饲粮铜对生长獭兔血清免疫、血液生化、铜消化率及组织铜沉积的影响

雷 鸣 （山东省郓城县畜牧局动检所 274700）

隋啸一 刘 磊 李福昌 （山东农业大学动物科技学院 山东 泰安）

饲粮铜对生长獭兔血清免疫、血液生化、铜消化率及组织铜沉积的影响

雷 鸣 （山东省郓城县畜牧局动检所 274700）

隋啸一 刘 磊 李福昌 （山东农业大学动物科技学院 山东 泰安）

本试验旨在研究饲粮铜水平对生长獭兔血清免疫、血液生化、铜消化率及组织铜沉积的影响。选取200只体况相近的35日龄断奶獭兔，随机分为5组，每组40个重复，每个重复一只，分别饲喂铜添加水平为0、5、15、45、135 mg/kg的基础日粮，饲粮中铜含量实测值为8.19、13.56、23.76、54.08、143.68mg/kg，预试期7d，正试期59d。结果表明：饲粮铜水平对生长獭兔血清总蛋白(P=0.0002)、白蛋白(P<0.0001)和尿素(P=0.0088)含量有极显著影响，对极低密度脂蛋白(P=0.0367)有显著影响，饲粮铜水平对生长獭兔食入铜(P<0.0001)、粪铜(P<0.0001)、可消化铜(P<0.0001)和铜的表观消化率(P<0.0001)均有极显著影响，对肝脏铜含量(P<0.0001)有极显著影响。

铜 生长獭兔 血清 铜沉积

微量元素铜是动物生长所必需的重要微量元素之一，可以参与机体蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质的代谢活动，在动物生长发育、繁殖代谢、机体造血、增强机体抵抗力、预防疾病等[1-3]方面都起到了关键性的作用。目前，国内外对铜的研究主要集中在猪、牛、禽等上，对獭兔的研究基本处于空白。为探讨铜对生长獭兔的血清免疫、血液生化、铜消化率及铜组织沉积量的影响而设计了本课题。

1 材料与方法

1.1 试验饲粮 基础饲粮参考美国NRC(1977)和谷子林(1998)建议的家兔生长期饲养标准配制，其组成和营养水平见表1。在饲粮中以五水硫酸铜(CuS04·5H20)的形式分别添加0、5、15、45和35 mg/kg的铜，饲粮中铜含量的实测值分别为8.19、13.59、23.78、54.08和143.68 mg/kg，并用制粒机将饲粮压制成直径为4~6mm的颗粒饲料，在通风干燥避光处储存备用。

1.2 试验动物分组与饲养管理 选取体重相近(1061±17g)的同期断奶生长状况良好的獭兔200只，公母各占1/2，随机分成5组，每组40个重复。试验期间单笼单饲，每天07:00和18:00各饲喂1次。采用常规饲养管理和免疫程序，自然采光和通风，自由采食和饮水。试验预试期7d，正试期59d。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) (%)

1.3 样品采集与制备 在饲养试验结束前7d，每组随机抽取8只试验兔，转移到经过消毒处理的代谢笼内，单笼饲喂，并饲喂相应的试验饲粮，自由采食和饮水。预试期3d，预试期结束后连续4d收集每只试验兔全天的粪样和尿样，4℃密封保存，用于检测铜消化率。在试验结束当天清晨空腹称重，每组随机选择8只试验兔进行心脏采血10ml，放置于肝素钠抗凝管中静置，3000r/min离心15min，将所得血清分装于Eppendorf管中，置于-20℃下冷冻保存待测。在试验兔屠宰后，取肝脏、前腿肌肉、后腿肌肉、背腰肌肉样品于冻存管中置于液氮中保存。

1.4 测定指标和方法 （1）血清免疫球蛋白的测定：血清中免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)用ELISA试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)在Biotek ELX808超级酶标仪进行测定。（2）血清生化指标的测定：血清中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)、尿素(UREA)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的测定采用日本和光提供的试剂盒，按说明书操作，并在日立7020型全自动分析仪上进行测定。（3）铜消化率的测定：饲料和粪中的铜采用干灰化法处理，即称取一定量样品于瓷坩埚中，放到电陶炉上小火加热炭化，待到无烟时放入马弗炉中灰化至无炭粒，取出后加入少量稀盐酸溶解，放到电陶炉上加热至微沸，然后将其转移至25ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀待检测。铜含量的测定采用火焰原子吸收法进行测定。可消化铜=食入铜－粪铜，铜的表观消化率(%)=可消化铜/食入铜×100%。（4）组织铜含量的测定：肌肉和肝脏中铜含量的处理方法、测定方法与饲料和粪中的铜含量的处理方法、测定方法相同。

1.5 数据处理 用SAS 9.1.3统计软件中的GLM进行数据的方差分析，用Duncan氏法进行数据多重比较检验。实验结果以平均值和均方根误差表示，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 饲粮铜添加水平对1~3月龄獭兔血清免疫球蛋白的影响 由表2可以看出，饲粮铜添加水平对血清免疫球蛋白A、G、E均无显著影响(P>0.05)。

表2 铜对1~3月龄獭兔血清免疫球蛋白的影响 (μg/ml)

