月腺大戟中酚酸类化学成分的研究

张倩 王安华+范三鹏 马骁驰 王超 +贾景明

[摘要]该文综合运用各种色谱技术对月腺大戟根进行化学成分研究，利用1D NMR， 2D NMR， HRESIMS等波谱技术鉴定了所分离化合物的结构。从月腺大戟根中分离得到4个酚酸类成分，分别鉴定为1，3，4，5四羟基2OβD[6′O没食子酰基吡喃葡萄糖基]异戊苷（1），6′O没食子酰基葡萄糖异丙苷（2），鞣花酸（3）和3，4′二甲氧基鞣花酸（4）。其中，化合物1为新化合物， 2， 4为首次从大戟属中分离得到。

[关键词]月腺大戟； 酚酸类； 化学成分； 结构鉴定

Phenolic acid derivatives of Euphorbia ebracteolata

ZHANG Qian1， WANG Anhua1， FAN Sanpeng1， MA Xiaochi1，2， WANG Chao1，2， JIA Jingming1*

（1 School of Traditional Chinese Materia Medica， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110016， China；

2 College of Pharmacy， Dalian Medical University， Dalian 116044， China）

[Abstract]A variety of chromatographic methods were applied to research the chemical composition of the roots of Euphorbia ebracteolata Meanwhile， the structures of these compounds were identified by spectroscopic data， such as 1D， 2D NMR and HRESIMS In the present research， a new phenolic acid compound， 1，3，4，5tetrahydroxy2OβD[（6′Gallic acyl）glucopyranyl] isopentane（1）， was isolated from the roots of E ebracteolata， as well as three known compounds， isopropyl2OβD（6′gallic acyl）glucopyranoside（2）， ellagic acid（3） and 3，4′diOmethylellagic acid（4） respectively Additionally， compounds 2 and 4 were isolated from the Euphorbia genus for the first time

[Key words]Euphorbia ebracteolata； phenolic acid； chemical composition； identification

月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata为大戟科Euphorbiaceae多年生草本植物，广泛分布于中国中西部地区[1]，是中药“狼毒”的原植物来源之一[2]。在中国的传统用药中，主要用于治疗水肿腹胀，痰食虫积[3]。大量研究表明，月腺大戟在抗肿瘤[4]、抗炎[5]、以及抗淋巴结核[6]方面有显著疗效，也是中成药结核灵[7]的主要药材之一。据报道，其化学成分主要为萜类[4，8]，苯乙酮类[9]，酚酸类[10]等。本研究从月腺大戟根中分离鉴定了4个酚酸类化合物，其中化合物1为新化合物见图1，化合物2与化合物4首次从大戟属中分离得到。

1材料

JASCO V 650紫外可见分光光度仪（JASCO，日本）；Bruker 601型核磁共振仪（Bruker，瑞士）；AAPI 3200质谱仪（AB SCIEX，Framingham，MA，美国）；UltiMate 3000分析型 HPLC（Thermo，美國）；制备型 HPLC（Agela，美国）；制备型C18色谱柱（YMCPack ODSA）；Waters 2545全自动制备型高效液相

色谱仪（Waters，美国）；Waters RP C18色谱柱（Waters，美国）； MCP 200高精密智能旋光仪（Anton paar，奥地利）。

硅胶 GF254薄层预制板为烟台化学工业研究所产品；色谱硅胶（200～300目）为青岛海洋化工厂产品；D101型大孔吸附树脂为郑州勤实科技有限公司产品；ODS填料为日本 YMC公司产品；所用色谱级甲醇和乙腈均购自美国SigmaAldrich公司。

实验用月腺大戟均购买于安徽省亳州市，经安徽中医药大学杨青山老师鉴定为大戟科Euphorbiaceae月腺大戟E ebracteolata的根。

2提取分离

干燥月腺大戟根 20 kg，粉碎，用80%乙醇加热回流提取2 h /3次，提取液经石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取后，正丁醇部位通过大孔树脂柱，以乙醇水为洗脱剂分离，得到30%乙醇部位，60%乙醇部位，90%乙醇部位3部分。取30%乙醇洗脱部位（50 g）经硅胶柱色谱，CH2Cl2MeOH（20∶1～1∶1）梯度洗脱，相同部分合并，得到53个流分（Fr1～Fr53）。取Fr 9（65 g）通过ODS中压色谱，甲醇水[003%三氟乙酸（TFA），20%～70%]，流速150 mL·min-1，洗脱，得到24个流分。取Fr 7（400 mg）通过Waters 2545全自动制备型高效液相色谱仪，乙腈水（003% TFA，10%～20%），流速100 mL·min-1，再通过制备型HPLC纯化，乙腈水（003% TFA，10%），流速80 mL·min-1，得到化合物 1（83 mg，tR =2609 min）。取Fr 23（260 mg）通过Sephadex LH20凝胶柱色谱，甲醇水（9∶1），所得流分通过制备型HPLC纯化，乙腈水（003% TFA，10%），流速80 mL·min-1，得到化合物2（58 mg，tR =4590 min）；甲醇水（003% TFA，45%），流速80 mL·min-1，得到化合物3（165 mg，tR =3222 min）。取90%乙醇洗脱部位（42 g）经ODS中压色谱，甲醇水（003% TFA，40%～100%），流速150 mL·min-1，得到19个流分。取其中流分Fr 11（55 mg）通过制备型HPLC纯化，乙腈水（003% TFA，30%），流速80 mL·min-1，得到化合物4（82 mg， tR =3745 min）。

