苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB表达的影响①

王绍辉 马四补 颜 昱 程哲康 张亚琛 刘同祥

(中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京100081)

·中医中药与免疫·

苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB表达的影响①

王绍辉 马四补②颜 昱 程哲康 张亚琛 刘同祥

(中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京100081)

目的：探讨苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、低氧诱导因子-1α (HIF-1α)、核转录因子(NF-κB)表达的影响。方法：采用HE染色法观察肿瘤组织的病理形态变化，免疫组化法和Western blot法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达，荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κBmRNA的表达。结果：免疫组化法、Western blot法和荧光定量PCR法的检测结果显示，三者结果基本一致，与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB基因表达量和对VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白表达表达率均降低，差异具有显著性(P<0.05)。 结论：苏铁总黄酮治疗肺癌的作用机制可能为通过抑制侵袭转移相关基因VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB的表达，进一步抑制侵袭转移相关功能蛋白VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB的表达，从而发挥抗肺癌侵袭转移作用。

苏铁总黄酮；Lewis肺癌；血管内皮细胞生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；低氧诱导因子-1α；核转录因子

肺癌(Lung cancer)又称为支气管肺癌(Primary bronchogenic carcinoma)，是全球和中国癌症相关死亡的首要原因，在所有类型的肺癌中，NSCLC大约占85%[1,2]。近年来，肺癌的发病率及死亡率在全球范围内仍呈持续上升的趋势[3]，成为全球头号癌症杀手，而这一趋势在我国尤其明显，许多地区特别是在城市，肺癌已成为第一位死亡原因[4]，2015年全国肺癌登记中心发布的数据显示：2011年我国新发肺癌病例65.10万，居恶性肿瘤首位，占恶性肿瘤新发病例19.31%。肺癌发病率为48.32/10万，同期，我国肺癌死亡人数为52.91万，占恶性肿瘤死因的25.04%，肺癌死亡率为39.27/10万[5]。北京2012年共报告肺癌新发病例8 220例，占恶性肿瘤新发病例的20.39%，其中男性5 043例，发病率为77.94/10万；女性3 177例，发病率为49.59/10万；男女比例159∶100[6]。肿瘤侵袭转移是肺癌患者死亡的首要原因，临床肺癌病人死亡人群中有90%是由于肿瘤合并多器官转移，导致多器官衰竭引起的，致使肺癌总的5年存活率仅14%，研究肺癌的发生、发展以及转移的分子机制，寻找针对肺癌的靶向治疗药物是医学研究领域亟待解决的问题，苏铁(Cycas Revolute Thunb) 为苏铁科苏铁属常绿棕榈状木本植物，在我国主要分布在台湾、广东、 海南、福建、广西、云南、四川等省区，其主要成分为双黄酮化合物、氨基酸和糖等，古籍记载其性味甘、平、涩，有小毒，具有清热、止血、 散瘀的功效[7,8]。课题组前期研究发现，苏铁总黄酮可以调节免疫细胞因子IL-2、IL-10 的表达水平，抑制Lewis 肺癌模型小鼠肿瘤细胞的生长与转移[9]。为了进一步深入研究苏铁总黄酮抗肿瘤作用机制，本研究通过建立Lewis肺癌小鼠模型，探讨苏铁总黄酮对Lewis肺癌模型小鼠血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、低氧诱导因子-1α (Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、核转录因子(Nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响，阐述苏铁总黄酮对Lewis 肺癌转移的抑制作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验仪器与设备 Neofuge 15R台式高速冷冻离心机(Heal Force)；Bead Ruptor 12多样品研磨珠均质仪(OMNI)；7300荧光定量PCR仪(ABI)；SW-CJ-1FD超净工作台(苏净安泰)；FBZ2001-up-p标准试剂型纯水仪(青岛富勒姆科技有限公司)。

