干热和药剂处理对瓠瓜种子CGMMV的抑制效果

韦海忠，吴新义，吴晓花，杨新琴，徐 沛，鲁忠富，余晓虹，李国景*

(1.台州科技职业学院，浙江 台州 318000； 2.浙江省农业科学院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省种植业管理局，浙江 杭州 310020)

干热和药剂处理对瓠瓜种子CGMMV的抑制效果

韦海忠1，吴新义2，吴晓花2，杨新琴3，徐 沛2，鲁忠富2，余晓虹2，李国景2*

(1.台州科技职业学院，浙江 台州 318000； 2.浙江省农业科学院 蔬菜研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省种植业管理局，浙江 杭州 310020)

CGMMV是瓠瓜上的一种重要病害，对瓠瓜种子进行消毒是防治的关键。本研究利用ELISA检测技术，分析比较干热处理和药剂处理对钝化种子中CGMMV的效果，发现两者均能有效钝化种子中的CGMMV。但干热处理后的种子随着放置时间的延长，发芽率会急剧下降，而药剂处理对种子发芽率的影响较小。

瓠瓜； CGMMV； 干热处理； 药剂处理

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV)属于芜菁花叶病毒科烟草花叶病毒属的一种，主要侵染黄瓜、西瓜、甜瓜、瓠瓜、南瓜等葫芦科作物，引起叶片斑驳褪绿、花叶，果实出现水渍、纤维化[1]。CGMMV最早于1935年在英国黄瓜上发现，随后在德国、芬兰等许多国家都有报道[2-3]。CGMMV曾在日本和韩国大面积爆发，对两国的西瓜和甜瓜生产造成毁灭性打击，至今仍是生产中的严重问题[4-5]。2003年，该病在我国东北地区的西瓜和黄瓜田间首次发现，2005年在辽宁省爆发，造成西瓜产量大面积减产[6]，截至目前在我国十多个省份的葫芦科作物上都检测到CGMMV病毒[7]。CGMMV传播迅速、危害严重，世界上许多国家和地区将其列为重要的检疫性病毒，我国于2006年将之确定为全国农业植物检疫性有害生物，属国家三类检疫性病害[8]。

瓠瓜[Lagenariasiceraria(Molina) Standl.]又名瓠子、长瓜、蒲瓜、夜开花、葫芦等，隶属葫芦科葫芦属，主食其嫩果，是我国南方地区夏季重要的瓜类蔬菜，也是嫁接黄瓜、西瓜等首选的砧木[9]。在我国，瓠瓜栽培已经有7 000多年的历史，目前全国栽培总面积超过20万hm2。近年来，在江苏的露地瓠瓜、湖南的砧木瓠瓜上相继发现CGMMV症状的病株，且已经证实为CGMMV病毒[10-11]。带毒种子是CGMMV远距离传播定殖的重要途径，加强种子检测是防治该病害的关键措施之一。本研究采用干热处理和药剂处理方法对瓠瓜种子进行消毒，对其消毒效果和种子发芽率进行比较研究，进而选择适合瓠瓜种子大规模处理、简单有效的消毒方法。

1 材料与方法

1.1 供试材料

从农户田间出现CGMMV典型症状的植株上采摘瓠瓜成熟果实，剖取种子后备用。

1.2 干热处理

将病毒瓜中剖取的种子清洗、晾干后，平铺于恒温恒湿试验箱中(深圳欧朗，OL-THS-200T)，参照马凯慧等[12]建议的程序进行干热处理。种子加热至35 ℃恒温处理24 h，加热升温至50 ℃处理24 h，再加热至72 ℃处理72 h，最后自然降温至室温后结束处理。

1.3 药剂处理

将剖取出的湿种子直接用苏纳米100(艺康化工有限公司)稀释80倍的工作液浸泡40～60 min，期间搅动数次，保证种子能充分的浸透，最后用清水漂洗2遍，自然晒干。

1.4 CGMMV专化的ELISA检测

利用双抗体夹心ELISA方法检测未处理、经干热处理和药剂处理的种子中CGMMV病毒，每处理检测5份样品，每份样品称取1 g种子，研磨碎后加10 mL提取液，按试剂盒(安德珍(ADGEN)生物技术有限公司)说明逐步操作，最后利用Molecular Devices酶标仪检测405 nm光波下的吸光值。若样本吸光值超过阴性对照吸光值的2倍以上，即确定为CGMMV阳性。此外，将未处理、经干热处理和药剂处理的种子播于穴盘中发苗，设置光周期为16∶8，温度控制在25～30 ℃，待长至一叶一心期后从根部剪下，用ELISA方法检测其CGMMV病毒含量。

1.5 种子发芽试验

取干热处理和药剂处理后的种子，每处理重复2次，每个重复50粒种子，置于湿润的细沙中28 ℃恒温培育，4 d后统计发芽率。按相同方法分别对经干热处理和药剂处理后常温放置1、2、3、4个月后的种子作发芽试验。

