口蹄疫三价苗对荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响

赵赫，赵庆彬，王穆峰，陈立冬，杨志勇

(1.天津市奶牛发展中心，天津 300381；2.赤峰市元宝山区兽医局，赤峰 024000)

口蹄疫三价苗对荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响

赵赫1，赵庆彬1，王穆峰1，陈立冬2，杨志勇1

(1.天津市奶牛发展中心，天津 300381；2.赤峰市元宝山区兽医局，赤峰 024000)

为研究口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响，本研究对 2～11岁荷斯坦种公牛肌肉注射口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗后，统计分析注射前半个月及注射后第1、2、3、4周的荷斯坦种公牛射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力、冻精精子畸形率和冻精产量的差异性。结果显示：（1）2～11岁种公牛各时间段的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力、冻精产量无显著差异（P＞0．05）；而注射后第1周的冻精产量、注射后第2周的畸形率显著高于注射前半个月（P＜0．05），其他各时间段之间无显著差异（P＞0．05）。（2）2岁种公牛，注射后第2周的畸形率显著高于注射前半个月（P＜0．05），其他各时间段之间无显著差异（P＞0．05）；（3）3～5岁种公牛注射后第2周的畸形率显著高于注射后第1周（P＜0．05），其他各时间段差异不显著（P＞0．05）。（4）7～11岁种公牛，注射后第1周的畸形率和冻精产量显著高于注射前半个月（P＜0．05），其他各时间段差异不显著（P＞0．05）。可以得出，口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力无显著影响，对冻精产量无不利影响，并导致畸形率升高，但对不同年龄段种公牛影响不完全相同。

口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗；种公牛；精液

口蹄疫是发生在偶蹄动物中的一种急性、烈性、高度接触性传染病，发病率高，可引起大范围的易感动物感染发病，造成严重的经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疫病中第一位烈性传染病，我国农业部也将其列为A类传染病之首[1]。根据我国《口蹄疫防治技术规范》的相关规定[2]，国家对口蹄疫实行强制免疫，免疫方法为口蹄疫疫苗注射。口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗是近几年我国自主研制的新型口蹄疫疫苗，达到了口蹄疫防疫中的“一针防三病”的效果，国内多个种公牛站采用口蹄疫三价苗来防控口蹄疫疫病。本试验对口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗（以下称口蹄疫三价苗）注射前后，2～11岁荷斯坦种公牛的射精量、精液品质及冻精产量进行了对比分析，评估了口蹄疫三价苗注射对种公牛冷冻精液生产的影响。

1 材料与方法

1．1 试验动物

25头体格健壮、性欲旺盛、正常进行精液生产且年龄为2～11岁的荷斯坦种公牛，统一进行饲养、采精，自由饮水、运动。饲养管理参照《种公牛饲养管理技术规程》（NY/T1446-2007）[3]进行。

表1 口蹄疫三价苗对2～11岁种公牛冷冻精液生产的影响

1．2 主要仪器

数显水浴锅（TL402～420B，江苏姜堰市医疗器械公司），彩色摄像机（TK～C1481BEC，JVC JAPAN），镜检加热器（NFV52，富士平工业株式会社），相差显微镜（BX41，OLYMPUS JAPAN），密度仪（ACCUCELL，IMV FRANCE）分析天平（ER～108A，AND JAPAN），精液二次稀释装置（FA～435，FHK JAPAN），全自动细管精液冷冻仪（EUROTHERM 2704，IMV FRANCE），超净工作台（DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京东联哈尔仪器制造有限公司），高压灭菌器（SS～325，TOMY JAPAN），恒温培养箱（MIR～260，三洋电机株式会社）。

1．3 疫苗免疫

在秋季，采用口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型、A型三价灭活疫苗（金宇保灵生物药品有限公司生产），在种公牛颈部进行肌肉注射，剂量为1mL/头。

1．4 精液采集、质量检测和冷冻精液制作

口蹄疫三价苗注射前后，严格按照《牛冷冻精液生产技术规范》（NY/T1234-2006）[4]对种公牛进行精液采集，并对精液进行质量检测、稀释、冷冻制作和储存。采精频率为2次/周。

由采精人员进行精液采集，室内技术人员利用相差显微镜及相应的显像系统进行鲜精活力检查，并通过密度仪来检测鲜精密度，再利用分析天平称量精液采集管和精液的重量来计算射精量。将鲜精活力达到国家标准的精液用种公牛站配置的专用稀释液进行稀释，放置4℃冷柜中平衡，并通过精液二次稀释装置对其进行二次稀释。然后进行分装、打印、冷冻，并将冻精产品暂时储存起来。待经过型式检验合格后，方可储存于相应的液氮罐中，并放置于冷冻精液储存库中长期贮存。

1．5 冻精产品型式检验

严格按照中华人民共和国国家标准《牛冷冻精液》（GB 4143-2008）[5]进行型式检验，包括鲜精活力、冻精活力、冻精精子畸形率（简称“畸形率”，下同）等。

1．6 统计分析采用统计软件SPSS 19.0 One Way ANOVA进行方差分析，并进行Duncan检验 ，各时间段数据均以“Mean±SD”表示。

2 结果与分析

2．1 口蹄疫三价苗对2～11岁种公牛冷冻精液生产的影响从表1可以看出，注射前半个月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力差异均不显著（P＞0.05）；而注射后第1周的冻精产量（简称“产量”，下同）、注射后第2周的畸形率均显著高于注射前半个月（P＜0.05），其他各时间段差异不显著（P＞0.05）。