1.1.2 主要实验试剂及耗材 苏铁总黄酮(自制，含量90%)；注射用顺铂(齐鲁制药有限公司，货号H37021358)；Trizol Reagent(Invitrogen Life Technologies，货号15596-026)；HyPureTMMolecular Biology Grade Water(HyClone，货号SH30538.02)；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Κit(Thermo，货号#Κ1622)；FastStart Universal SYBR Green Master(Rox)(Roche，货号04 913 914 001)；离心管、TIP头(Axygen Biosciences)；三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)；引物由Invitrogen Biotechnology Co.,LTD合成。

1.1.3 实验细胞及动物 Lewis肺癌瘤源细胞由中国少数民族传统医学研究院民族药物物质基础研究所黄火强教授惠赠；清洁级C57BL/6小鼠，雄性，6～7周龄，100只，体重(21±2.1)g，购于中国医学科学院实验动物研究所，许可证号：SCXΚ(京)2014-0004。

1.2 方法

1.2.1 Lewis肺癌荷瘤小鼠模型的建立、分组及给药 Lewis肺癌细胞用含10%胎牛血清的DMEM于37℃、5%CO2培养箱中常规培养，传代后，待细胞达到所需量时，取对数生长期LLC细胞，0.25%胰蛋白酶消化后，用吸管吹打成单细胞悬液，1 000 r/min离心5 min后去除培养基，以生理盐水调整细胞浓度至5×106L-1(显微镜下计数)，以0.2 ml(约1×106个细胞)接种于C57BL/6J近交系小鼠右腋部背侧皮下，以接种后第2～9天于小鼠右腋皮下触摸到肿瘤结节(肿瘤平均直径达到约5 mm)为建模成功，将动物随机分组开始给药。选择肿瘤体积较均匀的84只荷瘤小鼠随机分成模型组(Model)、苏铁总黄酮高剂量组(H)、苏铁总黄酮中剂量组(M)、苏铁总黄酮低剂量组(L)、顺铂组(S)、联合用药组(顺铂+苏铁总黄酮中剂量,C),每组12只。模型组和空白组小鼠每天灌胃生理盐水0.4 ml，共14 d；苏铁总黄酮组小鼠每天灌胃0.4 ml，共14 d；顺铂组小鼠于1、3、5 d腹腔注射0.4 ml；联合用药组小鼠上午灌胃苏铁总黄酮中剂量0.2 ml，于1、3、5 d下午腹腔注射顺铂0.2 ml，共14 d。

1.2.2 标本采集及处理 各组动物取材前都禁食12 h，在末次给药后30 min，处死小鼠，迅速将荷瘤小鼠肿瘤组织剥离，剪取一部分肿瘤组织标本快速置于4%多聚甲醛中固定。另取肿瘤组织2份，迅速进行液氮速冻，-80℃保存备测。

1.2.3 检测方法

1.2.3.1 肿瘤组织病理形态学观察 取4%多聚甲醛固定的Lewis肺癌小鼠肿瘤组织，常规进行石蜡包埋、石蜡切片及HE 染色，光镜下观察肿瘤组织的病理形态变化。

1.2.3.2 免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达 取4%多聚甲醛固定的Lewis肺癌小鼠肿瘤组织，常规进行脱水、石蜡包埋，制成肿瘤组织切片，切片常规免疫组化法染色检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达，免疫组化步骤严格按照试剂盒说明书进行，用显微镜图像采集系统采集图像，显微镜下以肿瘤细胞质出现棕黄色颗粒者为阳性，在高倍镜(40×10)下，每张切片随机选取5个视野，用Image-pro plus 分析软件进行阳性显色的平均积分光密度测定(IOD=阳性区域面积阳性强度)代表阳性细胞VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达量。

