联合检测EZH2、Ki67在乳腺癌中的表达及相关性①

冯亚静，田 寅，陈高辉，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

联合检测EZH2、Ki67在乳腺癌中的表达及相关性①

冯亚静，田 寅，陈高辉，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：研究果蝇zeste基因增强子同源物 2(Enhancerofzestehomolog2，EZH2)和增殖细胞核抗原(Ki-67)在人乳腺癌中的表达及二者表达的相关性。方法：对50例乳腺癌石蜡包埋的组织标本，采用免疫组化法检测EZH2、Ki-67的表达情况，分析其与临床病理因素的关系及两者的相关性。结果：①乳腺癌EZH2、Ki-67阳性表达率分别为78%、62%，明显高于癌旁正常组织的表达，差异均有统计学意义(P<0.05)；②二者的表达与患者发病年龄、绝经情况无关，差异无统计学意义(P>0.05)，但与淋巴结转移、临床分期及组织学分级有关，差异均有统计学意义(P<0.05)；③乳腺癌中二者呈正相关表达(P<0.05)。结论 ：乳腺癌中EZH2、Ki-67的异常表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级相关，二者表达呈正相关。

乳腺癌;EZH2;Ki-67;联合监测;相关性

随着时代的发展，乳腺癌俨然已成为一种严重威胁女性健康,随着饮食习惯及环境变化和人们生活水平的提高发病率逐年升高的恶性肿瘤之一[1]。EZH2是在PCG基因家族中起着核心作用的一个成员，它被研究发现归属转录抑制因子的一种，高表达于各种癌组织中[2]，密切相关于增殖肿瘤细胞。Ki-67是一种核抗原，高表达于增殖期细胞中，经研究发现其可作为细胞增殖活性的反映。国内外研究显示，许多种恶性肿瘤的发生发展和预后均与EZH2 和Ki67 的异常表达息息相关。但联合检测EZH2与Ki67 在乳腺癌中的相关研究鲜有论述。

1 材料与方法

1.1 材料

选取50例2014～2016年佳木斯大学附属第一医院肿瘤科的乳腺癌手术患者的包埋石蜡标本及50例乳腺癌旁组织包埋的蜡块标本。选取标准：选取患者术前均没有行内分泌口服治疗、卵巢去势治疗、靶向治疗、放化疗及其他治疗方法。选取标本均经本院病理组织学检查证实。

标本处理:福尔马林缓冲溶液固定标本，常规脱水、透明、石蜡包埋，石蜡切片(3μm)，后贴于载玻片上，烘片，行免疫组织化学染色。

1.2 主要试剂

浓缩型鼠抗人EZH2单克隆抗体(CellSignalingTech-nology，USA)、浓缩型鼠抗人Ki-67单克隆抗体(CellSignalingTech-nology，USA),免疫组织化学试剂盒、显色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。

1.3 方法

采用Envision免疫组织化学染色法检测EZH2和Ki-67的表达，操作严格依照购置试剂盒说明书，用PBS缓冲液代替一抗做阴性对照。脱蜡至水，阳性对照组为已知阳性乳腺癌组织。抗原修复，滴加一抗4℃过夜，二抗孵育，显色、复染、脱水、透明、封片。

1.4 结果判定

结果判定:EZH2和Ki-67二者均主要表达于细胞核，阳性染色为显微镜下胞核见黄色颗粒沉淀，阴性即不染色。染色结果采取双盲法观察，每个标本随机观察高倍视野(×400)5个，对各个视野中阳性细胞个数、细胞总个数行计数。最后结果采取半定量积分法来分析。按文献参照染色强度评分[3]：0分、1分、2分、3分分别为不显色、淡黄色、棕黄色、棕褐色。百分比评分(阳性细胞占细胞总数的比例)：0分、1分、2分、3分、4分，分别为阴性、阳性细胞<25%、25%～50%、50%～75%、>75%。总体评分值=评分(染色强度)×评分(阳性细胞比例)，判定：阴性(-)、弱阳性(+)、阳性(++)、强阳性(+++)分别为总分≤3 分、>3分且≤5分、>5分且≤7分、>7 分。

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1.5 统计学方法

采用SPSS16.0 ，样本阳性率用χ2检验，P<0.05差异具有统计学意义。

2 结果

2.1EZH2表达

EZH2阳性表达主要位于胞核。EZH2在乳腺癌中、癌旁正常组织中的阳性表达率分别为78%、30%，在乳腺癌及癌旁正常组织中比较差异有统计学意义(χ2= 23.19，P<0.05),见表 1。

表1 乳腺癌及乳腺癌旁正常组织中EZH2的表达(例数)

2.2Ki-67表达

Ki-67阳性表达主要位于胞核。Ki-67在乳腺癌中、癌旁正常组织中的阳性表达率分别为62%、34%，Ki-67在乳腺癌及癌旁正常组织中比较差异有统计学意义(χ2=7.85，P<0.05)，见表2。

表2 乳腺癌及乳腺癌旁正常组织中Ki-67的表达

2.3EZH2与临床病理因素的关系

见表3。经统计学分析，EZH2的表达与组织分化、临床分期及淋巴结转移情况有相关性，差异有统计学意义(P<0.05)；与年龄、绝经情况无相关性，差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 EZH2与临床病理因素的关系

