构建限量检查医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱的薄层色谱法研究

彭波+刘春龙

摘 要：目的：构建限量检查医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱的薄层色谱法（TLC）。方法：采用TLC方法对医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱水平进行测定分析，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）作为展开剂，经耐用性分析，探讨该方法的应用效果。结果：（1）供试品色谱与对照品色谱相应的部位上面未发现有斑点存在，阴性未存在干扰；（2）采用甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）作为展开剂时，供试品之间较易分离开来，乌头碱斑点十分清楚、规整，且与其他斑点之间很容易分离，重复效果理想；（3）供试品色谱之中，在与对照品色谱相对应的部位所产生的斑点强度以及规格均小于对照品斑点，或者无斑点产生。结论：薄层色谱法应用于医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱含量的测定之中，操作便捷，重复性佳，应加以推广及应用。

关键词：乌头碱；薄层色谱法；姜红活血止痛酊

乌头，属毛莨科，其有效成分为双酯型的生物碱，其中有效成分为乌头碱。臨床药理学研究表明：乌头碱具有镇痛、麻醉以及降压等方面的重要功效，但是其毒性非常强，其致死量仅为3-5mg，且致死时间非常短（接触到死亡仅需8min-4h）。由于乌头碱的中毒剂量同治疗剂量相当，由于各方面的因素的影响可能会导致患者出现中毒而死的情况。乌头碱很容易发生水解反应，对乌头碱中毒的医学鉴定造成了极大的困难。对此，应该强化对医学制剂中乌头碱的含量进行定量测定分析，本研究主要采用薄层色谱法对医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱含量进行测定分析，现报道如下：

1 仪器及试剂

1.1 仪器

层析缸、微量点样器、玻璃喷雾器、薄层制版器以及电子天平等仪器。

1.2 试剂

乌头碱对照品（鼎瑞化工上海有限公司生产，批号为20160112号）、姜红活血止痛酊（医院自主研制，批号为20161122号）、姜红活血止痛酊阴性样品（医院自主研制，批号为20161203号）、乙醚（安徽金邦医药化工有限公司生产，批号927820-24-4）、氯仿（上海市长达化工贸易有限公司生产，批号20050802）、硅胶G（南京奥佳化工有限公司生产，批号20121204）、羧甲基纤维素钠（上海万照精细化工有限公司生产，批号20101012）。上述试剂均属于分析纯，水属于超纯水。

2 方法及结果

2.1 溶液的制取

2.1.1 供试品溶液

首先取2.0mL的溶液样品，将其置于锥形瓶之中，向其中加入5.0mL的浓氨液以及80mL的乙醚溶液，将其进行振荡、摇晃1h，静置24h，分取乙醚层提取液，将其蒸干，然后再向其中加入污水乙醇溶液稀释至1mL，作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液

取一定量的乌头碱对照品溶液，精确称量，向其中加入无水乙醇溶液制成每1mL中含有2mg乌头碱的对照品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液

根据姜红活血止痛酊的制作工艺制备姜红活血止痛酊的阴性对照品，以2.1.1中的方法制取阴性对照溶液。

2.2 限度测定

根据薄层色谱法，即TLC法（《中国药典》（2010版））中的方法进行试验，吸取供试品溶液、对照品溶液以及阴性对照溶液各为5.0μL，将其分别点在同一硅胶G薄层板之上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）作为展开剂，将其放置在氨蒸汽饱和的展开缸之中进行展开处理，将其取出，晾干，按照顺序喷以稀碘化铋钾试剂以及亚硝酸钠乙醇试剂，将其置于可见光条件下进行检视。结果显示：在供试品色谱之中，与对照品色谱相对应的部位出现的斑点大小于强度均明显比对照品的斑点面积要小，或者不存在斑点。将温度和相对湿度分别设置为18℃以及68%，在上述3批供试品色谱之中，在与对照品色谱相应的部位上面未发现有斑点存在，阴性未存在干扰。上述结果提示本方法的专属较为理想。

2.3 耐用性测定

2.3.1 设定取样量

取6mL的样品，将乌头碱限量设置为2.0mg，供试品点养量为5μL，与5μL的乌头碱对照品溶液相当。结果表明：供试品色谱之中，在与对照品色谱相对应的部位所产生的斑点强度以及规格均小于对照品斑点，或者无斑点产生。

2.3.2 选取展开剂

对两组展开剂进行分组考察：（1）展开剂1：环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者体积比分别为5：2：1）；（2）展开剂2：甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）。按照2.2节中的相关方法进行操作处理，结果显示：温度及相对湿度分别设置为18℃及68%时，采用展开剂1，供试品其他成分斑点之间的分离度非常小，接近于乌头碱的斑点，分离起来难度较大。采用展开剂2时，供试品之间较易分离开来，乌头碱斑点十分清楚、规整，且与其他斑点之间很容易分离，重复效果理想，因此选择展开剂2，即甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）。其中：A表示环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者体积比分别为5：2：1）；B表示甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（体积比为20：18：3：6：1）。1：对照品；2、3、4：不同生产批号的供试品。

3 讨论

医院制剂姜红活血止痛酊的主要化学成分为乌头碱，它不仅属于一种乌头类植物的生理活性物质，而且它也极易引起患者中毒。由于其毒性巨大，炮制不彻底、剂量过大以及煎煮方法不当等方面的因素，常常会导致患者死亡的产生。医院制剂姜红活血止痛酊含有大量的乌头碱，为了确保该制剂安全有效，应注重对乌头碱的含量进行准确地定量检测。

根据《中国药典》中的相关规定内容，姜红活血止痛酊的常用剂量为1.5-3.0g，含酯型生物碱以乌头碱作为当量进行计算，不能超过0.15%。如果实验设定对照品的限量以止痛酊常用剂量的1.5g来计算，那么相对应的乌头碱对照品限量则为2.25mg，本研究中乌头碱的实际设计量为2.0mg。所以，确保制剂安全的一个重要条件就是：供试品溶液的斑点强度及大小均小于相应剂量的乌头碱对照品溶液的斑点强度及大小，或者斑点未出现，此时乌头碱的含量则在安全范围之内，可以放心用药。本研究中设定点样量大小为5μL，与5μL的乌头碱对照品溶液相当。本研究中所使用的方法参考了《中国药典》（2010年版）中制定的相关操作守则及方法。实验中所运用的乌头碱溶液，则采用无水乙醇溶液对其进行稀释，应注意新配新用，或者溶液配制好之后，将其置于温度为2-8℃的冰箱中进行保存，第一时间使用。

综上所述可知，薄层色谱法应用于医院制剂姜红活血止痛酊中乌头碱含量的测定之中，操作便捷，重复性佳，应加以推广及应用。

参考文献

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