1.2.3.3 荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κBmRNA 的表达 取Lewis肺癌小鼠肿瘤组织，用超纯RNA提取试剂盒提取肿瘤组织样本中的总RNA，使用紫外分光光度计检测RNA的纯度和浓度，1%琼脂糖凝胶电泳，鉴定RNA的纯度及完整度；根据反转录试剂盒使用说明书制备cDNA，按照SYBR Green荧光定量PCR试剂盒说明书，进行PCR反应，引物序列见表1，反应体系为SYBR Mix 10 μl，cDNA 4 μl、上下游引物各0.4 μl、ddH2O 5.2 μl。反应条件为：95℃变性10 min，95℃ 15 s，60℃ 60 s，40个循环。以β-actin为内参，以2-ΔΔCt表示mRNA的相对表达量，Ct值为阈值，ΔCt=Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt-ΔCt对照，以反映出目的基因相对于对照组在模型组的表达水平。

1.2.3.4 Western blot法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达 取肿瘤组织块用冷PBS洗涤2～3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积的蛋白酶抑制剂，在冰上彻底匀浆后将匀浆液转移至1.5 ml离心管中，振荡。冰浴30 min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解，12 000 r/min离心10 min，收集上清，即为总蛋白溶液。BCA法测蛋白浓度， SDS-PAGE电泳(浓缩胶电压75 V，分离胶用120 V)，300 mA恒流转膜30 min，封闭后分别加入VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB一抗，4℃过夜，用TBST在室温下脱色摇床上洗3次，每次5 min，加入HRP 标记的二抗，37℃ 振荡60 min，加入ECL 发光液，X 线胶片曝光，经显影、定影、扫描后观察结果。应用Image-Pro Plus 软件对扫描图像的目的条带进行灰度分析，各目的条带与β-actin 的灰度比值为目的蛋白的相对表达量。

表1 荧光定量PCR引物序列

Tab.1 RT-PCR primer

TargetgenesPrimersequences(5'-3')M-β-actin-SGTGACGTTGACATCCGTAAAGAM-β-actin-AGTAACAGTCCGCCTAGAAGCACM-p65NF-κB-SAAGCACAGATACCACCAAGACACM-p65NF-κB-ACGCACTGCATTCAAGTCATAGTCM-bFGF-STTGCTATGAAGGAAGATGGACGM-bFGF-ACCAACTGGAGTATTTCCGTGACM-VEGF-SAGGAGTACCCCGACGAGATAGAM-VEGF-ACACATCTGCTGTGCTGTAGGAAM-HIF-1a-SGTGCTGATTTGTGAACCCATTM-HIF-1a-ATCAACCCAGACATATCCACCT

2 结果

2.1 肿瘤组织HE染色后的病理形态学观察 通过HE染色后的肿瘤组织细胞形态显示：模型组的肿瘤细胞密度大，异型性明显，生长迅速，细胞核深染，核质比例大，核体积偏大，轮廓清晰，可见双核、多核或巨核细胞。苏铁总黄酮高剂量组、中剂量和低剂量组的肿瘤细胞发生明显形态学变化，密度变小、细胞核质比例变小，皱缩，细胞核深染的比例相对减少，染色质凝聚，细胞出现片状坏死等凋亡现象。顺铂组和联合用药组的肿瘤细胞密度最小，细胞核破碎，核质比例小，核仁小且不明显，细胞出现大片坏死现象，见图1。

2.2 免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达情况 通过免疫组化法检测各组肿瘤组织发现VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB均有阳性表达，与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组、顺铂组和联合用药组VEGF、bFGF、NF-κB蛋白的表达率均降低，具有极显著性差异(P<0.01)；与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组和联合用药组HIF-1α蛋白的表达率降低，具有极显著性差异(P<0.01)，顺铂组具有显著性差异(P<0.05)。与顺铂组比较，苏铁总黄酮高剂量组和低剂量组VEGF蛋白的表达率降低，具有极显著性差异(P<0.01)；与顺铂组比较，苏铁总黄酮高剂量组和联合用药组bFGF蛋白和NF-κB蛋白的表达率均降低，具有极显著性差异(P<0.01)；与顺铂组比较，苏铁总黄酮各剂量组HIF-1α蛋白的表达率均降低，具有极显著性差异(P<0.01)，联合用药组具有显著性差异(P<0.05)。结果说明苏铁总黄酮各给药组和联合用药组能够抑制Lewis肺癌模型小鼠肿瘤组织内VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达。见图1，表2。

