包虫病防控技术研究

李伟

1青海省棘球绦虫的种类、流行状况及危害状况

青海省内棘球绦虫的种类有细粒棘球蚴、多房棘球蚴和石渠棘球绦虫三种，在生物群落中，并存有棘球绦虫和多房棘球绦虫的严重感染，实为国内外罕见。

细粒棘球绦虫的终宿主是犬、狼和豺等食肉动物；中间宿主是羊、牛、骆驼、猪和鹿等偶蹄类动物，偶可感染马、袋鼠、某些啮齿类、灵长类和人（见图1）。多房棘球蚴常见的终宿主是狐，其次是狗、狼、獾和猫等，在寄生有多房棘球绦虫的终宿主体内也可同时有细粒棘球绦虫寄生。多房棘球蚴主要寄生在野生啮齿类动物如田鼠、麝鼠、旅鼠、仓鼠、大沙鼠、小家鼠以及褐家鼠体内。在我国常见于报道的有黄鼠、鼢鼠、长爪沙鼠、小家鼠、鼠兔以及牦牛、绵羊等，寄生部位主要是肝。人因误食虫卵而感染，由于人是多房棘球绦虫的非适宜中间宿主，人体感染时囊泡内只含胶状物而无原头蚴。石渠棘球绦虫的终宿主是藏狐和高原鼠兔，到目前为止，还未在藏狐和高原鼠兔以外的动物体内发现有石渠棘球绦虫的寄生。

青海棘球蚴病（包虫病）是危害严重的人兽共患性寄生虫病。目前，在青海高原地区发现的是由细粒棘球绦虫虫卵引起的单房性棘球蚴病和由多房棘球绦虫虫卵引起的多房性棘球蚴病（泡球蚴病），因其流行广泛，危害严重，故已引起全省医疗卫生和兽医工作者的普遍关注，并做了大量的调查统计和防治研究工作。

2青海省2010-2013年包虫病研究状况

2.1流行病学研究

2.1.1人群包虫病感染调查笔者等人的实验室以血清学诊断方法结合医学影像学诊断方法对人群包虫病进行了诊断。在调查的752人中，用血清学检测试剂盒共检出50份阳性血清，阳性率为6.6%。检出的50份阳性血清患者，经B超扫描检查，21人确诊为棘球蚴病患者，男性患病率为2.6%，女性患病率为3.0%。

2.1.2中间宿主羊、牦牛、高原鼠兔的感染调查在海晏县、刚察县、共和县屠宰场、湖东种羊场、泽库县和贵南县共检查993只屠宰羊，其中570只羊感染棘球蚴（图2），感染率为57.4%。在海晏县、刚察县、共和县、祁连县、达日县和门源县屠宰场，共检查594头屠宰牦牛，其中205头牦牛感染棘球蚴（图3），感染率为34.5%。在河卡羊场、湟源县和称多县的草场采用捕鼠夹捕捉当地常见高原鼠兔，共捕获并剖检高原鼠兔347只，其中17只高原鼠兔感染棘球蚴包囊，感染率为4.90%。

2.1.3终末宿主犬的感染调查①使用氢溴酸槟榔碱泻下法调查175条藏犬，其中，16条感染棘球绦虫，平均感染率为9.1%，感染强度1～10，195条。②使用犬粪便包虫抗原检测试剂条法调查藏犬611条，其中，128条藏犬试剂条反应阳性，平均阳性率为21.0%。

2.1.4狐狸及藏犬棘球絳虫感染状况2011-2013年，在试验地区进行了部分犬、狐狸棘球绦虫感染率的调查，对收集到的狐狸在-70℃冰箱中进行3周的处理后，进行剖检。对38条狐狸的调查结果显示，6只狐狸感染各类棘球绦虫，感染率为15.8%，石渠棘球绦虫的感染强度为1827（247～4，400），多房绦虫的感染强度为865（116～1，640）。捕捉野犬1条，多房棘球绦虫感染强度高达10，000多条。

