HPLC测定消炎利胆冲剂中黄芩苷的含量

2017-07-10 00:51白梓静高鹏
当代化工 2017年1期

白梓静 高鹏

摘要:建立高效液相色谱法测定消炎利胆冲剂中黄芩苷含量的方法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.2%磷酸溶液-甲醇(52:48),流速1.0mL·min-1,检测波长276nm,柱温28℃。黄芩苷在0.476~476μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系呈良好,其平均回收率为101.9%,RSD为1.31%。本法准确、易于操作,重現性与稳定性较好,可用于消炎利胆制剂中主要有效成分黄芩苷的含量测定。

关键词:消炎利胆冲剂;黄芩苷;HPLC

中图分类号:O 657 文献标识码:A 文章编号:1671-0460(2017)01-0177-03

消炎利胆冲剂主要是由黄芩、白芍、厚朴、金钱草、五味子等18味中药提取加工成的复方制剂,具有消炎利胆,活血行气止痛,排石的作用。方中主药一黄芩的主要有效成分为黄芩苷。本文用高效液相色谱法测定黄芩苷含量,专属性强、操作简便快速,适用于对该制剂进行质量控制。

1 实验部分

1.1 试剂、仪器

色谱甲醇、0.2%自制磷酸溶液、二次蒸馏水;

Agilent1200高效液相色谱仪;离心机;UVmini-1240紫外可见分光光度计;超声清洗机。

1.2 色谱条件

色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.2%磷酸溶液-甲醇(52:48);柱温:28℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:20μL;检测波长:276nm。

1.3 对照品与供试品

黄芩苷对照品(购于中国药品生物制品检定所,112426-201510)

消炎利胆冲剂(延安市中医医院制剂室,批准文号:陕药管制字[2001]第3674号)

1.3 实验方法

取消炎利胆冲剂一小袋置于研钵中研成粉末状,精密称定,混匀,取细粉约0.5g,加甲醇置于50mL量瓶中,超声处理30min,自然放冷至室温,用0.45μm的微孔膜过滤取得的上清液,即得供试品溶液。另取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每mL黄芩苷对照品溶液中含有0.476mg的黄芩苷对照品溶液。按医院处方工艺制备不含黄芩的供试品,做成阴性对照品溶液。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相的选择

测定黄芩苷时分别选择0.2%磷酸-甲醇,冰醋酸-水-甲醇,0.1%的冰乙酸溶液与甲醇,0.1%的磷酸溶液与甲醇,乙腈0.2%磷酸,最终根据理论塔板数和峰形选择了0.2%的磷酸溶液与甲醇(52:48)作为其流动相。

2.1.2 检测波长的选择

通过参考诸多文献,经扫描发现黄芩苷对照品的最大吸收波长为276nm,最终将其确定为检测波长。

2.2 待测样品提取方法的选择

本文分别考察了加热回流和超声2种方法,结果显示超声相对于加热回流提取效果更好,更简便可行,因此,选取了30min的超声作为提取方法。

2.3 HPLC色谱图

HPLC色谱图见图1-3。

2.4 验证的特性指标测试数据及结果

2.4.1 线性范围

精密量取黄芩苷对照品溶液适量,分别配制成浓度为0.000476、0.0476、0.0952、0.238、0.476mg·mL-1的溶液作为对照品溶液,用进样针吸取20μL的上述不同浓度的对照品溶液进样。以进样浓度为横坐标,色谱仪中的色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得到的回归方程为y=50727x+25.326,r=0.9996(n=5)。说明黄芩苷在0.476-476μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.4.2 稳定性实验

取同一供试品溶液(20150326)粉末6份,按1.4项下制备供试品溶液,在相同色谱条件下于0,2,4,8和24h重复进样,结果测得黄芩苷平均峰面积为1357.6,RSD为0.89%,表明在上述2.1实验条件下,24h以内样品溶液稳定性较好。

2.4.3 重复性实验

取消炎利胆冲剂同一批次的(20150822)粉末6份,按1.4项下制备供试品溶液,精密量取20μL进行测定,结果黄芩苷的平均含量为2.63mg·g2+,黄芩苷的RSD为0.96%,表明重复性良好。

2.4.4 精密度实验

取同一批供试品溶液(20151108)粉末6份,按1.4项下制备供试品溶液,精密量取20μL,连续进样6次,平均峰面积为1378.9,RSD为0.93%,表明本系统精密度良好。

2.4.5 阴性对照品实验

将原制剂中的中药黄芩去除,再依据医院关于此制剂的制备工艺及处方比例制成空白样品,按1.4实验方法项下的方法操作该空白样品,制备成阴性对照液。用进样针吸取20μL的阴性对照液,进样后测定,结果表明基本无干扰。

2.4.6 回收率实验

取同一批次消炎利胆冲剂样品6份,研钵研细,每份仍称取约0.5g,置于容量瓶中,分别加入3种稀释后不同浓度的黄芩苷对照品溶液,然后按照样品溶液制备方法操作,用进样针吸取20μL溶液进样,测定,结果见表1,黄芩苷的平均回收率为101.9%,RSD1.31%。

2.4.7 样品含量测定

按上述含量测定方法测定该院消炎利胆冲剂中黄芩苷的含量,结果见下表2。

4 结束语

本文采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量,其明显优势在于操作非常简便、专属性较强,适用于该院的消炎利胆冲剂在生产中的质量管理控制。