核酸血筛标本冷链运输保存的方法和效果分析

么俊卿++叶惠芬

[摘要] 目的 探讨血站的核酸标本冷链运输保存的方法和效果。方法 按照《血站技术操作规程（2015版）中标本运输的要求，模拟在车辆运输的条件下，使用不同的保存方法，测试运输箱内标本的保温时间（即标本运输温度保持在2～10℃的时间）。研究共分3组，第1组：标本运输箱底部放置一块4℃冷源板；第2组：标本运输箱底部放置一块冷源板，四周随机选取两面各放一块冷源板，共三块冷源板；第3组：标本运输箱底部放一块冷源板，四周各放一块冷源板，共五块冷源板。结果 模拟车内开空调环境，调节实验室内温度为23～27℃，湿度为30%～70%，第1、2、3组运输箱保温时间分别为：（0.16±0.02）h、（6.16±0.37）h和（13.78±0.71）h，两两比较差异均有统计学意义（F=2197.474，P<0.05）。结论 一块冷源不能满足核酸标本运输的要求，摆放3块冷源和5块冷源，可以确保核酸标本运输保存的温度在适宜范围内，为输血安全提供保障。

[关键词] 血液中心；核酸标本；运输与保存；冰源

[中图分类号] R446.11 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）07-128-03

The method and effect analysis of cold chain transportation of

nucleic acid sieve

YAO Junqing YE Huifen

Dongguan Blood Center， Dongguan 523000， China

[Abstract] Objective To investigate the ways and effects of blood sample cold chain transportation preservation in the blood center. Methods According to the requirements of Blood Stations Technology Operation Procedures （2015 edition）， the holding time of the samples in the transport cases （the time of samples transport temperature holding between 2 to 10℃） were tested by different preservation methods， simulated the condition of transportation by vehicles. The samples were divided into three groups. The first group were used one piece of cold source plate at the bottom of the transport cases .The second groups were used three pieces of cold source plate， one piece were placed at the bottom， and the others were placed at two sides selected randomly. The third groups were used five pieces， one placed at the bottom， and the others were placed at each side. Results To simulate the condition in vehicles with air condition to regulate the temperature of a laboratory to 23-27℃， humidity to 30%-70%，the holding time in the first， the second and the third groups were （0.16±0.02）h、（6.16±0.37）h and （13.78±0.71）h， respectively. There was significant difference between the two groups （F=2197.474， P<0.05）. Conclusion One piece of cold source cannot reach the requirement of nucleic acid samples transportation. Three and five pieces can ensure that the temperature of the transportation of nucleic acid samples is within the appropriate range， which can guarantee the safety of blood transfusion.

[Key words] Blood center； Nucleic acid samples； Transportation and preservation； Cold source.

目前我國血站输血相关传染性疾病的血液筛查普遍采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法，该方法的灵敏度和特异性虽然在不断地改进和提高，但由于方法学本身的局限性，感染者“窗口期”献血、病毒变异、隐匿性感染及其他因素仍然可能引起输血后HBV、HCV和HIV等病原微生物感染[1]。核酸扩增检测技术（nucleic acid amplification technologies，NAT）可以缩短病毒特异抗原和抗体免疫测定的“窗口期”[2-3]，是提高血液安全的有效措施[4-7]。但是核酸检测与ELISA相比在检测过程的各个环节上均有其特殊之处，这些环节若缺乏严格的质量控制，会导致血液核酸检测结果不准确。

根据《血站技术操作规程（2015版）》中标本运输的规定，核酸标本的运输温度要求为2～10℃[8]，核酸标本的保存温度和时间会对标本的检测结果产生一定的影响[9]。为了保证核酸标本的质量，满足核酸检测的要求，本研究探讨了东莞市中心血站的核酸标本运输与保存的效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本运输箱

采用深圳市淳德科技有限公司生产的专用标本运输箱，型号：LX-25A，外尺寸：400mm×310mm ×360mm，内尺寸：340mm×250mm×300mm。

1.2 冷源板

采用深圳市淳德科技有限公司生产的冷链专用4℃冷源板（又名冰盒），规格：263mm×183mm×23mm，预先放置于-30℃低温冰箱冷冻保存10～24h，保证内部完全结冰，使用前在室温下解冻1～3min。

1.3 核酸标本

采用BD Vacutainer一次性使用真空静脉血样采集容器采集标本，而本研究采用本站已经超过国家要求保留时间，需要销毁的核酸标本，标本按照要求，保存在标本专用冰箱里，保存温度在2～8℃。标本血容量符合采血管标注的采集量，即5mL，无严重溶血、脂血、黄疸、凝血、渗漏、稀释。标签条形码清晰，无血渍、无划痕，粘贴符合要求，标本血浆和红细胞被分离胶隔离。

1.4 温度记录仪

选择Elitech RC-5 U盘温度记录仪（江苏精创电气股份有限公司），温度检测范围-30℃～+70℃；精度±0.5℃。RC-5 U盘温度记录仪在使用之前经过华南国家计量测试中心广东省计量科学研究院计量校准。校准合格后使用。该温度记录仪设定每1min自动记录一次温度。

