HPLC测定消炎利胆冲剂中黄芩苷的含量
2017-07-10 00:51白梓静高鹏
当代化工 2017年1期
白梓静 高鹏
摘要：建立高效液相色谱法测定消炎利胆冲剂中黄芩苷含量的方法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48），流速1.0mL·min-1，检测波长276nm，柱温28℃。黄芩苷在0.476～476μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系呈良好，其平均回收率为101.9%，RSD为1.31%。本法准确、易于操作，重現性与稳定性较好，可用于消炎利胆制剂中主要有效成分黄芩苷的含量测定。
关键词：消炎利胆冲剂；黄芩苷；HPLC
中图分类号：O 657 文献标识码：A 文章编号：1671-0460（2017）01-0177-03
消炎利胆冲剂主要是由黄芩、白芍、厚朴、金钱草、五味子等18味中药提取加工成的复方制剂，具有消炎利胆，活血行气止痛，排石的作用。方中主药一黄芩的主要有效成分为黄芩苷。本文用高效液相色谱法测定黄芩苷含量，专属性强、操作简便快速，适用于对该制剂进行质量控制。
1 实验部分
1.1 试剂、仪器
色谱甲醇、0.2%自制磷酸溶液、二次蒸馏水；
Agilent1200高效液相色谱仪；离心机；UVmini-1240紫外可见分光光度计；超声清洗机。
1.2 色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48）；柱温：28℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：20μL；检测波长：276nm。
1.3 对照品与供试品
黄芩苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，112426-201510）
消炎利胆冲剂（延安市中医医院制剂室，批准文号：陕药管制字[2001]第3674号）
1.3 实验方法
取消炎利胆冲剂一小袋置于研钵中研成粉末状，精密称定，混匀，取细粉约0.5g，加甲醇置于50mL量瓶中，超声处理30min，自然放冷至室温，用0.45μm的微孔膜过滤取得的上清液，即得供试品溶液。另取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每mL黄芩苷对照品溶液中含有0.476mg的黄芩苷对照品溶液。按医院处方工艺制备不含黄芩的供试品，做成阴性对照品溶液。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的选择
2.1.1 流动相的选择
测定黄芩苷时分别选择0.2%磷酸-甲醇，冰醋酸-水-甲醇，0.1%的冰乙酸溶液与甲醇，0.1%的磷酸溶液与甲醇，乙腈0.2%磷酸，最终根据理论塔板数和峰形选择了0.2%的磷酸溶液与甲醇（52：48）作为其流动相。
2.1.2 检测波长的选择
通过参考诸多文献，经扫描发现黄芩苷对照品的最大吸收波长为276nm，最终将其确定为检测波长。
2.2 待测样品提取方法的选择
本文分别考察了加热回流和超声2种方法，结果显示超声相对于加热回流提取效果更好，更简便可行，因此，选取了30min的超声作为提取方法。
2.3 HPLC色谱图
HPLC色谱图见图1-3。
2.4 验证的特性指标测试数据及结果
2.4.1 线性范围
精密量取黄芩苷对照品溶液适量，分别配制成浓度为0.000476、0.0476、0.0952、0.238、0.476mg·mL-1的溶液作为对照品溶液，用进样针吸取20μL的上述不同浓度的对照品溶液进样。以进样浓度为横坐标，色谱仪中的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到的回归方程为y=50727x+25.326，r=0.9996（n=5）。说明黄芩苷在0.476-476μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.4.2 稳定性实验
取同一供试品溶液（20150326）粉末6份，按1.4项下制备供试品溶液，在相同色谱条件下于0，2，4，8和24h重复进样，结果测得黄芩苷平均峰面积为1357.6，RSD为0.89%，表明在上述2.1实验条件下，24h以内样品溶液稳定性较好。
2.4.3 重复性实验
取消炎利胆冲剂同一批次的（20150822）粉末6份，按1.4项下制备供试品溶液，精密量取20μL进行测定，结果黄芩苷的平均含量为2.63mg·g2+，黄芩苷的RSD为0.96%，表明重复性良好。
2.4.4 精密度实验
取同一批供试品溶液（20151108）粉末6份，按1.4项下制备供试品溶液，精密量取20μL，连续进样6次，平均峰面积为1378.9，RSD为0.93%，表明本系统精密度良好。
2.4.5 阴性对照品实验
将原制剂中的中药黄芩去除，再依据医院关于此制剂的制备工艺及处方比例制成空白样品，按1.4实验方法项下的方法操作该空白样品，制备成阴性对照液。用进样针吸取20μL的阴性对照液，进样后测定，结果表明基本无干扰。
2.4.6 回收率实验
取同一批次消炎利胆冲剂样品6份，研钵研细，每份仍称取约0.5g，置于容量瓶中，分别加入3种稀释后不同浓度的黄芩苷对照品溶液，然后按照样品溶液制备方法操作，用进样针吸取20μL溶液进样，测定，结果见表1，黄芩苷的平均回收率为101.9%，RSD1.31%。
2.4.7 样品含量测定
按上述含量测定方法测定该院消炎利胆冲剂中黄芩苷的含量，结果见下表2。
4 结束语
本文采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量，其明显优势在于操作非常简便、专属性较强，适用于该院的消炎利胆冲剂在生产中的质量管理控制。
