HLA-B27在疑似强直性脊柱炎患者中的检测与分析

王师，王楚，车艳红，张琦，张火兵，童能胜

（1.北京中同蓝博临床检验所，北京100076；2.中国康复研究中心北京博爱医院脊柱脊髓神经功能重建科，北京100068）

HLA-B27在疑似强直性脊柱炎患者中的检测与分析

王师1，王楚2，车艳红1，张琦1，张火兵1，童能胜1

（1.北京中同蓝博临床检验所，北京100076；2.中国康复研究中心北京博爱医院脊柱脊髓神经功能重建科，北京100068）

目的通过检测疑似强直性脊柱炎患者HLA-B27（human leucocyte antigen-B27，人类白细胞抗原-B27）的表达情况，探讨HLAB27在疑似强直性脊柱炎患者中的分布及相关的临床意义。方法选取1 009例疑似强直性脊柱炎患者为研究对象，通过流式细胞术的方法检测外周血中HLA-B27的表达情况。结果在1 009例疑似患者中，男497例，其中HLA-B27阳性患者为102例，占20.5%；女512例，其中HLAB27阳性患者为63例，占12.3%，男性明显高于女性（P＜0.05）。20～40岁年龄阶段的HLA-B27阳性患者占63.3%，高于其他年龄阶段（P＜0.05）。结论在疑似强直性脊柱炎患者中，男性青壮年HLA-B27阳性率较高，HLA-B27的检测有助于强直性脊柱炎的早期诊断。

HLA-B27；强直性脊柱炎；流式细胞术

HLA(human leucocyte antigen)-B27属于主要组织相容性复合（major histocompatibility complex，MHC）I型分子,它是由重链和微球蛋白以及组装在内质网上的抗原肽组成，表达于所有的真核细胞表面，研究表明：淋巴细胞中高表达的HLA-B27参与多种疾病的发生过程[1]。强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种以胸、颈、腰段的脊柱韧带和关节以及骶髂关节等部位炎症引起的疼痛为特征的炎症性的自身免疫性疾病，它多发生于青年和中年人群中的一种疾病，起病隐袭，病程较长，容易造成患者不可逆的脊柱关节受损，在发病的早期难以精准的诊断[2-3]。目前临床上对强直性脊柱炎的诊断主要是通过计算机断层扫描（computer tomography，CT），但是这种诊断具有滞后性，即患者从发生症状到临床确诊往往会滞后三到五年，延误了疾病的治疗。研究发现，强直性脊柱炎的发生与HLA-B27的异常表达有着密切的关系，因此，HLA-B27的检测在强直性脊柱炎的早期诊断中具有重要的意义，是临床诊断和鉴别诊断强直性脊柱炎的重要参考指标[4-6]。本文采用流式细胞术对本检验所收到的1 009例疑似强直性脊柱炎患者的血液样本进行的HLA-B27表面抗原的检测，以了解京津冀地区不同性别和年龄阶段疑似强直性脊柱炎患者中HLA-B27的表达情况，并对强直性脊柱炎患者的早期诊断提供重要的临床参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料选择1 009例2016年1月～2016年11月京津冀地区医院送检到本检验所疑似强直性脊柱炎患者的外周血样本，其中男497例，女512例；年龄1～80岁，平均年龄（35.4±13.8）岁。

1.2 主要仪器与试剂仪器为BD FACSCalibur流式细胞仪（美国BD Biosciense Becton,Dickinson and Company）。主要试剂：BD Calibrte 3-color kit；HLA-B27检测试剂盒（流式细胞法），试剂盒内的试剂主要为HLA-B27-FITC(luoresceinisothiocyanate)/CD3-PE(phycoerythrin)流式抗体，HLA-B27 Calibrte beads，10×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution；鞘液；FACS Clean液。以上试剂均购于美国BD Biosciense Becton,Dickinson and Company。

1.3 方法根据试剂盒提供的检测方法进行操作，将30 μLHLA-B27-FIT/CD3-PE抗体与50μL外周血共孵育15 min，加入2 mL稀释好的1×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution溶血素，10 min后300 g离心5 min去上清，加入2 mL流式清洗液300 g离心5 min去上清，加入300μL 1%多聚甲醛溶液混匀后按仪器操作规程进行上机检测。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0进行对获得的数据进行统计学分析与处理，计数资料采用率（%）来表示，计数资料间的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HLA-B27在疑似强直性脊柱炎患者不同性别之间表达情况在1 009例疑似强直性脊柱炎患者的标本中，HLA-B27阳性患者为165例（16.4%），HLA-B27阴性患者为844例（83.6%）。男性疑似患者为497例，其中HLA-B27阳性患者为102例（20.5%）；女性疑似患者为512例，其中HLA-B27阳性患者为63例（12.3%）。在HLA-B27阳性疑似强直性脊柱炎患者中，男性明显多于女性（P＜0.05）。见表1。

表1 不同性别患者HLA-B27表达情况Table 1Expression of HLA-B27 in patients with different gender

