复方芪麻胶囊的质量标准研究Δ

孙冬梅，林晓燕，李素梅，江洁怡，罗文汇，陈雪（.广东省中医药工程技术研究院/广东省中医药研究开发重点实验室，广州50095；2.广州中医药大学附属广东第二中医院，广州50405）

复方芪麻胶囊的质量标准研究Δ

孙冬梅1＊，林晓燕1，2，李素梅1，江洁怡1，罗文汇1，陈雪1，2（1.广东省中医药工程技术研究院/广东省中医药研究开发重点实验室，广州510095；2.广州中医药大学附属广东第二中医院，广州510405）

目的：建立复方芪麻胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对制剂中黄芪、天麻、化橘红和川芎进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中天麻素和对羟基苯甲醇的含量：色谱柱为Waters XBridge C18，流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97，V/V），流速为1.0m L/min，检测波长为220 nm，柱温为25℃，进样量为10μL。结果：黄芪、天麻、化橘红和川芎的TLC图斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰。天麻素、对羟基苯甲醇检测质量浓度线性范围分别为7.97～59.76μg/m L（r＝0.999 5）、4.27～32.04μg/m L（r＝0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜1.0%；加样回收率分别为98.98%～100.11%（RSD＝0.35%，n＝9）、98.74%～100.23%（RSD＝0.43%，n＝9）。结论：该研究所建标准可用于复方芪麻胶囊的质量控制。

复方芪麻胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

复方芪麻胶是由黄芪、天麻、茯苓、法半夏、化橘红、泽泻、川芎7味中药经水煎浓缩制备而成，具有健脾益气、化痰通络的功效，用于治疗高血压气虚痰浊型。经广州中医药大学附属第二中医院多年临床使用证实，其具有确切的疗效，但一直没有完善的质量标准，缺乏定性鉴别和含量测定项目。为全面有效地控制该制剂质量，并确保临床用药的安全有效，本试验采用薄层鉴别法（TLC）对黄芪、天麻、化橘红和川芎4味药材进行定性鉴别，同时采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中天麻素和对羟基苯甲醇含量，为其质量标准的制定提供一定科学依据。

1 材料

1.1 仪器

Waters e2695-2489型HPLC仪，包括DAD检测器（美国Waters公司）；AT-201型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：700W，频率：40 kHz）；HH型数显恒温水浴锅（金控市科技仪器有限公司）；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；L-500型离心机（上海利鑫坚离心机有限公司）。

1.2 药品与试剂

复方芪麻胶囊（广东省第二中医院制剂室自制，批号：140301、140302、140303，规格：0.5 g/粒）；天麻对照药材（批号：120944-200507）、黄芪对照药材（批号：110781-200613）、化橘红对照药材（批号：121165-200502）、川芎对照药材（批号：120918-201110）、天麻素对照品（批号：110807-200205，纯度：98%）、黄芪甲苷对照品（批号：110781-200613，纯度：98%）、柚皮苷对照品（批号：110722-201111，纯度：98%）均购自中国食品药品检定研究院；对羟基苯甲醇对照品（美国Sigma-Alderich公司，批号：BCBM 1771V，纯度：99%）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 黄芪取样品内容物3.5 g，加水40m L，加热使溶解，以半径为0.89 cm、3 000 r/m in离心5m in，取上清液用水饱和的正丁醇振摇提取2次（每次30m L），合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次（每次30m L），弃氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5m L使溶解，放冷；经大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，柱高12 cm），以水50m L洗脱，弃去水液；以40%乙醇溶液30m L洗脱，弃去洗脱液；再以70%乙醇溶液80m L洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2m L使溶解，作为供试品溶液[1-2]。另取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1mg/m L的对照品溶液。再取黄芪对照药材3 g，加水50m L，煮沸30m in，滤过，滤液加水饱和的正丁醇振摇提取，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按复方芪麻胶囊处方和工艺制备缺黄芪的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[2015年版《中国药典》（四部）][3]试验，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（10∶20∶11∶5，V/V/V/V）于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视，同时置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图1。