2.1.5野生狐狸分布调查及食性分析①使用探照灯计数方法，在河卡地区，夜晚8：00-12：00，选择比较平坦较直的道路10 km，汽车以5～10km/h速度行驶，用探照灯照射公路一侧约1km的区域，发现野生动物用GPS定位，用测距仪测定观察动物的距离，用红外望远镜确定观察动物的种类，次日在发现野生动物的区域附近收集粪便，进行野生动物棘球绦虫的感染调查及食性分析。调查5次共发现野生狐狸5只，野兔3只，按此计算，河卡地区约10 km2分布有野生狐狸1只左右。②使用红外线自动感应相机调查方法，在河卡地区选择离河卡种羊场5、10和50 km的地方，放置红外线自动感应相机6台，每个地点放置2台，2台照相机中间放置羊头（用铁钉固定），调节照相机使其镜头对准中间放置的羊头，对进入照相机红外线感应范围内的动物进行拍照调查。6台照相机均放置3d，拍到野生狐狸1次，鹰1次，旱獭1次，高原鼠兔若干次。③使用野生动物粪便收集及检测方法，于2010年7月—2012年8月在河卡地区野外草地上，通过对路边、草场的随机调查，共捡到疑似狐狸粪便104份。对收集的粪便清洗表面，提取宿主DNA，经PCR扩增测序后确定动物种类。对采集到的104份疑似狐狸粪便，经DNA检查，确定狐狸粪便45份。检查结果表明：河卡地区生活着红狐和藏狐两种野生狐狸，分布区域相互交叉，但河卡山和河卡山以西的高海拔地区，藏狐的分布较多。同时对收集的粪便，用粪抗原检测试剂条进行包虫抗原检测，结果显示：1份粪便呈阳性，虫卵检查也检测到多房棘球绦虫卵。这种方法也可以检测野生动物粪便对环境的污染，为野生动物包虫病的防控提供了依据。

2.1.6狐狸种类和食性比较

①红狐：红狐（Vulpes vulpes）隶属于食肉目（Carnivora），犬科（Canidae），狐属（Vulpes），也称赤狐、火狐，是体型最大的狐狸，体色通常是红棕色，腿细长，背红棕色居多，肩部和体侧通常是黄色，耳背是黑色或棕色，腹部白色，被毛颜色随季节由黄色到棕色变化，尾巴的长度是体长的60%～70%，尾尖呈白色。尾巴上部20 mm的狐腺散发出“狐狸”的味道。

此外，红狐中还有不少体色的变异类型，但不同的色型并不代表不同的亚种，不管是什么色型，尾巴的尖端均为白色。红狐分布在亚洲和欧洲，国内大部分地区都有。红狐可生活在沙漠、森林、都市地区，喜欢灌木丛生的栖息地，在半沙漠地区、高山、森林以及农田里均可发现红狐。食物主要是小的穴居哺乳动物，如各种兔类，除此之外红狐还捕食青蛙、蛇、昆虫、蝴蝶以及蔬菜等；喜欢夜间活动并且善于储存食物，一天的活动范围达10 km，冬天较夏天活动性强。每年的12月底到次年的3月底进行交配。笔者等在2014年对我国青藏高原的红狐食性进行了调查，和同一地区的藏狐相比，食物中高原鼠兔和哺乳类的比例低，而昆虫和植物的比例高，说明青藏高原的红狐是杂食性的，大多数通过捕食寄生多房棘球蚴的高原鼠兔和其他小型啮齿类动物，使红狐感染多房棘球绦虫。在每天近10 km的活动范围内，红狐通过粪便排出虫卵，成为该病的传播者。据相关学者报道，青藏高原狐狸棘球绦虫的感染率为24.8%（37/149）。笔者等在青海省境内海晏、刚察、贵南和玉树地区共剖检狐狸38只，用哺乳动物线粒体D-loop区通用引物（prL5-CACCATTAGCACCCAAAGCT-3和prH5-CCTGAAGTAGGAACCAGATG-3），对采集动物的肌肉或肝脏所提取的DNA进行扩增，扩增后的产物测序，测序结果用BLAST进行相似性比对，确定狐狸种类。经鉴定其中27只为红狐，11只为藏狐。发现1只红狐小肠内寄生疑似多房棘球绦虫。用苏木素对收集到的棘球绦虫进行染色，长约1.5～3.7mm，体节3～4个，包括幼节、成节、孕节，生殖孔在体节中部偏前，从形态学上初步判定为多房棘球绦虫。从虫体中提取DNA帯endprint

