上皮性卵巢癌组织中miR-21-5p、miR-29-3p、miR-139-5p表达变化及意义

崔开颖，赵素芬，朱根海

(1海南省人民医院，海口570000；2河北医科大学第二附属医院)

上皮性卵巢癌组织中miR-21-5p、miR-29-3p、miR-139-5p表达变化及意义

崔开颖1，赵素芬2，朱根海1

(1海南省人民医院，海口570000；2河北医科大学第二附属医院)

目的 观察上皮性卵巢癌(EOC)组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p的表达变化，并探讨其临床意义。方法 收集卵巢组织标本182例，其中正常卵巢组织56例、良性上皮性肿瘤(BEOT)42例、EOC 84例。采用实时荧光定量PCR技术测定组织标本中的miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p，并分析其与EOC患者临床病理特征的关系。结果 与正常卵巢组织、BEOT组织相比，EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p相对表达量增加， miR-139-5p相对表达量降低(P均<0.05)；正常卵巢组织与BEOT组织比较，差异无统计学意义。与中高度分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织相比，低分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p和miR-29-3p高表达者多，miR-139-5p高表达者少(P均<0.05)。结论 EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p表达上调并可能发挥促癌作用，miR-139-5p表达下调并可能具有一定抑癌作用，三者均可作为EOC的预后指标或者治疗靶标。

微小RNA-21-5p；微小RNA-29-3p；微小RNA-139-5p；上皮性卵巢癌

上皮性卵巢癌(EOC)在卵巢癌中最为多见，其病死率位居所有妇科肿瘤的首位[1]。目前，尽管卵巢癌发生和发展机制的相关研究取得较大进展，然而，还有很多机制尚待阐明，新的治疗理论、策略和方法尚需进一步探索。微小RNAs(miRNAs)是一类长度约为21个核苷酸组成的RNA小分子，通过特异性靶向降解目标mRNA分子或者抑制目标蛋白翻译过程而发挥广泛的生物学作用[2]。miRNAs在肿瘤发生、发展、耐药和预后中均具有重要作用，是肿瘤研究领域的热点分子之一[3]。miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p均是人体细胞生长和增殖调节的重要miRNAs，目前关于这些miRNAs在EOC组织中的研究鲜见报道。本研究通过观察miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p在EOC中的表达情况并探讨其临床意义，旨在为EOC的诊断和治疗新策略开发提供一定理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2010年1月～2015年10月海南省人民医院接受手术治疗的182例妇科患者卵巢组织标本，其中因良性宫体病变而切除附件的正常卵巢上皮组织标本56例，良性上皮性卵巢肿瘤(BEOT)组织标本42例，未经放、化疗而手术切除的EOC组织标本84例。EOC患者年龄<50岁26例，≥50岁58例；病理类型：浆液性48例，黏液性20例，子宫内膜样8例，透明细胞癌8例；分化程度：低分化33例，中分化36，高分化15例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期54例；无淋巴结转移27例，有淋巴结转移57例。

1.2 miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p检测方法 采用实时荧光定量PCR法。紫外分光光度计购自美国Thermo公司，实时荧光定量仪购自美国BioRad公司，TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司，miRNA反转录试剂盒购自德国QIAGEN公司，实时荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司，其他化学试剂均购自北京科昊生物工程有限公司。miR-21-5p引物：5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′；miR-29-3p引物：5′-UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA-3′；miR-139-5p引物：5′-UCUACAGUGCACGUGUCUCCAGU-3′；下游通用引物和内参U6引物均由试剂盒提供。操作步骤：①RNA提取：取液氮中卵巢组织，用研磨器研碎；加入适量TRIzol，室温静置10 min。加入适量氯仿并混匀，低温12 000 r/min离心10 min，吸取上层透明液体；加入适量异丙醇，混匀并低温12 000 r/min离心10 min；乙醇洗涤，低温12 000 r/min离心5 min；室温干燥，加入无RNA酶水溶解，紫外分光光度计定量并-80 ℃保存。②miRNA cDNA反转录及荧光实时定量：取RNA并严格按照QIAGEN公司miRNA反转录试剂盒说明书进行反转录，配制20 μL反应体系。反应条件：37 ℃反转录60 min，95 ℃灭活5 min。取反转录产物配制20 μL反应体系，置于荧光定量仪中进行反应。反应条件：95 ℃预变性15 min；94 ℃变性15 s，55 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，40个循环。miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p相对表达量以2-Δct计算。以正常卵巢组织miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p相对量平均值为界定标准，高于平均值为高表达，低于平均值为低表达。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p相对表达量比较 与正常卵巢组织、BEOT组织相比，EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p相对表达量增加， miR-139-5p相对表量降低(P均<0.05)。正常卵巢组织与BEOT组织比较，差异无统计学意义。见表1。

