HPLC法同时测定沉香舒郁丸中四种成分的含量

刘楚阳，刘 韵

HPLC法同时测定沉香舒郁丸中四种成分的含量

刘楚阳*，刘 韵

目的 建立波长切换联合梯度洗脱HPLC法同时测定沉香舒郁丸中和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯4个成分的含量。方法 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇(A)-0.5%磷酸溶液(B)为流动相，进行梯度洗脱，流速0.9 mL/min，检测波长：294 nm(和厚朴酚、厚朴酚)，225 nm(木香烃内酯、去氢木香内酯)，柱温30 ℃，进样量10 μL。结果 和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯4个成分的质量浓度分别在4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8)、4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5)、5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9)、6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2)范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率及相应的RSD分别为98.57%(1.08%)、99.93%(0.73%)、97.26%(1.24%)、97.65%(0.99%)；重复性良好，RSD≤1.75%；精密度良好，RSD≤1.06%。供试品溶液在室温条件下24 h 内稳定，RSD≤1.11%。平均加样回收率在97.26%～99.93%，RSD≤1.24%。结论 所建立的方法专属性好，准确度高，灵敏度高，快速，为沉香舒郁丸的质量控制提供依据。

沉香舒郁丸；和厚朴酚；厚朴酚；木香烃内酯；去氢木香内酯

0 引言

沉香舒郁丸收载于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第十册，是由厚朴(姜制)、木香、沉香、陈皮、豆蔻、砂仁、枳壳(麸炒)、青皮(醋制)、香附(醋制)、延胡索(醋制)、柴胡、姜黄、甘草等13味中药材加工而成的大蜜丸，具有舒气开胃、化郁止痛的功效，主要用于胸腹胀满、胃部疼痛、呕吐酸水、消化不良、食欲不振、郁闷不舒等病症的治疗。

沉香舒郁丸现标准仅规定了性状，无任何定性和定量的检测项目[1]，不能全面有效地控制本品的质量。厚朴和木香为沉香舒郁丸的主要药味。木香的指标性成分为木香烃内酯和去氢木香内酯；厚朴的指标性成分和厚朴酚及厚朴酚。本文采用HPLC梯度洗脱联合波长切换法对4个成分进行了同时测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100系列四元梯度泵高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；岛津AUD 220D型电子天平(精度：0.01 mg)(日本岛津公司)；KQ-250DB数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

厚朴酚对照品(110729-201513，含量98.8%，常温干燥保存)、和厚朴酚对照品(110730-201313，冷处保存)、木香烃内酯对照品(111524-201509，含量99.0%，冷冻保存)均购于中国食品药品检定研究院，使用前均不需干燥处理；去氢木香内酯对照品(477-43-0，含量98.0%，冷藏保存)购于上海佰世凯化学科技有限公司。沉香舒郁丸(每丸重6 g)购于天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂，批号：5970021、5970026、5970029。甲醇和乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相A：甲醇，流动相B：0.5%磷酸溶液，梯度洗脱[2-4](0～11 min，54.0%A；11～19 min,54.0%A→65.0%A；19～32 min,65.0%A→70.0%A；32～40 min,70.0%A→54.0%A)；0～19 min时在294 nm[5-6]波长下检测厚朴酚和厚朴酚，19～40 min在225 nm[7-8]波长下检测木香烃内酯和去氢木香内酯；流速：0.9 mL/min；柱温：30 ℃；进样量10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 分别精密称取对照品和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯适量，用70%甲醇溶液溶解并稀释，制成含和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯分别为0.430、0.446、0.512、0.618 mg单一成分的对照品储备溶液。再分别依次量取对照品储备液适量，用70%甲醇溶液稀释，制成含和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯分别为0.0129、0.0223、0.0256、0.0309 mg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取沉香舒郁丸适量，将其剪碎，取约2.0 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入70%甲醇溶液[9-10]45 mL，超声提取30 min，放冷后，采用70%甲醇溶液补加至刻度，振摇均匀，过滤，取续滤液作为沉香舒郁丸测定用供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按照《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第十册中沉香舒郁丸的处方比例，分别称取除厚朴以外的其他药味和除木香以外的其他药味各一份，严格按照沉香舒郁丸的工艺过程制成厚朴阴性样品和木香阴性样品，按“2.2.2”项下方法操作，制成相应的阴性样品溶液。

2.3 专属性考察 精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液、“2.2.2”项下供试品溶液、“2.2.3”项下2个阴性样品溶液各适量，按照“2.1”项下的色谱条件进行检测，试验结果显示，厚朴阴性样品和木香阴性样品溶液的色谱图中，在所测和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯对应的位置均无干扰，且理论塔板数均>3 000。色谱图见图1。

2.4 线性范围考察 分别精密吸取以上4个对照品储备液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，将其置于10 mL的量瓶中，并采用70%甲醇溶液进行稀释至刻度，振摇均匀，即得到一系列浓度的混合对照品溶液，按照上述测定方法进行测定，以测得的峰面积Y对质量浓度X作线性回归，绘制标准曲线，得回归方程,见表1。

