柿种质资源对柿炭疽菌的抗性评价

王洁++高瑞++余贤美++艾呈祥

摘要：柿炭疽病是柿树上的毁灭性灾害，本试验通过连续3年的自然发病调查和田间人工接种鉴定研究了14份柿种质资源和1份砧木对柿炭疽菌Colletotrichum horii的抗性。结果显示，不同种质资源的病情指数存在差异，田间自然发病病情指数在9.0～65.0之间，田间人工接种后病情指数在8.3～72.3之间。其中，野柿和浦城方柿病情指数低于10.0，发病较轻，属于抗病品种；涩柿八月黄、鲁柿5号和砧木君迁子感病指数10.0～30.0，为中等抗病水平；次郎、早秋和小萼子在田间自然发病时为中等抗病水平，但在田间人工接种时属感病品种；其余品种均为感病或高感品种。本研究可为柿抗炭疽病育种提供理论依据和育种材料。

关键词：柿；种质资源；柿炭疽菌；抗性评价

中圖分类号：S665.203.4文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）06-0112-04

AbstractPersimmon （Diospyros kaki Thunb.） anthracnose disease is one of the most devastating diseases. The resistance of 14 persimmon germplasms and 1 rootstock were evaluated by natural infection ivestigation for 3 years and artificial inoculation identification in 2016 in the field. The results showed that there was difference in the disease indexes of different germplasms. The disease index in natural infection investigation and artificial inoculation identification was 9.0～65.0 and 8.3～72.3， respectively. The disease indexes of Silvestris and Puchengfangshi were below 10.0， so they exhibited resistant to C. horii. Bayuehuang， Lushi 5 and Dateplum were medium resistant to C. horii with disease indexes between 10.0 and 30.0. Jiro， Soshu and Xiaoezi were medium resistant to C. horii in natural infection investigation， but exhibited susceptible in natural infection investigation. The other 7 samples of persimmon germplasms exhibited susceptible or high susceptible to C. horii. The results could provide theoretical foundation and new resources for persimmon breeding resistant to C. horii.

KeywordsPersimmon； Germplasm； Colletotrichum horii； Resistance evaluation

柿炭疽病是目前柿树生产上最严重的病害，主要危害柿果实和嫩枝，造成果实腐烂，枝条枯死，甚至导致树体整株死亡[1-4]。目前，国内的主栽品种均不抗柿炭疽病，该病的防治主要采取加强田间管理和化学防治的方法[5]。田间管理需耗费大量的人力和物力，而化学防治极易产生病原菌抗药性、农药残留等潜在威胁。因此，种植抗病品种是控制柿树炭疽病最为经济、有效的防治措施。

我国是世界上拥有柿树（Diospyros kaki Thunb.）品种资源最丰富的国家[6]。迄今，柿抗逆性评价工作仅在抗寒性和抗角斑病方面获得了一些研究进展[7-9]，均表明不同柿种质材料间抗性存在明显差异。因此，本课题在柿炭疽病菌种群鉴定、致病力评价研究和柿种质资源收集的基础上[2，3，10]，采用自然发病调查和人工接种鉴定两种方法研究了部分柿种质资源对柿炭疽菌Colletotrichum horii的抗性，旨在明确不同柿（品）种间的抗性差异，为抗性利用、培育抗病柿新品种等提供依据。

1材料与方法

1.1试验时间、地点

田间自然发病调查于2014—2016年7—9月在临沂、济南、潍坊、济宁、泰安等山东省柿主栽区进行。田间接种鉴定试验在山东省果树研究所万吉山基地进行，接种时间为2016年6月1日，接种后15 d进行调查。

1.2试验材料

1.2.1供试材料本研究供试种质资源及其类型详见表2，包括12份涩柿资源，分别为鲁柿5号、扁柿、八月黄、车头柿、牛心柿、婆婆柿、小萼子、黑柿、野柿、浦城方柿、富平尖柿和广丰方柿；1份砧木资源，为君迁子；2份完全甜柿资源，为次郎和早秋。

1.2.2供试菌株用于接种鉴定的供试菌株为致病力强且分布广泛的C. horii代表菌株SD010。

1.3试验方法

1.3.1田间调查方法田间调查时选取有代表性的植株2株，每株树按东西南北中5个方位均匀选取10枝当年抽生嫩梢进行观测。目测法观察每个新枝的发病情况，确定病情级别。