，用科绦虫通用的引物进行扩增，对扩增后的产物测序，经DNA鉴定为多房棘球绦虫。

②藏狐：藏狐（Vulpes ferrilata）隶属于食肉目（Carnivora），犬科（Canidae），狐属（Vulpes），毛被厚而致密、柔软，尾毛蓬松，背部浅灰色或浅红棕色，腹部白色，尾尖白色。体形较赤狐略小，但明显大于沙狐。藏狐在我国主要栖息于高原草原或高山草甸，主要分布在青藏高原，目前已知的省份（自治区）有西藏自治区、青海、四川、甘肃和云南等省，在国外见于尼泊尔和印度北部地区。藏狐主要选择草原和草甸作为生活环境，偶尔在灌丛和草地的交错地带出现。2010-2013年，笔者等对生活在青海省海南州河卡地区草甸草原上的藏狐进行了食性分析。结果表明：高原鼠兔和其他小型啮齿类动物及大型哺乳类动物的残骸是它们的主要食物组成，除此之外还有一些昆虫、蚯蚓和植物等。粪中的牧草几乎未被消化，很容易鉴定。由此看来，藏狐的昼间活动与其猎物（高原鼠兔）的昼行性生活习性有关，藏狐的全天活动主要是用来捕食。经青海省林业局批准，笔者等剖检了捕获狐狸和意外死亡的野生狐狸38只，其中11只为藏狐。在5只藏狐的小肠发现寄生疑似棘球绦虫，感染率为45.5%。用苏木素对收集到的棘球绦虫进行染色，发现长约1.2～1.8mm，2个体节，无成节，从形态学上初步判定为石渠棘球绦虫。从虫体中提取DNA帯，用科绦虫通用的引物进行扩增，对扩增后的产物测序，经DNA鉴定为石渠棘球绦虫。

③沙狐：沙狐（Vulpes corsac）身体比赤狐小，为我国狐属中最小者，体长50～60 cm，体重约2～3 kg，尾长25～35 cm，四肢和耳朵比红狐略小。背部呈浅棕灰色或浅红褐色，腹部呈淡白色或淡黄色。毛色呈浅沙褐色到暗棕色，头上颊部较暗，耳壳背面和四肢外侧灰棕色，腹下和四肢内侧为白色，尾基部半段毛色与背部相似，末端半段呈灰黑色。夏季毛色近于淡红色。沙狐上门齿侧边的小尖几乎不存在，外缘门齿与其他门齿略有间隙，并稍靠后。沙狐主要分布在新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙古、西藏，主要栖息于干草原、荒漠和半荒漠地带，远离农田、森林和灌木丛。沙狐白天非常活跃，也有夜间活动的报道，听觉、视觉、嗅觉皆灵敏，四处流浪，无固定居住区域。相比其他狐属，沙狐更具群居性，甚至多只共住同一洞穴。在冬季，沙狐结成小型觅食群体，其中有配偶和成年子女。它们住在类似“沙狐城”的相邻洞穴，这些洞穴经常接管自其他动物，如旱獭等，沙狐挖洞通常簡而不深。沙狐食物生态位宽度随季节不同有所变化，春、夏两季节间的食物组成无显著差异。肉食性，齿细小，以啮齿类动物为主要食物，鸟类和昆虫次之，达乌尔黄鼠、黑线仓鼠和布氏田鼠在沙狐食物组成中超过50%；其他啮齿类动物，如草原旱獭、褐家鼠和跳鼠科等所占比例小于25%；鸟类主要为百灵科，昆虫以蝗科为主，还包括红蝽科、步甲科、虎甲科、水龟甲科等。沙狐捕捉啮齿动物很有一套办法，先跃入空中，再扑向猎物，猎物很少有机会逃脱，借助一双宽大的耳朵，它们能准确定位猎物的跑动方向。通过对狐狸棘球绦虫感染状况的调查，发现藏狐感染石渠棘球绦虫，未发现感染多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫。红狐感染多房棘球绦虫，未发现感染石渠棘球绦虫和细粒棘球绦虫。沙狐体上未发现石渠棘球绦虫、多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫。藏犬上发现了多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫、未发现石渠棘球绦虫。