2.4Ki-67与临床病理因素的关系

经统计学分析，Ki-67的表达与组织分化、临床分期及淋巴结转移情况有相关性，差异有统计学意义(P<0.05)；与年龄、绝经情况无相关性，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 Ki-67与临床病理因素的关系

2.5EZH2与Ki-67二者的关系

经统计学分析，EZH2与Ki-67表达成正相关(χ2=3.93，P<0.05) ，见表 5。

表5 乳腺癌中EZH2 与 Ki-67的相关性

3 讨论

EZH2在PCG基因家族中扮演着重要角色,细胞的生长及调节与其相关,研究发现，机制调节细胞增殖主要是抑制染色质中的靶点基因,增殖细胞进入S期与其高表达相关。原代细胞的生长能力增强,EZH2在多种原发肿瘤中表达,密切相关于肿瘤的形成和生长[4]。作为转录抑制因子之一的EZH2蛋白，多种基因的活性可被其抑制,尤其是肿瘤转移抑制基因,即EZH2一定程度上能够促进肿瘤的侵袭和转移[5]。姚凡等[6]采用免疫组化法检测EZH2在乳腺癌(共105例)中的表达，发现乳腺癌组织中EZH2阳性表达率为 69.5%，并分析淋巴结转移情况、肿瘤恶性程度与其表达水平有正相关性，ER表达和乳腺癌预后与其表达有负相关性，由此发现乳腺癌恶性细胞的侵袭、转移与EZH2的表达密切相关。

作为位于细胞核内[7]的一种大分子蛋白质，细胞增殖相关核抗原Ki67蛋白简称Ki67。Gerdes[8]等发现Ki67 除外G0期不表达，其他G1、G2、S、M期均表达。后又有发现Ki67[9]在活跃增值组织高度表达，低表达于静止细胞中，二者研究均吻合，其他国内外研究亦验证了这一结论，有许多学者已将其作为细胞增殖度的标志之一[10]。随着生物医学发展，另有证明存在Ki67 对乳腺癌预后判断也有参考意义的依据。

目前,EZH2和Ki67蛋白联合监测的表达在膀胱癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌中的表达研究较多。EZH2、Ki67在转移性结肠癌、胃癌中的表达明显增高,而且和未转移者相比预后较差。二者可作为肿瘤标志物监测结肠癌、胃癌的演变。目前在国外关于两种蛋白EZH2和Ki67联合检测在乳腺癌中的研究鲜见报道,而在国内尚未见报道。

本研究试图采用免疫组化方法,通过对EZH2和Ki67两种蛋白在癌旁正常组织及乳腺癌组织中表达的联合检测,在探讨其与乳腺癌各临床病理参数的基础上，更进一步探讨二者表达的相关性及此种相关性可能蕴含的临床意义，即与诊断、治疗以及预后的关系。

[1]王新，韩丽丽，赵海丰，等．PDCD4、mTOR在乳腺癌中的表达及意义[J]． 黑龙江医药科学，2016，39(1):82-86

[2]包合新,李建国,邢桂滨．EZH2和Bmi-1基因在结直肠癌组织中的表达及其意义[J]． 黑龙江医药科学，2014，37(1) :10-12

[3]周颖，曾林波，李喆．甲状腺功能亢进症患者肝功能生化指标的测定及其临床意义 [J]．标记免疫分析与临床，2010，17(2)：115-116

[4]ChenH,RossiterC,AntonorakisSE.CloningofahumanhomologoftheDrosophilaenhancerofzestegene(EZH2)thatmapstochromosome21q22.2 [J].Genomics,1996,38:30

[5]HillierLW,FultonLA.TheDNAsequenceofhumanchromosome7[J]．Nature,2003,424:157

[6]姚凡, 刘崇,房月,等.EZH2在乳腺癌中的表达及其临床意义[J]. 中国微生态学杂志, 2013, 25(2):143-146

[7]DowsettM,SmithIE,EbbsSR,etal.PrognosticvalueofKi67expressionaftershort-termpresurgicalendocrinetherapyforprimarybreastcancer[J].JNatlCancerInst, 2007, 99(13):167-170

[8]GerdesJ，SchwabU，LemkeH.ProductionofamousemonoclonalantibodyreactivewithahumannuclearantigenassociatedwithcellProliferation[J]．IntJCancer,1983，31：13-20

[9]AnderUrruticoechea，IanESmith，MitchDowsett,etal．ProliferationmarkerKi-67inEarlybreastcancer[J]．Nature,2005，23(28)：7212-7220

[10]XuT,ZhuY,XiongY,etal.Ki67suppressestumorigenicityandregulatesG1/Stransitionofhumanhepatocellularcarcinomacells[J].Hepatology, 2009, 50(1):113-121

佳木斯大学研究生创新项目，编号：YM2016-061。

冯亚静(1989～)女，河南新郑人，在读硕士研究生。

周昱(1969～)男，黑龙江双鸭山人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail：zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2017)03-0080-02

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