悬浮红细胞储存时间对制备洗涤红细胞质量的影响

别立莉 王姣杰 单泓 李建斌

(河南省红十字血液中心 河南 郑州 450012)

悬浮红细胞储存时间对制备洗涤红细胞质量的影响

别立莉 王姣杰 单泓 李建斌

(河南省红十字血液中心 河南 郑州 450012)

目的 探讨悬浮红细胞储存时间对制备洗涤红细胞质量的影响，为安全输血提供理论依据。方法 将用于制备洗涤红细胞的悬浮红细胞按保存时间进行分组，0～7 d内为A组，7～14 d为B组，14～21 d为C组，21～28 d为D组，28～35 d为E组，每组按要求随机选择30袋，分别检测每组洗涤红细胞容量、红细胞回收率、白细胞去除率、血浆蛋白清除率、血浆游离血红蛋白含量、上清蛋白质含量、血红蛋白含量、溶血率，同时检测每组血液洗涤前后红细胞变形指数。结果 A组和B组洗涤红细胞的白细胞去除率相对较高，与C、D、E组相比，差异有统计学意义(P<0.05)； A、B组溶血率与C、D、E组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)；随着保存时间的延长，红细胞变形能力逐渐降低，A、B组与C、D、E组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)，制备前的悬浮红细胞与洗涤红细胞D组和E组的红细胞变性能力相比，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 悬浮红细胞保存时间对制备洗涤红细胞产品的质量有较大影响，洗涤红细胞的上清蛋白质含量和溶血率随其制备原料红细胞保存时间的延长而增加，红细胞变形能力随其制备原料红细胞保存时间的延长而降低，建议使用不超过14 d的悬浮红细胞制备洗涤红细胞。

悬浮红细胞；储存时间；洗涤红细胞；质量影响

洗涤红细胞是临床常用的红细胞制品之一，可由保质期内的全血或悬浮红细胞用等渗溶液洗涤3～6次，去除几乎所有血浆成分和部分非红细胞成分制备而成。临床主要用于血浆蛋白过敏、非溶血性发热反应、高钾血症、肾功能不全等患者的输血。当前根据国家标准《全血及成分血质量要求》(GBl8469-2012)，洗涤红细胞质量控制项目分为外观、容量、血红蛋白含量、上清蛋白质含量、溶血率、无菌实验[1]。对制备洗涤红细胞起始血液的要求，国标仅规定使用保存期内的全血或悬浮红细胞制备洗涤红细胞，并未对起始血液的储存时间进行规定。研究证实离体后的红细胞在保存期间随着时间的延长，红细胞会有不同程度的储存损伤，而不同保存时间对洗涤红细胞质量是否有影响，目前报道较少。为此，本研究自2015年6月开始对不同保存期的悬浮红细胞制备的洗涤红细胞进行了质量检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 选取河南省红十字血液中心2015年6月至2016年6月期间库存悬浮红细胞(保存期内，规格2 U)，四联袋生理盐水(厂家：山东威高)，大容量低温离心机，无菌接驳机，热合机，电子秤，血细胞计数仪，血浆游离血红蛋白试剂盒，脑脊液与尿蛋白测定试剂盒(终点法；北京利德曼公司)，BL88-C型激光衍射红细胞变形仪(天津)。

1.2 研究方法 把洗涤红细胞原料血按不同储存期分组，0～7 d内为A组，7～14 d为B组，14～21 d为C组，21～28 d为D组，28～35 d为E组。每组按要求随机选择30袋。每袋悬浮红细胞洗涤前称重并留取小样，同时记录保存时间。洗涤红细胞制备：按照血液中心洗涤红细胞操作规程，将保存期内2 U的悬浮红细胞用无菌接驳机与四联袋生理盐水对接后，向悬浮红细胞内1次加入200 ml生理盐水，边加边轻轻摇动混匀，卡上止流夹，然后平衡，离心。离心条件：1 950 g，5 min，4 ℃。离心后，轻轻取出血袋放置在分浆夹上，打开止流夹，把上清及白膜层转移至废液袋内，卡上止流夹，然后再向血袋内加入生理盐水200 ml，重复上述步骤。依次洗涤3次后，按国标规定2 U红细胞加入100 ml生理盐水，混匀后热合断离并留足样管。每袋洗涤红细胞终产品称重并留取小样。检测方法：电子秤测量洗涤前后红细胞质量；全自动血液分析仪检测每袋悬浮红细胞洗涤前后红细胞、白细胞计数，红细胞压积，血红蛋白含量；血浆游离血红蛋白试剂盒检测游离血红蛋白浓度；上清蛋白质浓度测定参考《全国临床检验操作规程(第3版)》中“脑脊液总蛋白测定”[2]，根据上述有关数据计算溶血率；采用BL88-C 型激光衍射红细胞变形仪，通过激光衍射不同切应力下红细胞变形的衍射环，测出衍射环的横径(a)和纵径(b)，计算出红细胞变形指数DI=b/a，DI越高说明变形能力越强，反之则变形能力弱。

