干扰素治疗对慢性乙肝患者外周血趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的影响

邓娟

干扰素治疗对慢性乙肝患者外周血趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的影响

邓娟

目的探讨应用干扰素治疗慢性乙型肝炎时患者外周血趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11表达水平的变化。方法选取2015年3月—2016年3月在我院就诊的慢性乙肝患者40例作为观察组，使用干扰素进行治疗。同时选择同期于我院进行健康体检的40例健康人作为对照组。在治疗的第4周、第12周、第24周和第48周，采集患者外周血，采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测患者血液中趋化因子的表达水平，观察两组之间的差异，同时比较观察组患者在治疗前后，外周血趋化因子的表达水平。结果入院时观察组慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表达水平[（142.43±36.38）pg/ml、（2 364.08±89.01）pg/ml、（221.2±41.79）pg/ml]均高于健康对照组 [（43.57±6.83）pg/ml、（673.44±36.41）pg/ml、（57.89±5.43）pg/ml）]，差异具有统计学意义（P＜0.05）；经干扰素治疗后，观察组患者第12周、第24周、第48周的外周血趋化因子CCL20 （t值分别为3.47、3.83、4.29；P分别为0.009、0.006、0.002）、CXCL9（t值分别为 2.27、3.29、4.07；P分别为 0.027、0.013、0.003）、CXCL11（t值分别为 2.05、2.87、3.94；P分别为 0.031、0.014、0.004）水平均较治疗前有明显的改善，呈现下降趋势，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰素治疗慢性乙肝可降低患者外周血液中CCL20、CXCL9、CXCL11的表达水平，降低慢性乙肝患者血清HBV病毒水平和炎症反应。

慢性乙肝；CLL20；CXCL9；CXCL11；干扰素

慢性乙肝是一种传染性疾病，由乙型肝炎病毒（HBV）感染人体引起，病变以肝细胞坏死为主，继而引起患者体内多种器官损害[1]。世界卫生组织曾就全球人口乙型肝炎病毒感染情况有过相关报道，约1/3人口曾感染过或仍受HBV的感染，其中部分感染者最终发展为慢性HBV感染，我国为慢性乙型肝炎患者的大国。HBV感染后，临床分型的不同主要决定于病毒和宿主的免疫系统。趋化因子是病毒感染后的炎症反应中具有趋化作用的小分子蛋白，是由趋化白细胞参与介导的炎症反应产生，可通过与相应受体结合向肝炎病毒感染后的炎症和感染部位迁移[2]。其中趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11均可通过与相应受体结合参与病毒感染的炎症反应，从而清除进入并感染人体的HBV。机体的免疫功能状态也可影响慢性乙型肝炎治疗的结局，趋化因子作为病毒感染的重要免疫学指标，可用于判断治疗疗效。近年来的相关研究[3]表明，CXCR3、CCR6以及配体CCL20、CXCL9、CXCL11等在介导肝炎病毒免疫耐受与损伤方面具有重要的作用，参与淋巴细胞的增殖与活化，促进其游走并影响淋巴细胞的粘附与扩散等重要的细胞生物活性。本研究通过观察干扰素治疗对慢性乙肝患者体内外周血中趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的表达的影响，找寻HBV感染后肝脏损伤新的理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年3月—2016年3月在我院就诊的慢性乙肝患者40例作为观察组，其包括28例男性患者与12例女性患者，年龄35～69岁，平均年龄为（52.4±3.9）岁。同时选择同期于我院进行健康体检的40例健康人作为对照组，其中男25例，女15例，年龄36～73岁，平均年龄为（54.1±2.3）岁。所有入选病例临床诊断均符合2015版《慢性乙型肝炎防治指南》[4]中的临床诊断标准，且在近半年内，所有患者均未使用过抗病毒药物治疗和免疫调节药物进行治疗。与所有患者签署知情同意书，并经院伦理学委员会批准后进行。各组患者性别、年龄等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 治疗方法和血清标本的收集与处理

使用聚乙二醇干扰素α-2a 180 μg，皮下注射，每周 1次，必要时进行保肝及对症治疗，治疗1年。分别于治疗前、治疗第4周后、第12周后、第24周后和第48周后采集患者及同期体检正常人员全血各5 ml，将每份血液的一部分送至检验中心进行相关项目的检测，剩余血液用于分离提取血清，并采用酶联免疫吸附法测定患者外周血清中趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11水平。所用设备和仪器主要有：美国应用生物系统公司生产的ABI-7500型PCR仪、伊莱瑞特公司生产的趋化因子ELISA试剂盒、深圳雷杜公司的RT-6100型酶标仪、日本日立公司生产的Cobas008型全自动生化仪、德国罗氏公司生产的Cobase602型电化学发光仪，进行外周血趋化因子的检测。