2.3 Western blot法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达情况 通过Western blot法检测各组肿瘤组织发现：与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组、顺铂组和联合用药组VEGF、bFGF、NF-κB蛋白表达量均显著降低，差异具有极显著性统计学意义(P<0.01)，与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组和联合用药组HIF-1α蛋白表达量显著降低，差异具有极显著统计学意义(P<0.01)，顺铂组差异具有显著统计学意义(P<0.05)；联合用药组相对于顺铂组降低更明显，提示有一定的增效作用；与顺铂组比较，苏铁总黄酮各剂量组VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达量降低，差异具有极显著统计学意义(P<0.01)，联合用药组VEGF、bFGF蛋白的表达量差异具有显著统计学意义(P<0.05)，而HIF-1α、NF-κB蛋白的表达量差异无明显统计学意义，见图2。

2.4 荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB mRNA 的表达情况 荧光定量PCR法检测肿瘤组织发现：对于VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB mRNA的表达，与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组、顺铂组和联合用药组VEGF 、bFGF、NF-κB mRNA的表达量均显著降低，差异具有极显著统计学意义(P<0.01)，联合用药组相对于顺铂组降低更明显，提示有一定的增效作用；与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组HIF-1α mRNA的表达量显著降低，差异具有极显著统计学意义(P<0.01)，顺铂组差异具有显著统计学意义(P<0.05)，联合用药组无差异。与顺铂组比较，苏铁总黄酮各剂量组VEGF、bFGF、NF-κB mRNA的表达率差异具有极显著统计学意义(P<0.01)，与顺铂组比较，苏铁总黄酮中剂量组HIF-1α mRNA的表达量差异具有显著统计学意义(P<0.05)，其他各组无统计学意义，见图3。

图1 HE染色及免疫组化结果(10×40)Fig.1 HE staining and immunohistochemical results (10×40)

表2 免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达情况

Tab.2 Expression of VEGF,bFGF,HIF-1α,NF-κB protein in tumor tissue of each group by immunohistochemistry

GroupsVEGFbFGFHIF-1αNF-κBModel18.09±1.3220.04±1.0322.46±1.8025.79±1.03H13.87±0.492)4)10.87±1.262)4)14.87±1.492)4)15.87±1.482)4)M15.19±0.482)14.66±0.342)18.62±0.802)4)16.61±2.012)4)L13.51±0.962)4)11.72±0.752)16.39±1.232)4)15.39±1.232)4)S15.67±1.022)11.84±1.142)19.87±0.771)23.17±0.651)C15.22±0.672)9.56±0.292)4)17.25±1.812)3)19.25±0.842)4)

Note：n=3,1)P<0.05；2)P<0.01 vs model group；3)P<0.05；4)P<0.01 vs cis-DDP group (S group).

图2 Western blot法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白的表达情况Fig.2 Expression of VEGF，bFGF，HIF-1α，NF-κB in mice tumor tissue by Western blotNote: n=3,**.P<0.01 vs model group，△.P<0.05,△△.P<0.01 vs cis-DDP group (S group)A.The expression of VEGF in mice tumor tissue by Western blot;B.The expression of bFGF in mice tumor tissue by Western blot;C.The expression of HIF-1α in mice tumor tissue by Western blot;D.The expression of NF-κB in mice tumor tissue by Western blot.