1.5 温度监测方法

第1组：标本运输箱底部放置一块4℃冷源板；第2组：标本运输箱底部放置一块冷源板，四周随机选取两面各放一块冷源板，共三块冷源板；第3组：标本箱底部放一块冷源板，四周各放一块冷源板，共五块冷源板。

冷源板放进标本箱后，监测标本箱内温度，直到标本箱内温度低于10℃，放入核酸标本50支，标本和冷源之间用隔离网垫隔开，开始监测箱内温度变化。

Elitech RC-5 U盘温度记录仪设定每1min自动记录一次温度，直到标本箱内温度超过10℃，三组方法各监测10次，读取记录标本箱温度在2～10℃的保温时间，最后导出数据整理结果。

1.6 环境要求

模拟运输标本的血液运输车环境，调节室内温度和湿度，保持室温在23～27℃，湿度在30%～70%。

1.7 统计学方法

选择SPSS17.0软件进行分析，计量数据选择（）表示，三组整体对比采用方差分析，两组比较采用t检验，P<0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 核酸标本检查

RNA易受外界環境的影响，标本保存过程中不能发生溶血等现象，观察放在三组标本运输箱中的核酸标本外观，上清液清亮无重度溶血，重度脂血，黄疸，稀释等，符合接收要求。

2.2 三组标本运输箱的保温时间比较

第1、2、3组标本运输箱保温时间（即箱内温度在2～10℃范围内的时间），第3组和第2组明显长于第1组，结果见表1。

3 讨论

随着我国对采供血工作的重视，社会对输血安全的关注程度越来越高，各种相关法律、法规与标准相继出台，这对血站的管理提出了更高的要求[10]。冷链是一套用于血液和检测标本储存和运输的系统，冷链管理要为血液质量和标本检测结果有效性提供保障，其中核酸标本的运输和保存直接影响标本质量和检测结果，是冷链管理的一个关键控制点。

由于核酸检测对象的特殊性，即检测的靶核酸DNA、RNA不稳定、极易降解，在核酸检测中，标本的采集、运输和保存对检验结果有决定性的影响[11]，核酸检测结果的可靠性有赖于采集足量的样本和正确的运输。有研究表明[12]，标本在室温放置一段时间后，病毒的检出率较存放于4℃环境时，有一定比例的下降，所以一般要求样本在4℃保存条件下6h内进行检测，然而现行常规采血流程使血站各采血点的标本在当天晚上才能送达实验室，从采集到检测，中间相隔11～12h，其中运输时间约为2～3h，难以满足上述要求，在此情况下，为保证标本质量，运输和保存的冷链非常重要。

本研究显示，第1组标本运输箱保温时间为（0.16±0.02）h，没有达到运输时间2～3h的要求，所以我们不能采取放置一块冰源的方法来运输核酸标本；第2、3组标本运输箱保温时间分别为（6.16±0.37）h和（13.78±0.71）h，两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。研究结果表明室温在23～27℃，湿度在30%～70%条件下，放置三块冷源板和五块冷源板，可以满足核酸标本运输和保存要求，我们应根据标本运输路程长短选择合适的冷源板数量。三块和五块冷源板只能起到保温的作用，不足以给标本降温并维持运输温度。本血站现行采集标本的模式是根据实时荧光PCR法对标本的要求，在采血点设置冰箱，并且配备离心机。采集后的核酸标本保存在2～6℃冰箱中，并在4h内离心后再放入标本运输箱内，最后由血液标本运输车运送回实验室。

核酸标本的运输与保存对于检测结果的可靠性具有重要的意义，不过我国很多血站很少采用全程的温度监控设备来自动进行温度记录，温度监控记录和核酸标本交接记录大多为人工填写，血站对于核酸标本的运输缺少有效的监督和管理机制，冷链上并没有形成完善、真实的一体化管理。因此，在核酸标本的运输与保存冷链管理对策中，要根据《血站核酸检测实验室质量控制指南》和自身的采血流程制定一系列措施。标本在采血现场保存在血液专用保存冰箱内，温度控制在2～6℃范围内，采集后的标本在4h内实施离心，分离红细胞和血浆；参考国内外经验，利用移动式温度监控设备进行连续自动全程监控[13]；同时尽量缩短运输时间，合理规划路线，做好标本交接工作，并记录时间和温度等原始数据。

本次模拟测试使用专用标本运输箱和4℃冷源板来运输和保存标本，是因其性能稳定、密封性较好，既能保证标本运输和保存的温度要求，又能满足防水、防破损、防外泄、易于消毒处理等生物安全要求，值得在血站推广应用[14]。当然，由于国家没有统一要求，全国各地血站的具体情况不同，大家使用的运输箱和冷源各不相同，也曾有报道应用自行研制的标本运输箱能满足核酸标本运输的要求，而且取得很好的保温效果[15]，因此各地血站可以根据自身的采血模式、当地气候和环境以及标本运输和保存的实际需求制定适合自己的标本冷链管理。总之，核酸标本的保存和运输要求非常严格，正确的标本保存对于检测结果准确性意义重大，为此笔者认为要对冷链管理进行不断改进，确保核酸标本的质量，从而为临床用血提供安全保障。

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（收稿日期：2017-01-27）