2 结果

2.1 洗涤红细胞回收率、白细胞去除率和血浆蛋白清除率 5组洗涤红细胞回收率及血浆蛋白清除率相似，差异无统计学意义(P>0.05)；A组和B组白细胞去除率相对较高，与C、D、E组相比，差异有统计学意义(P<0.05)；C、D、E组白细胞去除率相似，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 5组洗涤红细胞回收率、白细胞去除率、血浆蛋白清除率比较±s，%)

注：与A组、B组比较，aP<0.05。

2.2 洗涤红细胞的容量、血红蛋白含量、上清蛋白质含量和溶血率 5组洗涤红细胞的容量相似，都在国标范围内，差异无统计学意义(P>0.05)。5组血红蛋白含量都符合国家标准，差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组上清蛋白质含量相对较低，但各组之间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组溶血率相比，差异无统计学意义(P>0.05)；A、B组与其他各组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)；D组和E组相比，差异无统计学意义(P>0.05)；C组与D、E组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 5组洗涤红细胞的容量、血红蛋白含量、上清蛋白质含量和溶血率比较±s)

注：与A组、B组相比，bP<0.05；与C组相比，cP<0.05。

2.3 红细胞变形能力 随着保存时间的延长，悬浮红细胞中的红细胞变形能力逐渐降低，但A、B两组相比，差异无统计学意义(P>0.05)；A、B组与其他各组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)。D组和E组洗涤前后相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 5组洗涤前后红细胞变形指数变化±s)

3 讨论

一般手工洗涤红细胞制品中白细胞去除率>80%、血浆去除率>90%，还可以去除绝大部分红细胞储存期间产生的细胞活性因子和血钾、乳酸等对受血者不利的成分，因此，洗涤红细胞是一种相对更加安全的血液制品。对洗涤红细胞的质量控制，新国标《全血及成分血质量要求》(GBl8469-2012)将旧国标GBl8469-200l中的红细胞回收率、血浆蛋白清除率分别改变为成品洗涤红细胞的血红蛋白含量和上清蛋白质含量，取消了对白细胞清除率的要求，同时增加了溶血率<0.8%的规定。对制备洗涤红细胞起始血液的要求，国标仅规定使用保存期内的全血或悬浮红细胞制备洗涤红细胞，并未对起始血液的储存时间进行规定。研究证实血液在储存过程中由于受多种因素的影响，其形态、功能和生物化学等方面均发生不同程度的变化，且随着储存时间的延长变化更加显著，这些变化统称为红细胞“储存损伤”[3]。储存损伤会影响血液的质量、降低红细胞运输和释放氧的能力、促进潜在有害中间产物的产生，给临床输血带来安全隐患[4]。

本研究为了更加全面的了解悬浮红细胞储存时间对制备洗涤红细胞质量的影响，自2015年6月开始将血液中心制备的洗涤红细胞，按起始血液保存时间的长短进行分组，每组按要求随机选择30袋，分别检测各组洗涤前后全部新国标要求的洗涤红细胞质量控制指标，同时还检测了红细胞回收率、白细胞清除率和红细胞变形能力，结果提示各个组的红细胞回收率及血浆蛋白清除率差异无统计学意义，A组白细胞清除率相对较高，与C、D、E组相比，差异有统计学意义，与B组差异无统计学意义；李美霖等[5]分别用保存7、14、21、28、35 d的悬浮红细胞为原料血制备洗涤红细胞，结果表明随悬浮红细胞保存时间的延长，其制备的洗涤红细胞的溶血率和上清蛋白质含量均呈上升趋势，从而建议使用保存期14 d内的原料血制备洗涤红细胞。研究报道随着保存时间的延长，红细胞的脆性增大，在制备过程中，由于机械碰撞破坏红细胞，易造成溶血[6]。有研究表明保存15 d以后的全血制备的洗涤红细胞形态发生异常变化，出现棘形红细胞，囊泡化后的红细胞易溶血，红细胞寿命缩短，影响洗涤红细胞的质量，认为保存10 d内的全血最佳[7]。本研究提示保存14 d以上的悬浮红细胞制备的洗涤红细胞溶血率明显高于14 d以内的库存血组。洗涤红细胞的制备过程中因为献血者个体差异、洗涤的方法和步骤不同、制备人员的操作差异等均可能对洗涤红细胞的溶血率产生影响。制备洗涤红细胞时，应严格按照操作规程，注重细节，从离心力的选择，到所用生理盐水的温度等，最终各组洗涤红细胞均符合国家标准。