2.2棘球绦虫形态学及分子生物学研究

2.2.1细粒棘球绦虫扫描电镜形态学观察在日本宫崎大学完成棘球绦虫扫描电镜的观察。先后用70%的酒精、2.5%的戊二醛液、1%锇酸溶液（3小时）固定，取出虫体，用不同浓度的酒精进行脱水、临界点干燥、表面喷金后，扫描电镜观察。

2.2.2棘球绦虫mtDNA基因多态性研究对收集到的虫体提取总DNA，设计和合成引物，对目的片段进行PCR扩增，纯化回收PCR产物，克隆和测序目的基因，构建进化树及同源性分析。青海省感染藏犬和野生狐狸的21个棘球绦虫分离株（16株来自藏犬，5株来自野生狐狸）COI基因片段和NDI基因片段聚类分析进化树和同源性比较均发现，11株分离株为E.g1型，占52.4%，6株分离株为E.m，占28.6%，4株分离株为E.s，占19.0%；碱基的变化为转换和颠换，且转换明显比颠换多。在BLAST网站上，与已登录的COI基因序列进行多重比较，序列同源性88.8%～100%；与已登录的NDI基因序列进行多重比较，序列同源性为83.6%～100%。

2.3藏犬包虫病的防治

2.3.1藏犬驱虫药物的筛选及效果考核

①方法：在青海省刚察县、海晏县、共和县和湖东羊场4个地区各选放牧犬45条共180条。将这些犬分为三组，每组60条，第一组投喂氢溴酸槟榔碱，第二组投喂爱普锐克（吡喹酮咀嚼片），第三组投喂用糌粑包裹的吡喹酮片。用药后45 d，用包虫快速诊断试剂条检查驱虫效果。

②结果：氢溴酸槟榔碱驱虫方法费时、费工，且对检查人员的危险性也较大；爱普锐克咀嚼片，专门为食肉动物研制的驱虫药，藏犬采食率高，驱虫效果好。

2.3.2藏犬药物防治及效果

①药物防治试验：在青海河卡种羊场和称多县珍秦乡用爱普锐克咀嚼片按20 kg体重服用1片，进行藏犬棘球绦虫病防治试验。其中，在河卡种羊场，每隔45 d左右投药一次；称多县珍秦乡，每年4月和10月各投药一次。同时对2个试验点每年4月和10月，用犬粪便检测金标试剂条检查驱虫效果。

②大面积药物防治：2010-2013年，在河卡种羊场，海晏县三角城镇和七四牧场，称多县珍秦乡用爱普锐克咀嚼片进行藏犬棘球绦虫病防治。

③效果考核：4个防治点于2013年4月和7月，用犬粪便检测金标试剂条检查驱虫效果。

2.4小结

1）经调查，青海省人、牛、羊等包虫中间宿主的感染率分别为6.6%、34.5%和57.4%。终末宿主藏犬棘球绦虫的平均感染率为21.0%，野生狐狸也检出多房和石渠棘球绦虫，对防治工作带来难度。endprint

2）经形态学和分子生物学检测，青海省存在细粒、多房和石渠3种棘球绦虫，并且存在基因多态性的变异。

3）藏犬的驱虫以爱普锐克咀嚼片为首选药物。通过对环湖地区和玉树地区间隔45 d和半年驱虫，都取得了良好的效果。

4）通过对海晏和河卡地区的比较，发现牧民群众对包虫病的认识程度直接影响到该地区的防治效果。说明了在包虫病的防治工作中，培训和宣传工作的重要性。

3青海省2013年-2015年初包虫病防治研究状况

3.1青海省玉树州称多和海北州海晏地区藏犬棘球绦虫感染调查

3.1.1调查时间和地区从2010年开始，对称多县珍秦乡地区208只犬粪便进行了棘球绦虫感染调查，结果显示藏犬棘球绦虫的感染率达38.60%。通过3年的防控，于2013年用以上同样方法检查了96条藏犬。在海晏地区以剖检法在具有代表性的甘子河乡、青海湖乡和三角城镇共剖检调查藏犬15条。