图3 荧光定量PCR法检测肿瘤组织中VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB mRNA的表达水平Fig.3 Expression of VEGF，bFGF，HIF-1α，NF-κB mRNA in mice tumor tissue by Real-time PCRNote: n=3,*.P<0.05,**.P<0.01 vs Model group，△.P<0.05,△△.P<0.01 vs cis-DDP group (S group).A.The expression of VEGF mRNA in mice tumor tissue by Real-time PCR;B.The expression of bFGF mRNA in mice tumor tissue by Real-time PCR;C.The expression of HIF-1α mRNA in mice tumor tissue by Real-time PCR;D.The expression of NF-κB mRNA in mice tumor tissue by Real-time PCR.

3 讨论

肺癌的发生、发展、侵袭和转移是一个极其复杂的过程，涉及肿瘤细胞运动、内渗、在血液或淋巴系统中的循环、外渗以及在新组织和器官中的生长。复杂且高度选择的转移级联不仅取决于肿瘤细胞的固有特征，而且依赖于衍生肿瘤细胞的微环境，肿瘤生长的微环境能促进肿瘤生长、活化休眠的癌细胞，在肿瘤细胞发展和转移中起关键作用。缺氧诱导因子1α ( Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α ) 是组织内缺氧的标记物之一，HIF-1α在多种肿瘤中存在高表达，并可诱导多种与细胞适应缺氧微环境有关的基因表达，是调节肿瘤细胞适应缺氧的核转录因子，在肿瘤细胞的侵袭、转移、永生化、肿瘤血管生成等方面起重要作用[10]。核转录因子-κB (Nuclear factor-κB,NF-κB ) 是一种多向性蛋白因子，广泛存在于高级真核生物的各种细胞的细胞架中，通常以p65-p50 二聚体的形式存在，静止状态下NF-κB和IκB形成复合体，以无活性形式存在于胞浆中。通过诱导相关基因转录，进而参与机体的免疫应答、炎症反应及细胞生长、发育、分裂、凋亡[11]。越来越多的证据表明在肿瘤转移中NF-κB同联系炎症与缺氧的HIF-1α起交互作用[12,13]，马路等[14]的研究结果发现，NF-κB p65 、NF-κB p50的基因和蛋白的表达水平明显高于癌旁组织和肺良性病变组织，其可能促进了肿瘤的发生发展，可以作为临床预后的一个参考指标。

肿瘤血管生成是肿瘤细胞诱导的微血管持续、失控性生长和肿瘤血液循环建立的过程，是肿瘤生长及转移最为重要的因素。VEGF、bFGF是重要的血管生成促进因子，VEGF 又称血管渗透性因子，是一种分子量为 34～45 kD的分泌性糖蛋白，其主要生物学功能有：① 促进血管形成；②增加血管通透性；③刺激单核细胞及成骨细胞的迁移；④诱导蛋白水解酶、组织因子、基质胶原酶等在内皮细胞表达，激活第Ⅷ因子从内皮细胞释放，改变细胞外基质，介导内皮细胞迁移和浸润，利于血管生成[15-17]。bFGF是FGF超家族成员，是由154个氨基酸组成的多肽，其最主要的生物学功能是通过细胞表面的受体刺激多种细胞的分裂和增殖，有明显的促有丝分裂作用，作为一种多功能细胞生长因子，能够高效促进血管内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞生长[18]。近年研究发现 bFGF 在肾癌、肺癌和白血病等多种恶性肿瘤细胞中过度表达，促进肿瘤生长、浸润和转移[18-20]。