表1 不同卵巢组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p相对表达量比较

注：与正常卵巢组织比较，*P<0.05；与BEOT组织比较，#P<0.05。

2.2 miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p表达与EOC患者临床病理特征的关系 不同年龄和病理组织类型EOC组织miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p高表达者比较，差异无统计学意义；与中高度分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织相比，低分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p和miR-29-3p高表达者多，miR-139-5p高表达者少(P均<0.05)。见表2。

表2 miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p表达与EOC患者临床病理特征的关系(例)

3 讨论

EOC是恶性程度较高的妇科肿瘤，其发病机制和临床治疗新策略一直是基础和临床研究的热点问题之一[4，5]。miRNAs广泛参与细胞发育、分化及衰老等几乎所有生命活动的调节[6]，目前是肿瘤研究的热点之一[7]。

miR-21-5p已经被证实在乳腺癌、胃癌和肝癌等多种癌组织中高表达，被认为在肿瘤发生发展中扮演着癌基因的角色[8]。miR-21-5p促进肿瘤发展的机制，主要认为与靶向下调重要的肿瘤抑制分子PTEN相关。娄艳辉等[9]研究发现，EOC组织较正常卵巢组织存在miR-21-5p表达上调现象，推测其与患者不良预后密切相关，能否作为EOC的治疗靶标和预后指标尚需进一步大样本研究。本研究结果表明，EOC组织中miR-21-5p相对表达量高于BEOT组织和正常卵巢组织，与相关文献报道一致；并且，相比于中高度分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织，低分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p高表达者增加，提示其与EOC的分化程度和转移密切相关。

miR-29-3p在肿瘤发生发展中的作用争议较大。Zhu等[10]报道，非小细胞肺癌患者组织和血清中miR-29c表达水平较正常人显著升高，推测其扮演着重要的促癌角色；然而，褚庆华等[11]在食管鳞状细胞癌研究中发现，miR-29c可以通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1而抑制肿瘤细胞侵袭和转移。然而，关于miR-29-3p在EOC中的表达和作用却鲜见报道。本研究结果显示，EOC组织中miR-29-3p相对表达量高于BEOT组织和正常卵巢组织，并且在低分化、高分期和有淋巴结转移的EOC组织中高表达者显著增多。表明miR-29-3p在EOC组织中可能通过某种机制发挥促进肿瘤发生和发展的作用，但具体机制尚需进一步研究。

研究发现，miR-139-5p在各种肿瘤中作用同样具有较大差别。Li等[12]报道，miR-139-5p在结肠癌、头颈部肿瘤和结肠组织癌中较相应正常组织表达下调，具有一定抑制肿瘤发生发展的重要作用。廖信芳等[13]报道，miR-139-5p在结直肠癌组织中较正常结直肠组织表达下调，并发现其可能通过靶向Notch1蛋白而发挥抑癌作用。然而，Bao等[14]发现miR-139-5p在胃癌组织中表达上调发挥促癌作用。然而，到目前为止，尚未见miR-139-5p在EOC组织中表达状况的研究。本研究结果发现，EOC组织中miR-139-5p相对表达量均低于BEOT组织和正常卵巢组织，且EOC组织中不同分化程度、临床分期及有无淋巴结转移病理特征的miR-139-5p表达水平均存在显著差异。表明miR-139-5p可能在EOC中发挥抑癌作用，然而相关机制尚需进一步研究。

综上所述，EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p表达上调并可能发挥促癌作用，miR-139-5p表达下调并可能具有一定抑癌作用，三者均可能作为较为理想的预后指标或者治疗靶标应用于临床，值得进一步研究。

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