3.1.2调查方法

①犬用包虫快速诊断试剂条：犬用包虫快速诊断试剂条由日本宫崎大学寄生虫教研室提供，批号：8201。采集牧犬的新鲜粪检测。打开犬粪便检测试剂盒，取出过滤液管，从铝箔袋中取出检测试剂条，在其上标记犬号、日期、时间。取出粪便收集棍插入粪便中转动数次，取出，旋进过滤液管中充分振荡。挤压过滤管弃去前二滴，然后滴三滴到试剂条检测区内，放置30 min，判断结果。

②剖检法：剖检人员进行严格的防护措施后，对犬进行剖检，应用沉淀法对小肠中的内容物进行检查，收集被检犬感染的棘球绦虫，用70%的酒精进行固定逐条计数、登记。

3.1.3检测结果采用犬棘球绦虫快速诊断试剂条对青海省玉树称多县珍秦乡的96条犬进行了检查，阳性7条，阳性率7.3%，可疑3只。剖检法检查，在具有代表性的甘子河乡，青海湖乡，三角城镇共调查犬15条，其中感染细粒棘球绦虫3条，感染率20%。泡状带绦虫3条，感染率20%。

3.2青海省玉树州称多珍秦乡和海北州海晏甘子河乡藏犬棘球绦虫驱虫推广试验

3.2.1调查时间和地区2013-2014年底，对称多县珍秦乡的11个自然村3，250户牧户的约9，750条藏犬进行了每隔45 d一次的驱虫推广试验，一年投药8次，两年共16次，共投药156，000条次。从2013-2014年底，对海晏甘子河乡和青海湖乡的8个自然村510户牧户的约1，530条藏犬进行了每隔45d一次的驱虫推广试验，两年共16次，共投药24，480条次。

3.2.2药物及试验方法爱普锐克咀嚼片，10 kg体重服用1片投喂。防疫员负责各村藏犬的药物投喂，乡兽医站课题协作人员进行督促和检查，课题组成员每3个月进行一次实地推广指导。

3.2.3驱虫效果2个防治点于2013年4月-2014年12月，收集防治后犬粪便，应用ELISA试验法检查驱虫效果。在称多地区先后采集藏犬防治后粪便318份，在-80℃冰箱进行虫卵灭活处理，于12月份进行ELISA试验统计数据。ELISA试验结果：318份犬中11份ELISA检测呈阳性，阳性率为3.5%。通过ELISA试验检测，結果显示阳性率从2013年的7.3%下降到3.5%，防控效果明显，驱虫后粪便无害化处理。在海晏地区先后采集藏犬粪便183份，经-70℃冰箱处理后，于12月份进行ELISA试验统计数据。ELISA试验结果：183份犬中6份ELISA检测呈阳性，阳性率为3.28%。通过ELISA试验检测，从2013年的20%下降到3.28%，防控效果非常明显，驱虫后粪便无害化处理。爱普锐克咀嚼片驱虫效果高，同时对检查人员也是很安全的。爱普锐克咀嚼片为犬的棘球绦虫最佳驱虫药物。

3.3中间宿主藏羊棘球蚴感染状况调查

通过对青海省两个地区羊感染棘球蚴病的调查和对犬棘球绦虫的防治，从防治前的最高感染率44.4%下降到28%。但是羊感染棘球蚴病仍然较为严重，最低的的感染率仍然达28%。从调查数据上看出，在同一地区，实施包虫病的综合防控措施后，中间宿主上的包虫病的感染率会逐渐降低，减少了对人和家畜的危害。