3糖定性分析

取化合物150 mg，加入2 mL甲醇溶解，加入025 mL 4 mol·L-1三氟乙酸，在110 ℃的條件下水解4 h，然后加入05 mL甲醇4次，蒸发三氟乙酸，干燥，加入05 mL水溶解干燥物，加入03 mL 015 mol·L-1 NaOH和05 mL 01 mol·L-1 PMP（1苯基3甲基5吡唑啉酮）在70 ℃条件下反应30 min，再加入03 mL 015 mol·L-1 HCl终止反应。 将得到的样品通过HPLC分析，液相条件0～21 min，16%乙腈+10 mm乙酸铵；21～60 min，24%乙腈；流速045 mL·min-1（46 mm×150 mm，25 μm），进样体积10 μL。

4结构鉴定

化合物1黄色油状物；[α]20D -170（CH3OH，c 01）； UV（CH3CN） λmax 2157，2746 nm；HRESIMS m/z 489122 1 [M+Na] +（计算 C18H26O14Na，489132 3）。13CNMR（DMSOd6，150 MHz） 数据显示δC 1088，1194，1385，1455和1659以及1HNMR（DMSOd6，600 MHz） 数据中δH 699（2H，s） 说明该结构中存在1个没食子酰基的片段；13CNMR中δC 1046，763，741，740，698，636是葡萄糖上的1组碳信号，糖端基氢信号δH 443（1H，d，J=72 Hz）表明了苷键构型为β，见表1。同时衍生化所得糖通过HPLC检测，与D葡萄糖出峰时间一致（tR=4161 min），从而判定该结构中所连接糖为βD葡萄糖。此外，该化合物中还存在多羟基碳链片段，其中包含3个氧化亚甲基信号，分别为δC 623，610，628；1个氧化次甲基信号δC 842和1个氧化季碳信号δC 750；结合HMBC谱中的远程碳氢相关信号，可以确定该片段为高度氧化的异戊烷。通过HMBC谱，可以看出该化合物平面结构中，糖端基氢δH 443与异戊烷氧化次甲基碳δC 842存在远程相关，没食子酰基中羰基碳δC 1659与葡萄糖6′位质子δH 443（1H，m） 和δH 417（1H，dd，J=120，54 Hz） 存在远程相关，这说明没食子酰基片段通过葡萄糖6′位与糖相连见图1。同时，在1H1H COSY存在1组葡萄糖上的氢氢相关信号（δH 348/417，348/324，324/310），用于葡萄糖的氢质子进行归属见图1。综上所述，确定该化合物1为1，3，4，5四羟基2OβD[6′O没食子酰基吡喃葡萄糖基]异戊苷。

化合物2白色无定型粉末；ESIMS m/z 3973 [M+Na]+ ； UV（MeOH） λmax：2161，2748 nm；1HNMR（DMSOd6，600 MHz） δ：695（2H，s，H2″，6″），110（6H，t，J=54 Hz，1CH3，3CH3），383（1H，m，2H），423（1H，d，J=78 Hz，1′H），296（1H，m，2′H），318（1H，m，3′H），319（1H，m，4′H），341（1H，m，5′H），440（1H，dd，J=120，18 Hz，6′H），421（1H，m，6′H）；13CNMR（DMSOd6，150 MHz） δ：1663（C7″），1460（C3″，5″），1389（C4″），1199（C1″），1090（C2″，6″），1020（C1′），771（C3′），740（C5′），739（C2′），705（C4′），642（C6′），7121（CH），240（CH3），225（CH3）。以上波谱数据与文献报道[12]对比，故鉴定化合物2为6′O没食子酰基葡萄糖异丙苷。

化合物3白色无定型粉末；ESIMS m/z 3251 [M+Na] + ； UV（MeOH） λmax：2544 nm；1HNMR（DMSOd6，500 MHz） δ：1072（4H，br s，OH），746（2H，S，H1，6）；13CNMR（DMSOd6，150 MHz） δ：1074（C10b，10c），1101（C3a，8a），1124（C5a，10a），1364（C1，6），1399（C2，7），1482（C3，8），1592（C5，10）。以上波谱数据与文献报道[13]对比，故鉴定化合物3为鞣花酸。

化合物4白色无定型粉末；ESIMS m/z 3251 [M+Na] + ； UV（MeOH） λmax：2544 nm；1HNMR（DMSOd6，600 MHz） δ：1108（1H，br s，OH），1079（1H，br s，OH），757（1H，s，H5），754（1H，s，H5′），405（3H，s，OMe3），399（3H，s，OMe4′）；13CNMR（DMSOd6，125MHz） δ：1115（C1），1417（C2），1404（C3），1525（C4），1114（C5），1129（C6），1587（C7），1071（C1′），1401（C2′），1357（C3′），1499（C4′），1068（C5′），1137（C6′），1588（C7′），610（OMe3），567（OMe4′）。以上波谱数据与文献报道[14]对比，故鉴定化合物4为3，4′二甲氧基鞣花酸。

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[責任编辑丁广治]