2.2 HLA-B27在疑似强直性脊柱炎患者不同年龄阶段之间表达情况在不同年龄阶段统计分析中，疑似强直性脊柱炎阳性患者HLA-B27阳性主要集中在20～40岁年龄阶段（P＜0.05）。男性患者20～40岁年龄阶段HLA-B27阳性占到66.7%，明显高于其他年龄阶段（P＜0.05）；同样在女性患者20～40岁年龄阶段HLA-B27阳性占到57.7%，明显高于其他年龄阶段（P＜0.05）。其次，40～60岁年龄阶段的患者HLAB27阳性也高于其他两个年龄阶段（P＜0.05）。见表2。

表2 不同年龄阶段患者HLA-B27表达情况[n（%）]Table 2Expression of HLA-B27 in different age groups of patients [n（%）]

3 讨论

强直性脊柱炎作为一种慢性自身免疫学疾病，发病初期比较隐蔽，病程较长，一旦确诊即为中后期，对脊柱和关节造成不可逆转的损害。强直性脊柱炎会造成椎间盘的钙化和骨化，患者中后期会出现严重的关节强直以及脊柱畸形，发病十年内就可以造成患者严重的不可逆转的关节功能障碍，致残率较高[7]。这种疾病常发生于青壮年人群中，发病初期表现为骨关节处的疼痛，与很多炎症性疾病相似，无明显的骨骼炎症性变化，致使其早期很难通过计算机断层扫描确诊，也容易被误诊为其他关节疾病。因此，强直性脊柱炎的早期诊断尤为重要[8-10]。

目前强直性脊柱炎的发病机制尚不清楚，研究发现，HLA-B27的表达与强直性脊柱炎有着密切的关系。HLA-B27是一类表达于所有有核细胞上的MHC I类分子，参与多种细胞信号传递与免疫调控，与强直性脊柱炎有着明显的相关性[11]。在强直性脊柱炎患者中，约90%的患者表现为HLAB27阳性，而在正常人群中，HLA-B27阳性只占5%左右，但在我国，强直性脊柱炎的发病率约为0.3%，即约6%HLA-B27阳性人群会患有强直性脊柱炎[12]。

本研究结果显示，在京津冀地区的疑似患强直性脊柱炎患者中，男女比例约为1：1，HLA-B27阳性患者为占16.4%；在HLA-B27阳性患者中，HLA-B27阳性男性患者在男性患者中所占的比例为20.5%，HLA-B27阳性女性患者在女性患者中所占的比例仅为12.3%，男性明显多于女性，具有显著差异，表明京津冀地区疑似会强直性脊柱炎患者中强直性脊柱炎的患者男性可能会多于女性。在疑似会强直性脊柱炎患者中，20～40岁年龄阶段的HLA-B27阳性患者（63.3%）高于其他年龄阶段，预示着强直性脊柱炎在青壮年人群中的发病率会明显高于其他阶段。在临床诊断中，利用流式细胞术方便、快速、准确等特点对疑似会强直性脊柱炎患者检测HLAB27，从而能实现对强直性脊柱炎的早期诊断。对于强直性脊柱炎患者，在发病早期，骶髂关节出现炎症之前，X光片或者计算机断层扫描都难以确诊强直性脊柱炎，因此，对于疑似强直性脊柱炎患者进行HLA-B27检测为强直性脊柱炎的早期诊断提供了新的思路并具有重要的临床参考价值，对于HLA-B27阳性患者给予相应的治疗，就能够预防髋关节和强直脊柱强直等强直性脊柱炎并发症，从而避免对造成脊柱不可逆的损伤[13-14]。由于本研究缺少进一步的临床症状表现和最终的确诊结果，HLA-B27阳性在男女间以及不同年龄阶段间的分布虽有统计学差异，但并不能直接表明疑似强直性脊柱炎患者HLA-B27阳性与患有强直性脊柱炎具有一一相对应的关系，HLA-B27阳性与强直性脊柱炎的确切的关系还有待进一步研究。

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Detection and analysis of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis

Wang Shi1，Wang Chu2，Che Yan-hong1，Zhang Qi1，Zhang Huo-bing1,Tong Neng-sheng1
(1.Beijing CIC Clinical Laboratory,Beijing，100076,China；2.Department of Spinal and Neural Function Reconstruction,China Rehabilitation Research Center,Beijing Boai Hospital,Beijing，100068,China)

ObjectiveTo detect the expression of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis,and then to explore the distribution and clinical value of HLA-B27.MethodsA total of 1 009 patients with suspected ankylosing spondylitis were enrolled in this study,flow cytometry was performed to detect the positive expression of HLA-B27 in peripheral blood.ReslutsAmong all patients,the rate of positive HLAB27 in male patients(n=497)was 20.5%(102cases),while the rate of positive HLA-B27 in female patients(n=512)was 12.3%(63cases).The rate of positive HLA-B27 in male patients was significantly higher than females patients.The rate of positive HLA-B27 patients at the age of 20-40 was higher than the patients with other age stages(P＜0.05).ConclusionIn patients with suspected ankylosing spondylitis,the highest rate of positive HLA-B27 was found in young adults,this study was essential for the early diagnosis of ankylosing spondylitis.

HLA-B27;Ankylosing Spondylitis;Flow Cytometry

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.18.013

共同第一作者：王师，王楚

张火兵，E-mail：zhanghuobing2010@163.com；童能胜，E-mail：tnsh8656@163.com