床常见辅助检查指标中大多数指标与原发性肝癌有一定的关联性。这些指标包含：①血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘蛋白、Ⅳ型胶原；②γ-谷氨酰基转移酶、碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、胆碱酯酶、血小板、直接胆红素、白细胞、白蛋白、蛋白A/G比值、甲胎蛋白；③病人年龄。本实验显示原发性肝癌组年龄、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰基转移酶、甲胎蛋白等指标高于健康对照组。Spearman等级相关分析显示除血清ALT和性别以外，其他血液生化指标均与和原发性肝癌有相关性，其中以γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液生化指标相关性较大(P<0.01)。

这些指标参与原发性肝癌诊断模型的构建有其合理性：①病人年龄：慢性肝病病程是时间累积的结果，是慢性肝炎活动，肝脏纤维化进一步进展乃至最后演变为原发性肝癌的时间体现；②白蛋白相对减少与球蛋白相对升高导致的蛋白A/G比值降低更能较为直接地反映炎症活跃程度增加和肝脏合成功能减弱；间接胆红素增高反映肝脏排泄及和合成功能均受损，直接胆红素和血清白蛋白反映肝脏合成的功能，其降低反映了肝功能减退，两者均是肝脏功能受损、纤维化的进一步进展乃至最后渐变为原发性肝癌的表现。③血小板减少反映了慢性肝脏细胞遭受破坏，导致纤维化的进一步形成，从而造成了门静脉系统压力的增加，脾脏进行性肿大，同时也可能由于肝炎病毒的慢性感染进一步抑制了骨髓造血功能。

本研究显示：选择血清 HA、LN、IV-C和PCIII四者联合检测，原发性肝癌血清 PCIII、IV-C、LN和HA、肝功能指标与健康正常对照组之间比较显著升高(P<0.01)；此四项血清指标与肝癌存在一定的相关性。因此，血清 PCIII、IV-C、LN和HA可作为诊断肝癌和监测其病情的重要参考指标。血清 PCIII、IV-C、LN和HA检测的临床价值已得到普遍认可，被认为是判断肝纤维化或肝硬化较为敏感的检测指标。血清 PCIII、IV-C、LN和HA与血清肝功能碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶具有显著的相关性。本研究可能系肝脏细胞受损导致纤维化和肝功能损害共同作用所致。有学者提出血清HA在慢性肝炎患者人群中诊断明显肝纤维化、重度肝纤维化与肝硬化的ROC曲线下面积分别为0.75、0.82和0.89。研究支持HA水平可能作为肝纤维化或肝硬化临床有用的无创指标[7-9]。血清LN在肝脏纤维化及肝硬化时明显增加，且肝功能越愈差，其血清水平愈高，提示其可能和晚期的食管静脉曲张和门静脉高压有关。在IV-C的合成过程中，由于其沉积于细胞外基质不需要去除端肽，因此其在血清中的含量变化可能与肝血窦基底膜的更新速度有关，既往临床与基础研究均提示了IV-C在血清中的水平变化和与肝脏炎症活动相关性较小，却和门静脉高压、肝脏纤维化程度息息相关[10]。联合多指标诊断可以提高诊断的精确度，常见的联合指标包括HA、LN、PIIIP、IV-C等。研究表明这些组合诊断准确率在80%以上。

总之，本研究显示血清PCIII、IV-C、LN和HA和肝功能指标水平的改变均与原发性肝癌有一定的相关性，联合检测对原发性肝癌有一定的预测性。联合检测可提高预测原发性肝癌的准确性和可靠性。作为判断肝纤维化、原发性肝癌有良好的预测作用，无创伤，重复性良好，临床较为实用。

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1007-4287(2017)08-1358-04

2016-08-24)