HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA相关性分析

吴普昭

(广州市番禺区中心医院检验科，广东广州511400)

HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA相关性分析

吴普昭

(广州市番禺区中心医院检验科，广东广州511400)

目的分析HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA的相关性，为安全母乳喂养提供科学依据。方法收集我院2013年至2015年共68例HBV携带产妇的血清及乳汁，采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法分别检测其HBV-DNA载量,并按产妇血清HBV载量分为四组。比较产妇血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA阳性率以及各组间乳汁的阳性率，分析血清HBV-DNA载量与乳汁HBV-DNA载量的相关性。结果68例HBV携带产妇血清HBV-DNA阳性率为63.2%(43/68)，乳汁HBV-DNA阳性率为29.4%(20/68)，两者比较差异有统计学意义(χ2=14.309，P＜0.05)；HBV携带产妇血清HBV-DNA载量在＜500IU/ml、500～104IU/ml、105～106IU/ml、107～108IU/ml区间时，对应乳汁中HBV-DNA检出率分别为0%（0/25）、11.1%(2/18)、63. 6%(7/11)、78.6%(11/14)，各组间阳性率比较差异具有统计学意义(χ2=40.756，P＜0.05)；当HBV携带产妇血清和乳汁中HBVDNA同时阳性时,乳汁中HBV-DNA的载量随血清HBV-DNA载量增高而增高，二者中度相关(r=0.574)。结论HBV携带产妇随着血清HBV-DNA载量的升高，产妇乳汁中HBV-DNA检出率以及HBV-DNA载量有增高趋势，HBV携带产妇在进行母乳喂养时应结合血清HBV-DNA和乳汁HBV-DNA来正确指导母乳喂养。

产妇；血清；乳汁；HBV-DNA

我国属乙肝感染的高流行区，HBV的母婴传播是其主要传播方式之一[1]。分娩后HBV携带产妇母乳喂养，在HBV母婴传播中的影响越来越受到人们的关注。本文探讨HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA载量的相关性[2]，为慢性乙型肝炎产妇母乳喂养提供参考依据，正确指导母乳喂养，从而降低新生儿乙型肝炎的感染率[3]。

1 对象与方法

1.1 研究对象2013年1月至2015年12月在我院住院和门诊就诊的乙肝表面抗原阳性的产妇，共68例。

1.2 标本采集

1.2.1 血清标本采集空腹静脉采血3ml，3000r/ min离心5min；吸取上层血清待测。

1.2.2 乳汁标本采集用无菌生理盐水对产妇乳头消毒后，采集乳汁3ml，3000r/min离心15min，取中层乳清待测。

1.3 仪器和试剂ABI 7500 Real Time PCR system实时荧光PCR检测仪。试剂购于中山大学达安基因股份有限公司，乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒。

1.4 HBV-DNA核酸提取与PCR扩增⑴HBVDNA提取：按照试剂盒说明书操作步骤，取200μl样品，加入450μl DNA提取液Ⅰ和4μl内标液，用振荡器剧烈振荡混匀15s，瞬时离心数秒，100℃恒温处理10±1min，12000g离心5min备用。⑵PCR扩增：按比例（HBV PCR反应液27μl/人份+Taq酶3μl/人份）取相应量的PCR反应液及Taq酶，充分混匀后按30μl/管分装至各仪器适用的PCR反应空管中备用。⑶扩增程序：93℃2min；93℃45s→55℃60s 10个循环；93℃30s→55℃45s 30个循环；阳性判断值为≥500IU/ml。

1.5 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计分析。样本阳性率比较采用χ2检验，相关程度用直线相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV携带产妇血清HBV-DNA与乳汁HBVDNA检测阳性率相关性分析实验结果显示，68例HBV携带产妇血清HBV-DNA检测阳性例数为43例，阳性率63.2%(43/68)；乳汁HBV-DNA检测阳性例数为20例，阳性率29.4%(20/68)，两者比较差异有统计学意义(χ2=14.309，P＜0.05)，见表1。再按产妇血清HBV载量分为HBV-DNA载量＜500IU/ml组、500～104IU/ml组、105～106IU/ml组、107～108IU/ml组，比较各组间HBV-DNA阳性率。实验结果为：HBV携带产妇血清HBV-DNA载量＜500IU/ml时，其对应的乳汁中均未检出HBV-DNA，检出率为0%(0/25)；在500～104IU/ml区间时，检出率为11.1%(2/18)；在105～106IU/m区间时，检出率为63.6%(7/11)；在107～108IU/ml区间时，检出率为78.6%(11/14)；各组间阳性率比较差异具有统计学意义(χ2=40.756，P＜0.05)，见表2。