变形性是红细胞的重要特性，其变化直接影响着各种红细胞制品的质量。库存血随保存时间的延长会影响血液的流变特性，特别是对红细胞(RBC)的变形性和聚集性的影响，导致血液质量下降，使回输后效果降低，也可导致输血者出现凝血机制的变化。王竹筠等[8]在研究血液保存时间对库存血流变特性的影响中提示随库存血保存时间的延长，会对全血黏度、血浆黏度、RBC变形性及聚集性产生重要影响，特别是在第3周出现非常显著变化，RBC变形性的降低影响RBC的运氧功能，通过毛细血管时易遭破坏，降低了输血效果，从流变学角度考虑库存血在2周内使用更好。本研究结果提示，A组与B组洗涤红细胞的变形指数明显高于C、D、E组，表明随着原料血储存时间的延长，红细胞变形能力逐渐降低，洗涤红细胞制品有相似变化，与上述报道结论一致；对洗涤前后红细胞变形指数比较，发现D组和E组洗涤前后相比，差异有统计学意义(P<0.05)，这可能与制备洗涤红细胞的起始血液储存时间较长，在制备洗涤红细胞过程中红细胞更易受损伤有关。

总之，悬浮红细胞保存时间对制备洗涤红细胞产品的质量有较大影响，洗涤红细胞的上清蛋白质含量和溶血率随其制备原料红细胞保存时间的延长而增加，红细胞变形能力随其制备原料红细胞保存时间的延长而降低，建议使用不超过14 d的悬浮红细胞制备洗涤红细胞，以免影响临床输血效果。

[1] 中华人民共和国国家标准.GB18469-2012 全血及成分血质量要求[M].北京:中国标准出版社,2012.

[2] 中华人民共和国卫生部主编.全国临床检验操作规程[M].第1版.南京:东南大学出版社,2006:342-344．

[3] Hess J R.Red cell changes during storage[J]. Transfus Apher Sci,2010,43(1):51-59.

[4] Zubair A C.Clinical impact of blood storge lesions[J]. An J Hematol,2010,85(2):117-122.

[5] 李美霖,段锦,麻静敏,等.不同储存时间血液制备洗涤红细胞效果分析[J].河北医药,2015, 37(18):2752-2756.

[6] 胡文娟,曾四海,苏红,等.提高联袋封闭式洗涤红细胞制品质量的体会[J].当代医学,2012,18(5):146.

[7] 王爱梅,梁文华,王群,等.不同保存期全血制备洗涤红细胞的超微结构变化[J].临床输血与检验,2004,6(3):173-176．

[8] 王竹筠,滕本秀.血液保存时间对库存血流变特性的影响[J].中国血液流变学杂志,1999,9(2):3-5.

The quality effect of suspended red blood cells storage time on the preparation of washed red blood cells

Bie Lili，Wang Jiaojie，Shan Hong，Li Jianbin

(HenanProvincialRedCrossBloodCenter，Zhengzhou450012，China)

Objective To explore the quality effect of suspended red blood cells (SRBCs) storage time on the preparation of washed red blood cells (WRBCs), and provide theoretical basis for safe blood transfusion.Methods According to the storage time, SRBCs were divided into 5 groups: A(0～7 d), B(7～14 d), C(14～21 d), D(21～28 d), E(28～35 d). Then, 30 bags of SRBCs were randomly selected from each group and prepared into WRBCs. Finally, red blood cells volume, red blood cell recovery rate, white blood cell removal rate, plasma protein clearance rate, plasma free hemoglobin, supernatant protein, hemoglobin, hemolytic rate and erythrocyte deformation index were measured.Results White blood cell removal rates of group A and B were significantly higher than that of C, D and E(P<0.05). The hemolytic rates were significantly different between group A,B and C, D, E(P<0.05). With the storage time, the red blood cell deformation ability gradually decreased, and there was statistically difference between group A, B and C, D, E(P<0.05). Erythrocyte deformation index SRBCs and WRBCs of group D, E was significantly different(P<0.05).Conclusion SRBCs storage time has a great impact on the quality of WRBCs. With the prolonging of SRBCs storage time, supernatant protein and hemolytic rate are increased and erythrocyte deformation index is reduced, so it suggests that the SRBCs are no more than 14 days.

suspended red blood cells；storage time；washed red blood cells；quality effect

R 457.1

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.10.003

2017-03-13)