本实验中的HE染色结果显示，与模型组比较，苏铁总黄酮各给药组肿瘤组织细胞核形态稍微清晰，细胞核较小，颜色稍浅，这说明了苏铁总黄酮各给药组均可抑制肿瘤细胞的恶性增殖。顺铂组和联合用药组则反映了其可通过阻滞肿瘤细胞的DNA复制，直接杀灭肿瘤细胞的作用，尤其是联合用药组则提示了顺铂+苏铁总黄酮联合用药具有一定的增效减毒的作用，提示癌症患者可采用中西药结合的方法进行治疗，起到标本兼顾的作用。本实验中的免疫组化检测结果、Western blot法检测结果与荧光定量PCR检测结果说明了苏铁总黄酮各给药组对Lewis肺癌模型小鼠VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB基因表达量的影响和对VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB蛋白表达的影响基本一致，提示苏铁总黄酮治疗肺癌的作用机制可能为：①通过抑制侵袭转移相关基因VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB的表达，进一步抑制侵袭转移相关功能蛋白VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB的表达，从而发挥抗肺癌侵袭转移作用；②通过干预肿瘤缺氧微环境，调控在肿瘤转移中起关键作用的TNF-α/NF-κB信号转导通路，通过NF-κB介导的Snail稳定表达而诱导EMT过程，从而抑制肺肿瘤转移[21，22]；③通过降低肿瘤中的HIF-1α的过表达，降低其介导VEGF表达上调或者直接作用于VEGF使其表达下调，进而阻止新生血管的生成，达到抑制肺癌侵袭转移的作用[23，24]；④通过降低血管生成促进因子 VEGF、bFGF的表达，控制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤细胞的生长、增殖、浸润与转移而发挥抑瘤作用[25]。因此，对于肺癌的治疗，有可能在转录因子水平上寻找到一个新的突破点，VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB可能成为免疫调节治疗的新部位和新靶点，因此，寻找能直接抑制VEGF、bFGF、HIF-1α、NF-κB活性的基因药物是生物医药科研领域一个重要的研究方向。

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[收稿2017-01-04 修回2017-02-15]

(编辑 许四平 刘格格)

Effects of total flavonoids from Cycas Revolute on expression of VEGF,bFGF,HIF-1α and NF-κB in model mice of Lewis lung cancer

WANGShao-Hui,MASi-Bu,YANYu,CHENGZhe-Kang,ZHANGYa-Chen,LIUTong-Xiang.

InstituteofChineseMinorityTraditionalMedicine,MinzuUniversityofChina,Beijing100081,China

Objective:To investigate the effects of total flavonoids from Cycas Revolute on expression of vascular endothelial growth factor (VEGF),basic fibroblast growth factor (bFGF),Hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) and nuclear factor-κB(NF-κB) in model mice of Lewis lung cancer.Methods: The expressions of VEGF,bFGF,HIF-1α and NF-κB in tumor tissues were detected by immunohistochemistry and Western blot.The expression of VEGF,VEGF and NF-κB in tumor tissues were detected by fluorescent quantitative PCR.BFGF,HIF-1α and NF-κB mRNA were detected by immunohistochemistry.Results: The results of immunohis-tochemistry,Western blot and Real-time PCR showed that the results were basically the same,compared with model group,the expression of VEGF,bFGF,HIF-1α,NF-κB mRNA and the expression of VEGF,bFGF,HIF-1α and NF-κB were decreased,the difference was highly significant (P<0.05).Conclusion: The mechanism of total flavonoids from Cycas Revolute in the treatment of lung cancer may be through inhibition of the expression of VEGF,bFGF,HIF-1α,NF-κB in invasion and metastasis,and further inhibit the expression of VEGF,bFGF,HIF-1α and NF-κB in invasion and metastasis-related proteins,thus play a role of anti-lung cancer invasion and metastasis.

Total flavonoids from Cycas Revolute;Lewis lung cancer;VEGF;bFGF;HIF-1α;NF-κB

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.07.015

①本文为中央民族大学国家级大学生创新创业训练计划资助项目(GCYS2016110001)。

王绍辉(1990年-)，男，在读博士，主要从事民族药资源调查及有效成分研究，E-mail: jingchu1990@outlook.com。

及指导教师：刘同祥(1968年-)，男，博士，博士生导师，教授，研究员，主要从事民族药物资源与民族药新药开发等方面的研究，E-mail: tongxliu123@hotmail.com。

R285.5

A

1000-484X(2017)07-1029-06

②贵阳中医学院，贵阳 550002。