对我院血细胞分析仪复片规则验证的探讨

徐从琼，朱丽萍，李庆

(昆明医科大学第一附属医院检验科，云南昆明650032)

对我院血细胞分析仪复片规则验证的探讨

徐从琼，朱丽萍，李庆

(昆明医科大学第一附属医院检验科，云南昆明650032)

目的采用Sysmex XE-2100全自动血液分析仪对本院的18条复检规则进行验证，从而提高检验质量及工作效率。方法选取门诊和住院包含了体检、血液科、肿瘤科、产科、新生儿科、呼吸内科等共500份样本经Sysmex XE-2100全自动血液分析仪分析后立即由推片机进行推片和染色，新生儿科标本可手工推片染色。结果仪器假阴性率为1.59%，真阴性率为80.09%，真阳性率为70.45%，假阳性率为19.91%，推片率为29.8%，白血病漏检率为0%。本次复检的假阴性率为1. 59%，达到“＜5%假阴性率”的行业要求。结论临床实验室按规定定时为本医院制定的复片规则进行验证，不仅可降低假阳性率而且进一步提高了工作效率。

血细胞分析仪；复片规则；显微镜镜检

血细胞分析是诊断和辅助诊断白血病、贫血、血小板减少、遗传性疾病、血液寄生虫以及了解疾病的进展及感染程度的一项实验室项目[1]。随着血细胞自动分析仪的普及和不断改进，大大提高了临床检查的效率[2]。但是由于仪器的局限性和某些病理变化等干扰因素影响了血细胞分析准确性，使得某些情况必须由人工镜检来完成[3]。因此，各临床实验室有必要根据自己所用仪器的特点及本室的实际情况制定出适合本院的血细胞复检和显微镜复片规则。通过对本科室已建立的复片规则进行验证，从而进一步完善本科室的复检规则。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂日本Sysmex XE-2100全自动血液分析仪及配套质控品和配套试剂；SP-1000i自动血液学载片制备装置，瑞氏-姬姆萨染液为珠海贝索生物技术有限公司提供，奥林巴斯显微镜(用于血细胞显微镜分析)。仪器设备操作按照标准操作规程进行[4]。

1.2 标本收集选取昆明医科大学第一附属医院临床血液室2d(2016年8月29日至30日)门诊和住院样本，其中血液内科样本65例，肿瘤科与移植科样本30例，外科样本20例，新生儿科样本11例，儿科样本15例，产科样本35例，呼吸内科22例，体检样本302例共500份样本经Sysmex XE-2100全自动血液分析仪分析后立即由推片机进行推片和染色，新生儿科标本可依照《全国临床检验操作规程》进行手工推片染色[5]。

1.3 方法所选500份样本覆盖了白细胞、红细胞及血小板方面的异常及直方图、散点图异常。由SP-1000i推片机自动推片染色烘干后由2名经验丰富的血液检验技术人员进行显微镜观察，每份样本推2份片，每份片分200个细胞，记录结果。

1.4 涂片阳性判断标准对于血细胞形态结果，只要有一名人员发现阳性，经具有较高职称和经验丰富的人员确认后即判断为阳性[6]。镜检结果符合以下13条中任何一条即为阳性。⑴红细胞明显大小不等（体积相差1倍以上)中空淡染>1/2，淡染区的红细胞多于30%；⑵巨大血小板多于15%；⑶见到血小板凝聚；⑷Dohle小体的粒细胞>10%；⑸中毒颗粒中性粒细胞>10%；⑹空泡变性粒细胞> 10%；⑺原始和幼稚细胞≥1%；⑻早幼粒细胞和中幼粒细胞≥1%；⑼晚幼粒细胞≥2%；⑽异型淋巴细胞>5%；⑾NRBC≥1%；⑿浆细胞≥1%；⒀发现疟原虫。

2 结果

仪器假阴性率为1.59%，真阴性率为80.09%，真阳性率为70.45%，假阳性率为19.91%，推片率为29.8%，白血病漏检率为0%。本次复检的假阴性率为1.59%，达到“＜5%假阴性率”的行业要求。为了进一步提高复片组的工作效率和质量，建议可以从以下几个方面进行下一步改进：假阴性样本为红细胞形态异常。与红细胞形态有关的规则有“RDW＞22%或无结果”、“NRBC flag”、“双峰红细胞或多峰红细胞”、“MCV＞120fl或＜60fl”等四条，因假阳性率在可接受范围，可暂为观察。复片样本报警信息总数统计见表1。