2 结果与分析

2.1 干热处理和药剂处理的效果

从图1可以看出，在未处理、经干热处理和药剂处理情况下，从病毒瓜中剖出的种子中均能检测到CGMMV病毒，说明处理后的种子依然携带CGMMV病毒残体。随机检测182株经干热处理种子获得的实生苗，除1株表现为阳性外(405 nm下吸光值为阴性对照的3.73倍)，其他单株的CGMMV均为阴性；在经药剂处理后获得的193株实生苗中，除1株为阳性外(405 nm下吸光值为阴性对照的2.9倍)，其他均为阴性；随机检测的63株未处理的实生苗，其中34株为阳性(405 nm下吸光值为阴性对照的2倍以上)。未处理、干热处理和药剂处理后植株的传毒率为53.97%，0.55%和0.52%，这说明干热处理和药剂处理均能有效抑制种子中CGMMV病毒，二者对病毒的钝化效果基本一致。

图1 不同处理种子中CGMMV病毒在405 nm波长下的吸光值

2.2 种子芽率检测

如图2所示，干热处理后的种子，在1个月内其芽率无明显变化，但随着时间的推移，芽率快速下降，在4个月后芽率下降幅度达到12%。放置1～4个月，药剂处理的种子芽率无明显变化，说明干热处理对种子的芽率影响较大。

图2 种子经干热和药剂处理后的芽率随时间的变化

3 讨论

瓠瓜是浙江省的特色优势作物，提供干净无毒的瓠瓜种子是当前防治瓠瓜CGMMV的主要措施。本研究采用干热处理和药剂处理两种方法对瓠瓜种子进行消毒，并结合实生苗的DAS-ELISA检测发现，CGMMV在种子中的带毒率较高，但消毒后在实生苗中的传毒率很低(0.55%和0.52%)，这与西瓜、甜瓜中的研究结果一致，说明CGMMV以种子表面带毒为主[13]。国外研究表明，干热处理可大大减轻发病程度，是钝化CGMMV最有效的方法[14]。一般干热处理的周期为1周时间，1台机器1次只能处理150 kg左右，而且不同品种、不同成熟度的种子经干热处理后，其发芽率会受到不同程度的影响[15]。

本研究结果也表明，虽然干热处理1个月内种子芽率基本不受影响，但处理3个月后种子发芽率会急剧降低。因此，干热处理后的种子应尽快播种。鉴于干热处理的诸多局限，根据CGMMV以种子表面带毒为主的特点，本研究探索了药剂处理对CGMMV的钝化效果。研究发现，从种子消毒到最后的实生苗检测，可达到与干热处理完全一致的效果。此外，药剂处理不受机器的限制，可大批量连续处理，而且对种子发芽率的影响较小。因此，在生产中利用药剂处理代替干热处理对种子进行消毒是可行的。

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[3] KOMURO Y，TOCHIHARA H，FUKATSU R，et al. Cucumber green mottle mosaic virus on watermelon in Chiba and Ibaraki Prefectures (in Japanese) [J]. Ann Phytopathol Soc Jpn，1968，34：377.

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[12] 马凯慧，王毓洪，严蕾艳，等. 葫芦种子干热处理对黄瓜绿斑驳花叶病毒及发芽率的影响[J]. 长江蔬菜，2013(24)：50-51.

[13] 吴会杰，秦碧霞，陈红运，等. 黄瓜绿斑驳花叶病毒西瓜、甜瓜种子的带毒率和传毒率[J]．中国农业科学，2011，44(7)：1527-1532.

[14] 蔡明，李明福，江东. 日本、韩国黄瓜绿斑驳花叶病毒发生及防控策略[J]．植物检疫，2010，24(4)：65-68.

[15] 蔡明，江冬，张丽英，等. 黄瓜绿斑驳花叶病毒种子处理试验研究[J]．植物检疫，2011，25(1)：62-63.

(责任编辑：张瑞麟)

2017-04-07

高等学校访问工程师校企合作项目和公益性行业(农业)科研专项(201403032)；浙江省农科院青年人才培养项目(2016R23R08E04)

韦海忠(1968—)，男，浙江东阳人，硕士，副教授，研究方向为蔬菜栽培，E-mail:hzwei910@126.com。

李国景(1966—)，男，浙江东阳人，研究员，博士，研究方向为蔬菜育种与栽培技术研究，E-mail:ligj@mail.zaas.ac.cn。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170611

S436

B

0528-9017(2017)06-0942-03

文献著录格式：韦海忠，吴新义，吴晓花，等. 干热和药剂处理对瓠瓜种子CGMMV的抑制效果[J].浙江农业科学，2017，58(6)：942-944.