1.3 统计学分析

运用SPSS 20.0软件进行数据处理分析，计量资料以（均数±标准差）方式表示，治疗前两组外周血趋化因子表达水平比较及观察组治疗后与治疗前外周血趋化因子表达水平比较均采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11表达水平比较

治疗前观察组慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表 达 水 平 [（142.43±36.38）pg/ml、（2 364.08±89.01）pg/ml、（221.2±41.79）pg/ml]均高于健康对照组[（43.57±6.83）pg/ml、（673.44±36.41）pg/ml、（57.89±5.43）pg/ml）]，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结果见表1。

表1 观察组与对照组外周血趋化因子表达水平比较（±s）

表1 观察组与对照组外周血趋化因子表达水平比较（±s）

组别 CCL20（pg/ml） CXCL9（pg/ml） CXCL11（pg/ml）观察组 142.43±36.38 2 364.08±89.01 221.2±41.79对照组 43.57±6.83 673.44±36.41 57.89±5.43t值 3.801 2.710 2.931P值 0.019 0.027 0.036

2.2 干扰素治疗不同时间对慢性乙肝患者外周血趋化因子检测结果

观察组40例慢性乙肝患者在经干扰素治疗后外周血趋化因子测定结果表明，第12周、第24周、第48周的患者外周血中CCL20（t值分别为 3.47、3.83、4.29；P分别为 0.009、0.006、0.002）、CXCL9（t值分别为2.27、3.29、4.07；P分别为0.027、0.013、0.003）、CXCL11（t值分别为2.05、2.87、3.94；P分别为0.031、0.014、0.004）水平均较治疗前有明显的改善，呈现下降趋势，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。但在干扰素治疗的第4周，上述趋化因子的水平相较于治疗前并无降低。结果见表2。

表2 干扰素治疗后患者外周血中趋化因子的表达水平（±s）

表2 干扰素治疗后患者外周血中趋化因子的表达水平（±s）

注：a、b、c与治疗前相比P＜0.05

治疗时间 CCL20（pg/m） CXCL9（pg/ml） CXCL11（pg/ml）治疗前 142.43±36.38 2 364.08±89.01 221.2±41.79治疗第4周 146.12±43.55 2 586.31±89.41 226.31±34.89治疗第12周 114.89±33.42a 2 097.02±70.87a 182.57±30.75a治疗第24周 90.01±33.49b 1 387.76±56.39b 152.3±29.47b治疗第48周 73.87±25.03c 983.21±45.33c 117.33±21.87c

3 讨论

慢性乙型肝炎是由HBV感染引起的以炎症性肝细胞坏死为典型病例特征的一类感染性疾病，可由于肝细胞的过多损伤导致肝脏功能紊乱[5]，最终致使患者体内多种脏器的损伤、衰竭，甚至会导致患者死亡，也可由于肝炎病毒导致的肝癌造成患者死亡。每年因慢性乙型肝炎引起的肝功能衰竭、肝癌造成的死亡人数超过100万人。我国作为乙型肝炎病毒感染人数众多的国家，因为计划免疫的施行，新发感染情况有所抑制，但由于人口基数庞大和既往大量感染者，每年仍会有众多的乙型肝炎病毒感染病例，感染引起的肝硬化、包括肝脏衰竭在内的多脏器衰竭和肝癌是我国公民死亡的重要原因。现有研究[6]已有一定的证据表明机体对HBV病毒感染的免疫耐受和体内为清除病毒而发生的免疫应答机制低下，是导致肝炎病毒感染发展为慢性病变的重要原因，如趋化因子及其受体可通过结合的方式向肝炎病毒感染后的炎症和感染部位迁移，并使其在慢性乙型肝炎病毒感染的组织、器官中增殖和活化。

2015年发布的慢性乙型肝炎防治指南中指出，因干扰素可提高机体对HBV的免疫应答和HBsAg的血清转化，抑制HBV-DNA的扩增，是抗病毒治疗的2种主要药物之一，应用干扰素来治疗CHB理论可行。但干扰素治疗具有一定的局限性，治疗过程中可能产生较多的副作用，如流感样症状的发生、骨髓生长抑制等，治疗费用也高于常规的CHB治疗，如何选用适当的干扰素治疗CHB，达到较高的社会经济效益，是值得进一步进行研究探讨的。因此我们通过研究采用干扰素治疗后患者外周血趋化因子的变化，来探索干扰素治疗与外周血趋化因子之间的关系。