表1 HBV携带产妇血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA检测阳性率比较

表2 HBV携带产妇血清HBV-DNA载量与乳汁HBV-DNA检出率的关系

2.2 HBV携带产妇血清HBV-DNA载量与乳汁HBV-DNA载量的相关性分析当HBV携带产妇血清和乳汁HBV-DNA同时阳性时，运用直线相关分析方法统计其载量，结果显示，随着产妇血清HBV-DNA含量升高，对应乳汁中含量也相应增高，两者间呈中度相关（r=0.574），如图1。

图1 HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA载量的相关性

3 讨论

HBV感染呈世界性流行，但不同地区HBV感染的流行强度差异很大。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染HBV，其中2.4亿人为慢性HBV感染者[4]，每年约65万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。我国是乙型肝炎高流行区域，一般人群的感染率为9.09%。HBV的母婴垂直传播有妊娠时经胎盘宫内感染；分娩时胎儿经过产道吞进羊水、血、阴道分泌物引起感染；密切接触或母乳喂养时经过乳汁进行传播等方式[5]。中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》在关于母婴垂直传播的预防中指出，新生儿在出生12h内注射HBIG和乙型肝炎疫苗，可接受HBsAg阳性乳汁[6]，相关研究表明：婴儿出生后注射乙肝疫苗可以接受HBV携带母亲的母乳喂养[7]。但也有研究表明HBV-DNA阳性乳汁可增加婴儿感染HBV的危险[8]，孕妇血清高浓度HBV水平是母婴垂直传播的危险因素[9]。因此目前对于HBV携带母亲是否可以进行母乳喂养仍存争议。

本文通过研究HBV携带产妇血清与乳汁中HBV-DNA载量相关性，从病毒载量方面探讨HBV携带产妇母乳的安全性，为这一特殊人群的母乳喂养提供参考依据。结果表明：HBV携带产妇血清HBV-DNA阳性率为63.2%，乳汁阳性率为29.4%，血清HBV阳性率高于乳汁HBV阳性率。HBV携带产妇血清HBV-DNA载量＜500IU/ml时，其对应的乳汁中均未检出HBV-DNA，血清HBVDNA载量在500～104IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV-DNA检出率为11.1%；血清HBV-DNA载量在105～106IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV-DNA检出率为63.6%；血清HBV-DNA载量在107～108IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV-DNA检出率为78.6%，表明HBV携带产妇乳汁中HBV-DNA阳性率随血清HBV-DNA载量增高而增高。当HBV携带产妇血清和乳汁HBV-DNA载量同时阳性时，随着血清HBV-DNA含量升高，乳汁中含量也相应增高，两者间呈中度相关，与相关文献报道大致一致[10]。

在国家大力提倡母乳喂养的今天，HBV携带产妇这一特殊人群的母乳喂养如何合适地执行，关系到HBV母婴传播控制成败的重要环节[11]。在宣传母乳喂养和执行的同时，要严格遵照医学原则，对可能发生HBV传播的乳源进行相应的检查和分析，为携带和感染HBV的产妇提供有效的医学指导，在不能确定乳汁是否安全的情况下，对HBV携带产妇，应结合血清HBV-DNA和乳汁HBV-DNA来正确指导母乳喂养，从而降低新生儿乙型肝炎的感染率。

[1]蔡贤莉.检测乙肝孕妇血清HBV DNA含量与胎儿宫内感染的关系[J].实验与检验医学，2008，26(2)：219-220.

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R512.6+3，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0406-03

2016-10-20；

2017-03-15)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.037

广东省广州市番禺区科技计划项目（编号：2015-Z03-067）