2.2 饲粮铜添加水平对1-3月龄獭兔血清生化指标的影响由表3可以看出，饲粮铜添加水平对总蛋白、白蛋白、尿素有显著影响(P<0.05)，铜添加试验组要明显高于对照组；对总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均无显著影响(P>0.05)。

表3 铜对1~3月龄獭兔血清生化指标的影响 (g/L、mmol/L)

2.3 饲粮铜添加水平对1~3月龄獭兔铜消化率的影响 由表4可以看出，饲粮铜添加水平对食入铜、粪铜、可消化铜、铜的表观消化率有显著影响(P<0.05)。

表4 铜对1~3月龄獭兔铜消化率的影响 (mg/d、%)

2.4 饲粮铜添加水平对1~3月龄獭兔组织铜含量的影响由表5可以看出，饲粮铜添加水平对肝脏铜含量有极显著影响(P<0.05)，随着铜添加量的增高，肝脏内沉积的铜呈现增多的趋势；对肌肉铜含量无显著影响(P>0.05)。

表5 铜对1~3月龄獭兔组织铜含量的影响 (mg/kg)

3 讨论

3.1 铜对1~3月龄獭兔免疫球蛋白的影响 铜可以作为外界抗原刺激巨噬细胞的吞噬作用，从而刺激休止期的B淋巴细胞分化增殖为浆细胞[4]，而浆细胞可以在粗面内质网中合成免疫球蛋白A、免疫球蛋白E、免疫球蛋白M等免疫球蛋白分子。本试验结果表明，饲粮铜添加水平对免疫球蛋白A、免疫球蛋白E、免疫球蛋白M均无显著影响，这可能是B淋巴细胞对一定量的铜具有耐受性，本试验铜添加的最高剂量并没有起到刺激B细胞分化增值的作用，这与徐之勇[5]对雏鸡饲喂100~300mg/kg铜对免疫球蛋白含量没有影响的结果相似。

3.2 铜对1~3月龄獭兔血清生化指标的影响 对于獭兔，血清生化指标是一种极其重要的指标，可以直接或者间接的反映机体的代谢以及健康状况。血液生化水平主要由总蛋白、白蛋白、尿素、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等指标来反映。对于处于生长期的动物来说，蛋白质的利用率比较高，那么血清总蛋白和白蛋白含量升高[6]。血清中的尿素含量也可以直接反应机体蛋白质代谢的情况，血清中尿素的含量越低，说明机体排出的氮越少，蛋白质的利用率越高[7]；当蛋白质的利用率降低时，血清尿素的含量首先增加，但与氮的利用率相关不显著[8]。Paik[9]提出饲粮中添加铜可以显著降低血浆中胆固醇的含量。低密度脂蛋白的主要作用是将肝脏合成的胆固醇运送到机体各个组织，高密度脂蛋白的主要作用是将肝外组织的胆固醇运送到肝脏中进行代谢，极低密度脂蛋白的主要作用是把肝脏合成的脂质转运到血液中运输到机体各个组织中。本试验结果表明，生长獭兔饲粮中添加铜可以提高总蛋白、白蛋白的含量，促进蛋白质合成，增加蛋白质的沉积，促进生长发育；饲粮中添加铜可以提高血清中尿素的含量，这与前人的研究结果存在差异；饲粮中添加铜可以显著降低血清中极低密度脂蛋白的含量，这说明肝脏合成的脂质转运到血液中的含量变低。

3.3 铜对1~3月龄獭兔铜消化率的影响 饲粮中的铜进入消化道后，主要的吸收部位在十二指肠和小肠前端，通过与氨基酸结合通过粪便排出体外。研究发现在猪的饲粮中添加高剂量的铜会使其粪便中铜的沉积量变大[10,11]。盖文婷[12]以小白鼠作为研究对象发现，饲粮中添加纳米氧化铜能够显著提高小白鼠铜的表观消化率。吴学壮[13]研究发现饲粮中含高剂量的铜会增加铜在机体内的沉积。本试验研究结果显示，饲粮中添加铜可以极显著的提高食入铜、粪铜、可消化铜以及铜的表观消化率，这说明铜的摄入量增加在使机体铜的沉积量增加的同时也会使铜的排出量增加。

3.4 铜对1~3月龄獭兔组织铜含量的影响 国内外很多研究表明，组织中铜含量与饲粮中铜含量呈现正相关趋势。王希春[14]研究表明饲粮中添加高剂量的铜可以提高仔猪肝脏、肾脏等组织中铜的沉积量。刘强[15]研究发现，高铜饲粮可以显著提高肉牛肝脏内的铜含量。当铜饲喂过量时，铜会积聚在肝脏内，但是不会积聚在肌肉组织中[16]。本试验结果与前人研究进展一致，表明饲粮中添加铜可以提高生长獭兔肝脏内铜的含量，主要是因为肝脏是动物主要的储铜库，当饲粮中铜的含量发生变化时最先影响到的就是肝脏内铜的含量。

4 结论

综合本试验测定指标，断奶至3月龄生长獭兔饲粮适宜铜添加水平为15mg/kg(饲粮中铜的实测值为23.76mk/kg)。

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1007-1733(2017)07-0003-03

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