犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒概述

郁宏伟,张德宝,朱秀同,刘涛,石勇,何平有,赵玉龙

（1.瑞普（保定）生物药业有限公司河北保定071000; 2.河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071000）

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒概述

郁宏伟1,2,张德宝1,2,朱秀同1,2,刘涛1,2,石勇1,2,何平有1,2,赵玉龙1,2

（1.瑞普（保定）生物药业有限公司河北保定071000; 2.河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071000）

在研究与分析我国近年来犬狂犬病流行情况、疫苗使用现状和市场需求等诸多因素的基础上，瑞普生物与浙江大学再次合作，成功研制出犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒-“锐清”。该产品是农业部批准的三类新兽药【《新兽药注册证书》证号：（2016）新兽药证字71号】，已获得农业部核发的兽药生产批准文号【兽药生字030388829】，目前已成功上市。本文对犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒-“锐清”的特点进行概述，以期使人们对该产品具有更加清楚的认识。

1 “锐清”特点

1.1 特异性强

近年来的研究表明，狂犬病毒疫苗诱导机体产生中和抗体的免疫应答反应主要与N蛋白和G蛋白有关。本试剂盒采用基因工程技术表达狂犬病毒N蛋白，制备抗N蛋白单克隆抗体对国内流行毒株SRV-9株纯化抗原进行鉴定，以鉴定正确的狂犬病毒蛋白作为包被抗原建立ELISA检测方法，用于检测犬血清中的狂犬病毒IgG抗体。“锐清”特异性试验结果表明，该试剂盒不与犬瘟热病毒（CDV）抗体阳性血清、犬细小病毒（CPV）抗体阳性血清发生反应，特异性强（见表1）。

1.2 重复性好

用5个连续生产批次（151101、151102、151203、151204和160101批）的“锐清”试剂盒对15份质控血清分别进行重复检测，检测结果见表2。检测结果显示，批间变异系数在2.01%~10.40%之间，表明该方法具有高度的可重复性和稳定性，可用于常规检测。

表1 “锐清”特异性试验

1.3 符合率高

1.3.1 “锐清”与荧光抗体病毒中和试验（FAVN）比较

同时用本试剂盒与FAVN检测226份临床分离犬血清，试验结果见表3。由表3可知，本试剂盒与FAVN法相比阳性符合率为98.74%（157/159），阴性符合率为83.58%（56/67），总符合率为94.25%（213/226），二者符合率较高，表明试剂盒可用于狂犬病毒中和抗体的检测。

表3 “锐清”与FAVN符合率试验

表2 “锐清”稳定性试验

1.3.2 “锐清”与进口试剂盒比较同时用本试剂盒与进口试剂盒（法国某公司）检测244份临床分离犬血清，试验结果见表4。由表4可知，两者阳性符合率为91.35%（95/104），阴性符合率为90.00%（126/140），总符合率90.57%（221/244）。表明本试剂盒与进口试剂盒符合率较高，可用于临床样品的大规模检测。

表4 “锐清”与进口试剂盒符合率试验

1.4 检出限低

分别用5批试剂盒检测6份阳性参考血清的抗体滴度，检测结果分别为1:800、1:200、1:3200、1: 1600、1:1600、1:3200。由此可知该试剂盒对于犬血清中的狂犬病毒IgG抗体的检出下限可达到1: 3200，能够显著的检测犬血清中抗体的水平（表5）。

表5 “锐清”敏感性试验

2 小结

“锐清”是瑞普生物继“锐捷”（猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒）后的又一全新产品，大量实验及临床应用表明，该试剂盒具有特异性强、稳定性好、符合率高、检出限低等优点，适宜临床样品的大规模检测，对及时发现狂犬病、清楚疫苗免疫效果、提高畜产品质量具有重大的经济、社会和公共卫生意义。■

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.052

郁宏伟（1979-04-06），男，河北唐山人，博士，主要从事兽用生物制品方面研究。E-mail:yuhongwei2005@126.com

河北省科技计划项目（15222907D）