表1 复片样本报警信息总数统计

样本报警信息突出的是Lymph%，在19次报警信息中有15次为Lymph%单项报警，有4次报警为儿童样本，故复片组根据第三次复片规则验证的结论，对复检规则进行修改，将“Lym%首次结果＞50%”修改为“WBC＞10×109/L且Lym%首次结果＞50%”。

“No diff or incomplete diff”报警9次，其中有3次样本结果为空值，经检查均为样本量少所致，经手动进样复检后结果为正常结果。而复检规则要求“白细胞分类无结果或结果不全”时须涂片镜检并分类，没有考虑到仪器因样本量不够上机出现报警的情况，而使用同一编号重新复检“No diff or incomplete diff”时报警信息亦会出现，因此，此条“白细胞分类无结果或结果不全”的处理应改为：⑴排除仪器故障及样本不合格。⑵如样本量少（主要针对儿科和新生儿科）重新编号复检时，应该同时删除仪器及LIS所有信息后重测。⑶如样本凝集或有凝块，退回并通知重新采血复查。

3 讨论

3.1 根据日常工作和此次复片规则验证结果在18条复片规则基础上进行适当修改，将第11条Lym%首次结果＞50%”修改为“WBC＞10×109/L且Lym%首次结果＞50%”，理由是此条复片规则假阳性率太高，修改后不仅降低假阳性率而且进一步提高了工作效率。

3.2 原有规则“新生儿首次样本涂片镜检”对仪器是盲点，无操作性，新生儿样本除（Lymph%）同样适用复检规则。

3.3 虽然“NRBC flag”、“WBC unreliability flag”、“Atypical/Variant lymphs(-)”在假阳性率也占到一定比例，但是这些原则性规则，不能修改。

3.3.1 我院有核红细胞报警主要来自儿科、血液科及肾内科等几个科室，多为真阳性，原因是正常新生儿或幼儿血液中存在有核红细胞，成人体内出现有核红细胞则多数与溶血性贫血、急慢性白血病及感染等疾病有关[7]。

3.3.2 通过在日常工作中和对复片规则的验证中发现仪器对单核细胞和异型淋巴细胞不容易区别[8]。在形成的二维散点图上，异型淋巴细胞位于正常淋巴细胞上方，形成一个向上的拖尾形状，由于异型淋巴细胞的体积、颗粒及染色质与大淋巴细胞及单核细胞近似，仪器在鉴别此类细胞形态上存在困难，导致异型淋巴的报警敏感胜高，而特异性低。而提示异淋报警主要是OTHER值及异淋Q-Flags报警[9]。在各种患儿发热疾病中，异型淋巴细胞增高是病毒感染的经典标志。血细胞分析仪对异型淋巴细胞形态学识别能力差，只对异型淋巴细胞有提示，分类显示单核细胞比例增高[3]，因此当仪器报警Atypical/Variant lymphs(-)或MO＞15%时一定要显微镜复检，观察有无异型淋巴细胞的存在及比例，对临床医生初步判断患儿为病毒感染或细菌感染提供重要依据[2]。

3.3.3 儿科、妇科、WBC受其影响会显著降低，常使用刺激造血系统的药物会造成未成熟颗粒水平明显上升；儿科患者使用激素较多，产科妇女在孕早期造血活跃，导致仪器报警“Immature granulocyte flag”占有一定比例[10]。

3.4 肿瘤患者治疗时经常检查WBC数、PLT数，来调整用药剂量或考虑是否停药。由于化疗药物对细胞膜有影响，易造成直方图异常，报警提示增多，使复检率增高，增加了检验人员工作量；为了降低复检率，除医生要求涂片镜检外可不复检[3]。

3.5 大部分血细胞分析仪血小板计数通常为电阻抗原理，依据细胞体积大小形成脉冲，从而得到计数结果，其干扰因素较多，小红细胞、红细胞碎片等体积相当的成分都可能对血小板计数形成干扰，造成计数偏高[11]。对于以大血小板为主和血小板聚集的患者，会导致血小板仪器计数偏低。

综上所述，仪器只能作为一个筛选的手段，必要时仍需人工显微镜检查，加之复片规则的辅助最终才能为临床提供更准确的报告。在血涂片复检规则的临床应用过程中，注意收集、整理发现问题，及时对复检规则进行修改和完善，总结出更有效的血细胞分析仪血涂片复检规则，以提高血细胞分析质量和工作效率[12]。

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R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0508-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.017

2016-12-06；

2017-06-20)

朱丽萍