用荧光定量PCR及金标法、酶联免疫法检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染的比较

吴乔羽

用荧光定量PCR及金标法、酶联免疫法检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染的比较

吴乔羽

目的 评价荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、金标法、酶联免疫法检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染的应用效果。方法 57例确诊为生殖道沙眼衣原体感染的不孕妇女作为研究对象,使用一次性无菌采样拭子采集患者宫颈口分泌物,分别采用荧光定量PCR、金标法、酶联免疫法检测沙眼衣原体,对比三种检测方法的阳性率。结果 荧光定量PCR(96.49%)与酶联免疫法(92.98%)的沙眼衣原体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ2=0.704,P>0.05)；荧光定量PCR及酶联免疫法的沙眼衣原体阳性检出率均高于金标法(82.46%),差异均具有统计学意义(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。结论 与金标法比较,荧光定量PCR和酶联免疫法检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染的准确性更高,两种方法均可为该疾病患者临床治疗方案的制定提供具有高度客观性的参考依据。

不孕妇女；生殖道沙眼衣原体感染；荧光定量聚合酶链式反应；金标法；酶联免疫法

生殖道沙眼衣原体感染是近年来才被命名的一种疾病,是指由沙眼衣原体感染所引起的生殖道炎性反应,属于性传播疾病［1］。临床研究发现,不孕妇女多合并生殖道沙眼衣原体感染,对身心健康产生的危害较大。因此,临床迫切需要一种检测生殖道沙眼衣原体感染快速、准确的方法［2］。现阶段,用于检测生殖道沙眼衣原体感染的方法主要有三种,分别为荧光定量PCR、酶联免疫法和金标法［3］。为进一步明确上述三种检测方法的应用价值,本院选取57例生殖道沙眼衣原体感染不孕患者作为研究对象开展课题研究,现将研究内容报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2015年3月～2016年3月收治的57例生殖道沙眼衣原体感染不孕患者作为研究对象,患者的生殖道沙眼衣原体感染均经细胞培养确诊。57例患者年龄26～43岁,平均年龄(32.2±3.7)岁,其中原发性不孕患者14例,继发性不孕患者43例,不孕时间3～16年,平均不孕时间(7.1±1.9)年。开展本课题研究前本院已事先向患者讲解研究目的及方法,患者均同意参与本课题研究,并签署研究知情同意书。

1.2 研究方法 使用一次性无菌采样拭子采集57例患者宫颈口分泌物,分别采用荧光定量PCR、金标法、酶联免疫法检测沙眼衣原体。

1.2.1 荧光定量PCR 将采集到的标本洗入1 ml无菌生理盐水中,在无菌生理盐水中加100 μl DNA提取液,摇晃混匀,以13000转/min的速度离心10 min,弃上清液,再加入50 μl DNA提取液,震荡混匀,煮沸10 min,再次以13000转/min的速度离心10 min,以上清液为DNA扩增反应模板,反应条件：温度37℃、时间94 min,温度95℃、时间1 min,温度94℃、时间5 s,温度60℃、时间40 s,共进行40个循环。当荧光强度>1×103copies/ml判定为阳性。

1.2.2 金标法 将标本放置在样品处理管中,检测试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司,按照试剂盒进行操作,10 min后观察结果,分别采用热灭活衣原体和热灭活B链球菌作为阳性对照,设置对照区和检测区,对照区有红线,检测区无红线判定为阴性,对照区和检测区均有红线判定为阳性。

1.2.3 酶联免疫法 酶联免疫法检测使用酶标仪为全自动酶标检测仪(购自美国Trinity公司),检测试剂为仪器配套试剂,严格按照检测仪器说明书和试剂说明书进行操作,由仪器对检测结果进行判定。

1.3 观察指标 观察荧光定量PCR、金标法、酶联免疫法检测沙眼衣原体的阳性率。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