2．2 口蹄疫三价苗对2岁种公牛冷冻精液生产的影响

从表2可以看出，注射前半个月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力和产量差异不显著（P＞0.05），而注射后第2周的畸形率显著高于注射前半个月（P＜0.05），其他各时间段差异不显著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫三价苗对2岁种公牛冷冻精液生产的影响

表3 口蹄疫三价苗对3～5岁种公牛冷冻精液生产的影响

2．3 口蹄疫三价苗对3～5岁种公牛冷冻精液生产的影响

从表3可以看出，注射前半个月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力和产量差异不显著（P＞0.05）。而注射后第2周的畸形率显著高于其注射后第1周（P＜0.05），其他各时间段差异不显著（P＞0.05）。

2．4 口蹄疫三价苗对7～11岁种公牛冷冻精液生产的影响

从表4可以看出，注射前半个月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鲜精活力、鲜精密度和冻精活力差异不显著（P＞0.05）。而注射后第1周的畸形率和产量显著高于注射前半个月（P＜0.05），其他各时间段差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

口蹄疫三价灭活疫苗一免多效，缩短了防疫周期，使防疫工作省工省时，减少了对牲畜的免疫刺激次数，其免疫效果良好、安全性高、防疫范围更广，自面世以来，深受市场欢迎，并已逐渐成为口蹄疫疫苗的主要选择对象。口蹄疫疫苗注射是种公牛站春秋两季防疫的工作重点，而种公牛在24～36月龄达到体成熟，3～6岁时是利用的最佳年龄，种公牛以后随着年龄的增长，公牛的性欲与精液品质开始下降[6]。所以，本试验统计分析了口蹄疫三价苗对2～11岁荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响，并分析了其对2岁、3～5岁和7～11岁三个年龄段种公牛影响的差异性。

从统计结果来看，口蹄疫三价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛的射精量、鲜精活力、鲜精密度和冻精活力无显著影响；而相对于注射前半个月，注射后第1周的产量、注射后第2周的畸形率均升高。这表明，口蹄疫三价苗注射后未对精液产量产生不利影响，但却导致了注射后第2周的畸形率升高，影响时间为1周，而其他方面无显著影响。但对不同年龄段的公牛影响又不尽相同。相同之处是对射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力无显著影响。不同之处是，2岁种公牛注射后第2周的畸形率与注射前半个月相比，显著升高；3～5岁种公牛注射后第2周的畸形率与注射后第1周相比，显著升高； 而7～9岁种公牛注射后第1周的畸形率和产量与

表4 口蹄疫三价苗对7～11岁种公牛冷冻精液生产的影响

4 结论

口蹄疫三价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力无显著影响，对冻精产量无不利影响，并能导致畸形率升高，但对不同年龄段种公牛影响不完全相同。其中，冻精产量升高应该是种公牛冷冻精液生产受夏季高温不利影响逐渐消失、产量不断恢复的结果；而口蹄疫三价苗注射前后畸形率的变化，可能与疫苗的注射应激及疫苗中氢氧化铝或双相矿物油等佐剂对动物细胞具有毒性作用有关[7]，也可能与口蹄疫免疫反应有关。对不同年龄段种公牛产生不同的影响，这可能与不同生理阶段的生殖机能特点有关，其影响机理有待进一步研究。

[1] 陈征,郑明．口蹄疫疫苗的正确使用[J]．中国兽药杂志,2009,43(9): 55-56．

[2] 《口蹄疫防治技术规范》农医发[2007]12号．

[3] 《种公牛饲养管理技术规程》（NY/T1446-2007）．

[4] 《牛冷冻精液生产技术规范》（NY/T1234-2006）．

[5] 《牛冷冻精液》（GB 4143-2008）．

[6] 翁春玲,佟国军,隋明． 影响种公牛精液品质的因素[J]．黑龙江动物繁殖,2009,17(2):42-44．

[7] 蒋文俊,李华春,李乐,等．口蹄疫疫苗研究进展[J]．畜牧与兽医,2004,36(5):42-43．

The Effect of Foot-and-mouth Disease Trivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

ZHAO He1, ZHAO Qing-bin1, WANG Mu-feng1, CHEN Li-dong2, YANG Zhi-yong1
(1.Tianjin Diary Cattle Development Center, Tianjin 300381; 2.The Veterinary Bureau of Yuanbaoshan District, Chifeng 024000)

The objective of the study was to explore the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bulls. After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A)Trivalent Vaccine into Holstein bull of 2～11 years old, the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility and theconcentration of fresh semen, the sperm motility, the abnormal sperm percentage and the production of frozen semen were analyzed statistically, when two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection. Results showed that: (1)In Holstein bulls of 2～11years old, it had no significant difference in each period that the volume per ejaculate, the concentration and the sperm motility of fresh semen, the sperm motility of frozen semen (P＞0.05); the production of the first week and the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05).(2)In bulls of 2 years old, the abnormal sperm percentage of the second week was higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in each period(P＞0.05).(3)In bulls of 3～5 years old, the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of the first week after the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). (4) In bulls of 7～11 years old, the production and the abnormal sperm percentage of the first week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). The conclusion could be drawn that there was no statistical differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the concentration of fresh semen, the sperm motility of frozen semen of Holstein bull kept for covering that the injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, and had no adverse effect on the production, and induced the higher of the abnormal sperm percentage of frozen semen, and these statistical differences in different stages of the age were different.

Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, Inactivated; Bull kept for covering; Semen

S858.23

A

1004-4264（2017）05-0024-05

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.05.007

第二届“牛人”摄影大赛作品 《收获》——王学凯 中国农业大学动物科技学院

2016-09-27

赵赫（1981-），女，天津人，硕士，主要从事奶牛生产性能测定工作。