2.1.2 天麻取样品内容物1.5 g，加70%乙醇溶液5 m L，超声处理30 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取天麻素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1 mg/m L的对照品溶液。再取天麻对照药材0.5 g，加70%乙醇溶液5m L，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液[4]。按复方芪麻胶囊处方和工艺制备缺天麻的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[2015年版《中国药典》（四部）][3]试验，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图2。

图1 黄芪的薄层色谱图Fig 1 TLC chromatogram sof Radix astragali

图2 天麻的薄层色谱图Fig 2 TLC chromatogramsof Gastrodia elata

2.1.3 化橘红取样品内容物2 g，加水30m L使溶解，以半径为0.89 cm、3000 r/m in离心5m in，取上清液，用乙酸乙酯振摇提取2次（每次20m L），合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1m L使溶解，作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1mg/m L的对照品溶液。再取化橘红对照药材1 g，加水100m L，微沸30m in，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液[5-6]。按复方芪麻胶囊处方和工艺制备缺化橘红的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[2015年版《中国药典》（四部）][3]试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，对照品溶液4μL，对照药材溶液2 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热1min，置紫外光灯（365nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图3。

图3 化橘红的薄层色谱图1～3.供试品；4.对照药材；5.对照品；6.阴性对照Fig 3 TLC chromatogramsof Pummelo Peel1-3.test samples；4.reference substance；5.substance control；6.negative control

2.1.4 川芎取样品内容物5 g，加甲醇30m L，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20m L使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30m L，合并乙酸乙酯液，用5%碳酸氢钠溶液振摇提取2次，每次30m L，合并5%碳酸氢钠溶液，加稀硫酸调pH至1，用乙醚振摇提取2次，每次30m L；合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1m L使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材2 g，加水100m L，微沸1 h，滤过，滤液浓缩至约5m L，加硅藻土适量吸附，蒸干，转移至锥形瓶中，加甲醇30m L，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液[7]。按复方芪麻胶囊处方和工艺制备缺川芎的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按TLC法[2015年版《中国药典》（四部）][3]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶2∶4∶0.5，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含1%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热3～4m in，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图4。

图4 川芎的薄层色谱图Fig 4 TLC chromatogram sof Ligusticum chuanxiong

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：Waters XBridge C18（250mm× 4.6mm，5µm）；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97，V/V）；流速：1.0m L/m in；检测波长：220 nm；柱温：25℃；进样量：10μL[7]。

2.2.2 混合对照品溶液的制备精密称取待测成分对照品适量，置于50m L量瓶中，加乙腈-水（3∶97，V/V）溶解并定容，制成天麻素、对羟基苯甲醇质量浓度分别为0.199 2、0.106 8mg/m L的混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备取粉碎均质后的样品1.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入40%乙醇溶液50m L，密塞，称定质量，超声处理30m in，取出，放冷，再次称定质量，加40%乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10m L，浓缩至近干，残渣加乙腈-水（3∶97，V/V）溶解，转移至25m L量瓶中，加乙腈-水（3∶97，V/V）定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备按复方芪麻胶囊处方和工艺制备缺天麻的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.2.5 专属性试验分别取上述混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图5。结果，阴性对照色谱图在对照品色谱图相应的位置上无对应色谱峰出现，表明该方法专属性较好。

图5 高效液相色谱图Fig 5 HPLC chrom atogram s

2.2.6 线性关系考察分别精密量取“2.2.2”项下混合对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5m L，分别置于5m L量瓶中，加乙腈-水（3∶97，V/V）定容，制成系列混合对照品溶液。精密量取上述系列混合对照品溶液各10μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（x，μg/m L）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得天麻素、对羟基苯甲醇回归方程分别为y＝1.74×103x+5.63×103（r＝0.999 5）、y＝3.44×103x－6×103（r＝0.999 9）。结果表明，天麻素、对羟基苯甲醇检测质量浓度线性范围分别为7.97～59.76、4.27～32.04μg/m L。2.2.7精密度试验取“2.2.2”项下混合对照品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，天麻素、对羟基苯甲醇峰面积的RSD分别为0.28%、0.45%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验取“2.2.3”项下供试品溶液（批号：140301）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10、12 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，天麻素、对羟基苯甲醇峰面积的RSD分别为0.20%、0.16%（n＝7），表明供试品溶液室温放置12 h内基本稳定。