1.3.2田间接种方法利用分生孢子悬浮液-伤口接种的方法接种柿新发枝条及叶柄。分生孢子悬浮液的配备：将供试菌株接种于PA平板上（不含葡萄糖），9 d后用无菌水刮洗下分生孢子，配置成孢子悬浮液，浓度约为1×106个孢子/mL。每个柿树品种选2棵树，每棵树接种10个当年生新梢枝条，另取每棵树的3个枝条接种蒸馏水作为对照，供试枝条接种前均用大头针按压形成微伤口。设3个重复。接种枝条用塑料袋罩好封口保湿，15 d后观察每个新枝的发病情况，确定病情级别。endprint

1.3.3抗性评价抗炭疽病病情分为5级[11]：0级，无病斑；1级，病斑总直径占枝条总长度的比率≤20%；2级，20%<病斑总直径占枝条总长度的比率≤40%；3级，40%<病斑总直径占枝条总长度的比率≤60%；4级，60%<病斑总直径占枝条总长度的比率≤80%；5级，80%<病斑总直径占枝条总长度的比率。

将上述调查结果按以下公式换算成病情指数（DI）：

病情指数（DI）=Σ（发病级别×该病级发病枝数）/（5×调查总枝数） ×100。

参考杨勇等[11]制定的行业标准《农作物优异种质资源评价规范柿》， 利用病情指数确定柿种质资源对炭疽病的抗性级别（表1）。根据重复抗性鉴定结果对材料进行抗病性评价，抗性以记载的最高病情级别为准。

2结果与分析

2.1田间自然发病抗性鉴定

由表2可知，供试的12份涩柿资源中，抗性资源只有野柿和浦城方柿，病情指数为9.0和 9.3，抗性级别为3级；中等抗性资源有3份，分别为小萼子、八月黄和鲁柿5号，病情指数依次为28.3、26.7和22.0，抗性级别为5级；感病资源5份，分别为广丰方柿、扁柿、黑柿、车头柿和牛心柿，病情指数为33.0～48.7；高感资源2份，为婆婆柿和富平尖柿，病情指数为61.3和65.0。2份完全甜柿资源次郎和早秋均为中等抗病，病情指数分别为29.0和21.0。砧木君迁子为中等抗性资源。

2.2田间接种抗性鉴定

田间接种调查发现，15份柿种质资源均于接种后5～7 d开始发病，接种后15 d病斑占枝条总面积的比率最大可达到90%，最小仅为5%，病斑占枝条面积超过80%后病菌开始蔓延到叶片，严重的引起叶片脱落，部分柿种质资源的症状见图1。

田间接种后15 d调查结果（表2）显示，抗性资源有2份，分别为野柿和浦城方柿，病情指数为10.0和8.3，抗性级别为3级；中等抗性资源有3份，包括2份涩柿资源八月黄和鲁柿5号及砧木品种君迁子，病情指数分别为26.3、23.3和20.0。其余10份柿种质均感病，其中高感资源5份，分别为富平尖柿、扁柿、牛心柿、婆婆柿和黑柿，病情指数均﹥50；感病资源5份，包括2份完全甜柿和3份涩柿。

3讨论与结论

本课题组2014年调查结果发现，不同地区因气候条件及栽植柿品种不同，炭疽病病株率存在明显差异，山东青州和临朐病枝率高达60%，病果率达到30%，广西病枝率高达80%，病果率高达60%（待发表），造成的直接经济损失达数千万元，严重制约了我国柿树产业的可持续发展，所以栽植抗病品种是果树病害防治的重要途径。

传统的果树种质资源抗性评价多采用田间调查的方法[12]，但是影响果树病害发生、发展的因素很多，田间调查时易受侵染时期、气候条件、管理水平等的影响，需要多年、多地区的数据支持，费时、费力、成本较高。越来越多的研究者采用室内离体枝条接种的方法来评价品种间抗性[13]，这种方法虽然不受外界环境的影响，可以保证接种条件一致，但是不能反映自然條件下各品种的抗性反应。而田间接种更接近果树自然发病条件，因此，田间自然发病抗性调查结合田间接种进行抗性评价是比较合理的抗性评价方法。

本试验采用这两种方法评价柿种质资源对炭疽菌的抗性，结果表明， 15份不同柿种质资源在田间自然状态下和人工接种后均能感染柿炭疽菌C. horii，无免疫品种；不同品种间在感病指数上存在差异，田间自然发病病情指数在9.0～65.0之间，田间接种后病情指数在8.3～72.3之间。从病情指数来分析，田间自然发病和田间人工接种时，野柿和浦城方柿病情指数均低于10.0，发病较轻，属于抗病品种；涩柿八月黄、鲁柿5号和砧木君迁子病情指数低于30.0，为中抗水平；次郎、早秋和小萼子在田间自然发病调查时为中抗水平，在田间人工接种时属感病品种；其余品种均为感病或高感品种。本研究结果为柿抗性品种的合理推广种植、炭疽病的防控提供科学依据。

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