3.4中间宿主牦牛的调查研究

通过对青海省两个地区牦牛感染棘球蚴病的调查，从防治前的58.9%下降到28.3%，效果显著。但是青海省的这些地区牦牛感染棘球蚴病仍然较为严重，最低的的感染率达28.3%之多。

3.5高原鼠兔棘球蚴的调查研究

在玉树州称多县和达日县的草场采取鼠夹方法捕捉当地常见啮齿类动物高原鼠兔，捕捉到高原鼠兔和田鼠后，立刻进行剖检，对感染棘球蚴阳性的高原鼠兔和田鼠，进行感染部位拍照，进行详细记录，标本用75%的酒精固定。将病变脏器带回实验室剖检并记录囊肿的大小、数量、部位及性质等。

捕捉高原鼠兔和田鼠共计425只，其中感染多房棘球蚴的18只，感染率7.24%，感染强度1～3，其中感染石渠棘球蚴种9只，感染率2.12%.

在青藏高原区域高原鼠兔和田鼠分布广、数量多，危害极大，它们既是牧区大量无主犬的捕食对象，也是野生食肉动物（狐狸、狼等）的捕食对象，导致该地域棘球蚴病传播和流行。

3.6野外狐狸粪便检查

2年共采集疑似狐狸粪便112份，经DNA检查，确定为狐狸粪便的48份。多数粪便因为时间太久未能提出和扩增宿主DNA。检查结果表明：青海地区生息着红狐和藏狐两种野生狐狸，分布区域相互交叉。

用离心漂浮法进行虫卵检查，蔗糖溶液比重1.27 g/mL。取粪便1 g，用蔗糖漂浮离心法检查虫卵，将观察到的虫卵进行计数、收集。

经DNA检查，确定的48份狐狸粪便中，有5份中检查出棘球绦虫虫卵，最多每克粪便中虫卵数达401个，狐狸棘球绦虫的感染率达到10.4%。这就充分说明了，该地区野生狐狸携带棘球绦虫的严重程度，这种传播源的存在，对人类健康及畜牧业生产造成严重的危害。

3.7科普宣传

通过举办培训班及科技人员的现场讲解和示范，使参加培训的基层专业技术人员、项目示范户和牧民群众成为当地包虫病防治的带头人和其他牧民群众的老师，带动当地的包虫病防治工作，实现以户代村、以村代乡、以乡带县的模式，带动广大牧民进行包虫病的综合防控措施，提高对犬驱虫的防治密度，根除野犬的存在，加强疫情监测和疫点调查，有效控制包虫病疫情，防止疫情蔓延。在人群健康教育中开展包虫病防治知识的宣传，增强群众自我保护意识，养成良好的个人卫生习惯，减少手口接触传播方式。

举办包虫防治培训班及包虫防治科普宣传。为了提高基层牧民群众的自防意识，在地方组织当地民间兽医和牧民，举办包虫危害及其防治培训；在村发放包虫危害预防科普手册，手册为藏汉双语，图文并茂，让广大牧民能了解包虫病，重视包虫病，以达到对包虫病预防为主的目的。

4今后的研究目标

1）明确不同种类狐狸对三种棘球绦虫的感染率、中间宿主鼠类与狐狸和犬之间的循环感染关系。研究不同种类狐狸的部分行为习性、不同种类狐狸对三种棘球绦虫的感染率及中间宿主鼠类与终末宿主狐狸间的感染关系。

2）摸清狐狸及犬包虫病病原—虫卵对环境污染的程度与鼠类作为储存棘球绦虫病原的相关因素。

3）根据狐狸行为习性研究结果表明，以洞穴为药物驱虫诱饵投放点，进行野生狐狸的药物驱虫，控制狐狸棘球绦虫虫卵病原对环境的污染，以达到降低虫卵病原对人类和家畜的危害。

4）通过对藏区城镇犬只感染棘球绦虫的流行病学研究及犬只行为学研究，分析出犬只行为对于棘球绦虫传播的影响及相关性。

5）根据不同区域对家养犬进行45 d或半年一次的驱虫，降低犬对棘球绦虫的感染率，减少环境的污染。

6）探索驱除野犬棘球绦虫的控制方法。endprint