图1 色谱图

表1 线性关系实验结果

2.5 精密度考察 取混合对照品溶液，按上述的色谱条件测定，连续进样6次，记录峰面积，结果和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯峰面积的RSD(n=6)分别为1.06%、1.03%、0.91%和0.83%。

2.6 重复性考察 取沉香舒郁丸样品(批号：5970021)，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备沉香舒郁丸供试品溶液6份，按照“2.1”项下的色谱条件进行测定，分别计算所测各成分含量，并计算相对应的RSD，结果所测4个组分的RSD依次为1.75%、1.63%、1.47%和1.25%。

2.7 稳定性考察 取沉香舒郁丸样品(批号：5970021)同一供试品溶液，在室温下放置0、2、4、8、12、24 h来评价供试品溶液的稳定性，按上述色谱条件测定和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯和去氢木香内酯的峰面积值，4个组分峰面积的RSD分别为1.11%、1.07%、1.03%和0.99%。结果显示，供试品溶液自制备起，在室温下24 h内稳定。

2.8 加样回收率考察 依据2015年版《中国药典》四部药品质量标准分析方法验证指导原则，取已知含量的沉香舒郁丸(批号：5970021)6份，剪碎，每份约1.0 g，精密称定，分置不同的50 mL量瓶中，精密加入混合对照品溶液25 mL、70%甲醇溶液20 mL，超声提取30 min，放冷，用70%甲醇溶液加至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为加样回收样品试液。按照上述色谱条件及检测方法测定，计算这4个组分的平均加样回收率及RSD，结果见表2。

2.9 沉香舒郁丸样品测定 取3批沉香舒郁丸，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备沉香舒郁丸供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，结果见表3。

3 讨论

3.1 流动相的优化 笔者在实验过程中曾考察了甲醇-水流动相体系、乙腈-水流动相体系、乙腈-0.5%磷酸溶液流动相体系、甲醇-0.5%磷酸溶液流动相体系，以所测各组分的分离效果、出峰时间长短、基线噪音等为指标，优选最佳的流动相体系，对比实验结果表明，以甲醇-0.5%磷酸溶液流动相体系按照文中的梯度洗脱程序，所测各组分出峰时间较快，峰型对称，基线平稳。

3.2 供试品溶液制备方法的优化 本试验分别考察了不同提取方式(超声提取、加热回流提取)对所测各组分提取效果的影响。结果显示，超声提取和加热回流提取对沉香舒郁丸所测各组分的提取率效果差异不大，考虑到含量测定操作的便捷性，最终选取超声提取作为沉香舒郁丸样品制备的提取方式；同时在此基础上对不同提取溶剂(甲醇、70%甲醇溶液、50%甲醇溶液)和不同提取时间(20、30、40 min)分别进行了考察实验，结果显示，70%甲醇溶液提取30 min，所测各组分的提取效果最佳。故沉香舒郁丸最终供试品溶液制备方法为70%甲醇溶液超声提取30 min。

表2 加样回收率实验结果

表3 含量测定结果(mg/g)

4 小结

本文采用HPLC梯度洗脱联合波长切换法同时对厚朴的指标性成分和厚朴酚及厚朴酚、木香的指标性成分木香烃内酯和去氢木香内酯进行了测定，结果准确可靠，专属性强，重现性好，为确保临床用药的安全、有效控制沉香舒郁丸的质量，提供了较有力的依据。

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[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:62,251.

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Simultaneous determination of the content of four constituents in Chenxiang Shuyu Pill by HPLC

LIU Chu-yang*,LIU Yun

(Department of Pharmacy,the South Hospital of Southern Medical University,Guangzhou 510515,China)

Objective To develop an HPLC gradient elution method for simultaneous determination of the content of honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone in Chenxiang Shuyu Pill.Methods The Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5μm) chromatographic column was adopted;the mobile phase was methanol(A)-0.5% phosphoric acid solution (B) with gradient elution,at a flow rate of 0.9 mL/min;honokiol and magnolol were detected at 294 nm,and costunolide and dehydrocostus lactone were detected at 225 nm;the column temperature was set at 30 ℃,and sample quantity was 10 μL.Results Honokiol,magnolol,costunolide and dehydrocostus lactone has a good linear relationship with peak area within the scope of concentration of 4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 8),4.46～89.20 μg/mL(r=0.999 5),5.12～102.40 μg/mL(r=0.999 9),and 6.18～123.60 μg/mL(r=0.999 2).The average recoveries and the correspondingRSDwere 98.57%(1.08%)，99.93%(0.73%)，97.26%(1.24%)and 97.65%(0.99%),respectively;the repeatability was good,RSD≤1.75%;the precision was good,RSD≤1.06%.Test solution was stable at room temperature within 24 h,RSD≤1.11%.The recovery rate was 97.26%～99.93%(RSD≤1.24%).Conclusion The established method is of good specificity,high accuracy,high sensitivity and rapidity,which can be applied to the quality control of Chenxiang Shuyu Pill.

Chenxiang Shuyu Pill;Honokiol;Magnolol;Costunolide;Dehydrocostus lactone

2016-08-30

南方医科大学南方医院药学部，广州 510515

*通信作者

10.14053/j.cnki.ppcr.201705022