2.2.9 重复性试验精密称取同一批样品（批号：140301）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，天麻素、对羟基苯甲醇峰面积的RSD分别为0.82%、0.67%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验取已知含量样品（批号：140301）适量，每份1.5 g，共6份，分别加入低、中、高质量的待测成分对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery test（n＝9）

2.2.11 样品含量测定取3批样品各适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。

3 讨论

表2 样品含量测定结果（n＝3，m g/g）Tab 2 Results of contents determ ination of sam p les（n＝3，mg/g）

本试验对复方芪麻胶囊中黄芪、化橘红、天麻、川芎均进行了TLC鉴别，结果表明方法专属性强，分离度良好，无拖尾现象；在茯苓、泽泻、法半夏鉴别中，笔者按2015年版《中国药典》（一部）茯苓、泽泻、法半夏项下方法均进行了鉴别，结果在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，但阴性有干扰，故未列入本次考察。

笔者分别比较了柱温为20、25、30℃，流速为0.8和1.0m L/min条件下的色谱分离效果。结果表明，柱温为25℃，流速为1.0m L/m in时基线平稳，分离效果较好。笔者共考察了3种不同品牌的色谱柱[Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm），Waters Xbridge C18（250mm× 4.6mm，5μm），Merk Hibar®250-4，6（250mm×4.6mm，5μm）]，结果，Waters Xbridge C18分离效果较好。

综上所述，本研究所建标准可用于复方芪麻胶囊的质量控制。

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Study on Quality Standard for Compound Qima Capsules

SUN Dongmei1，LIN Xiaoyan1，2，LISumei1，JIANG Jieyi1，LUO W enhui1，CHEN Xue1，2（1.Guangdong Provincial Institute of TCM Engineering Technology Research/Guangdong Provincial Key Lab of Research and Development in TCM，Guangzhou 510095，China；2.Guangdong Second Chinese Medical Hospital Affiliated to Guangzhou University of TCM，Guangzhou 510405，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Compound qima capsules.METHODS：TLC was used for the qualitative identification of Radix astragali，Gastrodia elata，Pummelo Peel and Ligusticum chuanxiong.HPLC method was adopted for the contents determ ination of gastrodin and gastrodigenin.The determ ination wasp performed on W aters XBridge C18column w ith mobile phase consisted of acetonitrile-0.05%phosphoric acid（3∶97，V/V）at the flow rate of 1.0 m L/m in.The detection wavelength was set at 220 nm，column temperature was 25℃and sample size was 10μL.RESULTS：The TLC spots of R.astragali，G. elata，Pummelo Peel and L.chuanxiong were clear and well separated w ithout the interference of negative samples.The linear ranges of gastrodin and gastrodigenin were 7.97-59.76μg/m L（r＝0.999 5），4.27-32.04μg/m L（r＝0.999 9）.RSDs of precision，stability and repeatability tests were all lower than 1.0%.Recoveries of them were 98.98%-100.11%（RSD＝0.35%，n＝9），98.74%-100.23%（RSD＝0.43%，n＝9），respectively.CONCLUSIONS：Established method can be used for quality control of Compound qima capsules.

C ompound qima capsules；Quality standard；TLC；HPLC

R 917

A

1001-0408（2017）18-2553-04

2016-08-19

2016-10-23）

（编辑：张静）

广东省中医药局中医药强省专项（No.粤中医办函〔2015〕102号）

＊主任中药师，教授。研究方向：中药质量评价。E-mail：1026866717@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.30