本研究中治疗前观察组慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表达水平均高于健康对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），提示肝炎病感染人体后，通过促进患者体内的免疫应答反应促进感染患者体内的炎症反应；同时发现，在采用干扰素治疗第12周、第24周、第48周后患者外周血趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11水平均较治疗前有明显的改善，呈现下降趋势，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。但在干扰素治疗的第4周，上述趋化因子指标相较于治疗前并无降低，侧面提示，上述指标不适用于干扰素治疗早期疗效的评价，具体发生机制尚需要进一步的研究，这些结果与国内外相关研究[7-8]中CCL20、CXCL9、CXCL11的外周血表达水平等研究结果相一致，提示HBV感染通过上调外周血清中趋化因子的表达水平促进淋巴细胞活化，活化后的T细胞经特异受体识别迁移至肝脏，实现减轻肝脏组织因对抗HBV而引起的炎症反应，同时清除进入人体的HBV病毒。

总之，研究发现在治疗前患者外周血中趋化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的较高水平，可能反映了患者体内的免疫应答反应，采用干扰素后可降低患者体内的炎症反应，该结果对于进一步研究趋化因子及其受体的调控机制及CHB的诊疗提供新的思路。

[1]尚鹏程，许娇，裴晓方.慢乙肝和慢重肝患者趋化因子的表达差异及干扰素治疗后的变化[J].现代预防医学，2017，44（5）：882-885.

[2]田小利，秦波.趋化因子与干扰素治疗慢性乙型病毒学应答的相关性[J].第三军医大学学报，2012，34（16）：1668-1671.

[3]XiaoqinLan，FangXiao，QiangDing，et al.The effect of CXCL9 on the invasionability of epatocellular carcinoma through up-regulation of PREX2[J].Journal of Molecular Histology，2014，45（6）：689-696.

[4]中华医学会肝病学分会中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）[J].中华实验和临床感染病杂志：电子版，2015，19（3）：1-18.

[5]Huang L，Li J，Yan J，et al.Antiviral therapy decreases viral reactivation in patients with hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma undergoing hepatectomy：a randomized controlled trial[J].Journal of viral hepatitis，2013，20（5）：336-342.

[6]Wu XY，LiX，ChenZH，et al.An optimized antiviral modification strategy for prevention of hepatitis B reactivation in patients undergoing prophylactic lamivudine and chemotherapy：a pilot study[J].Tumor Biology，2013，34（2）：909-918.

[7]LianJQ，YangXF，ZhaoRR，et al.Expression profiles of circulating cytokines，chemokines and immune cells in patients with hepatitis B virus infection[J].Hepatitis Monthly，2014，14（6）：e18892.

[8]Xin JJ，Ding WC，Hao SR，et al.Serum macrophage inflammatory protein 3α levels predict the severity of HBV-related acute-onchronic liver failure[J].Gut，2016，65（2）：355-357.

Effects of Interferon on the Expression of CCL20, CXCL9 and CXCL11 in Peripheral Blood of Patients With Chronic Hepatitis B

DENG Juan The Ninth Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital of The Fourth Military Medical University, Xijing Hospital, Xi'an Shanxi 710032, China

ObjectiveTo investigate the effect of interferon therapy on the expression of chemokines CCL20, CXCL9 and CXCL11 in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B.Methods40 patients with chronic hepatitis B who were treated with interferon in our hospital from March 2015 to March 2016 were selected as the observation group, and 40 healthy people who did physical examination in the same period in our hospital were selected as the control group.At 4th week, 12th week,24th week and 48th of the treatment, the peripheral blood of patients was collected and measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)to detect the expression level of chemokines in the blood.ResultsWhen hospitalized, the levels of serum CCL20, CXCL9 and CXCL11 in the patients with chronic hepatitis B were (142.43 ± 36.38) pg / ml, (2 364.08± 89.01) pg / ml, (221.2 ± 41.79) pg / ml, which were significantly higher than those in the control group[(43.57±6.83)pg/ml,(673.44±36.41)pg/ml,(57.89±5.43)pg/ml)],the differences were statistically significant (P＜0.05).After the treatment with interferon, the expression of serum CCL20 (tvalues were 3.47,3.83,4.29;Pwere 0.009, 0.006, 0.002), CXCL9 (tvalues were 2.27,3.29,4.07;Pwere 0.027,0.013,0.003) and CXCL11 (tvalues were 2.05,2.87,3.94;Pwere 0.031,0.014,0.004) were significantly improved compared with those before treatment, and the differences were statistically significant (P＜0.05).ConclusionInterferon treatment of chronic hepatitis B can reduce the expression of CCL20, CXCL9 and CXCL11 in peripheral blood of patients, and decrease the levels of serum HBV and serum in patients with chronic hepatitis B.

chronic hepatitis B; CCL20; CXCL9; CXCL11; interferon

中图分类号】R512

A

1674-9308（2017）14-0175-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.14.094

第四军医大学第一附属医院西京医院消化九科，陕西 西安710032