荧光定量PCR检测沙眼衣原体的阳性率为96.49%,金标法检测沙眼衣原体的阳性率为82.46%,酶联免疫法检测沙眼衣原体的阳性率为92.98%。荧光定量PCR与酶联免疫法的沙眼衣原体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ2=0.704,P>0.05)；荧光定量PCR及酶联免疫法的沙眼衣原体阳性检出率均高于金标法,差异均具有统计学意义(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。见表1。

表1 荧光定量PCR、金标法、酶联免疫法检测沙眼衣原体的阳性率比较［n(%)］

3 讨论

荧光定量PCR、金标法、酶联免疫法在生殖道沙眼衣原体检测中的应用均较为广泛［4-6］。荧光定量PCR是二十世纪末发展起来的一种新检测技术,该种检测技术的检测原理是在PCR扩增时加入一对引物和特异性的荧光探针,通过荧光能量传递技术和闭管检测获得最终检测结果［7-9］。总结应用经验发现,该种检测方法能够有效避免传统PCR易污染的缺点,故获得检测结果的准确性更高。

金标法即免疫金标记技术,在全世界范围内应用较为广泛,具有特异性高、操作简便的应用优势,检测时无需使用特殊的设备。但近年来报道的临床研究均表明该种检测方法灵敏度较低［10-12］。酶联免疫法是上个世纪70年代发展起来的一种检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,现阶段已成为化学领域中的重点研究课题,且多数实践研究均证实该种检测方法具有特异性高、灵敏度高的应用优势［13-15］。

本课题研究对上述三种检测方法在检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染中的应用效果进分析。结果显示,荧光定量PCR检测沙眼衣原体的阳性率为96.49%,金标法检测沙眼衣原体的阳性率为82.46%,酶联免疫法检测沙眼衣原体的阳性率为92.98%。荧光定量PCR与酶联免疫法的沙眼衣原体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ2=0.704,P>0.05)；荧光定量PCR及酶联免疫法的沙眼衣原体阳性检出率均高于金标法,差异均具有统计学意义(χ2=5.961、2.931,P<0.05)。

综上所述,荧光定量PCR和酶联免疫法在不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染检测中所具有的应用优势更明显,两种检测方法均可为该疾病患者临床治疗方案的制定提供具有高度客观性的参考依据,值得各大医院开展应用。

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Comparison of fluorescent quantitation PCR,golden-standard method and euzymelinked immunosorbent assay in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women

WU Qiao-yu.

Department of Clinical Laboratory,Dongguan City Zhongtang Hospital,Dongguan 523220,China

Objective To evaluate the application effect of fluorescent quantitation polymerase chain reaction(PCR),golden-standard method and euzymelinked immunosorbent assay in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women.Methods A total of 57 infertility women with confirmed genital chlamydia trachomatis infection as study subjects,and their cervical secretions were collected with disposable sterile swab sampling.Detection were made on chlamydia trachomatis by fluorescent quantitation PCR,goldenstandard method and euzymelinked immunosorbent assay,and the positive rate of three detection methods was compared.Results There was no statistically significant difference in positive detection rate in chlamydia trachomatis between fluorescent quantitation PCR(96.49%)and euzymelinked immunosorbent assay(92.98%)(χ2=0.704,P>0.05).Fluorescent quantitation PCR and euzymelinked immunosorbent assay had higher positive detection rate in chlamydia trachomatis than golden-standard method(82.46%),and the difference had statistical significance(χ2=5.961,2.931,P<0.05).Conclusion Compared with golden-standard method,fluorescent quantitation PCR and euzymelinked immunosorbent assay provides higher accuracy rate in detection of genital chlamydia trachomatis infection in infertility women,and both methods can provide highly objective reference for establishment of clinical treatment regimens for patients with this disease.

Infertility women; Genital chlamydia trachomatis infection; Fluorescent quantitation polymerase chain reaction; Golden-standard method; Euzymelinked immunosorbent assay

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.016

2017-02-17］

523220 东莞市中堂医院检验科