HPLC法测定复方绞股蓝袋泡茶中橙黄决明素的含量

鲁毅，李燕思，王亚威，段靖，许桂丽

HPLC法测定复方绞股蓝袋泡茶中橙黄决明素的含量

鲁毅，李燕思，王亚威，段靖，许桂丽

目的建立测定复方绞股蓝袋泡茶中橙黄决明素含量的HPLC方法。方法色谱柱为：InertSustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）为流动相，流速为1.0 ml/min。检测波长为284 nm。结果

复方绞股蓝袋泡茶为笔者所在医院自制制剂，由决明子、绞股蓝等中药材组成，清热平肝，化瘀去湿；用于高血脂、轻度高血压的辅助治疗。方中决明子味甘、苦、咸，微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目，润肠通便的作用。现代研究证明决明子具有降血压、降血脂、保肝及抑菌等活性［1］。

决明子有效成分主要为蒽醌类物质，其中橙黄决明素具有较好的降血脂、抗动脉粥样硬化作用［2，3］。笔者采用HPLC法测定复方绞股蓝袋泡茶中橙黄决明素的含量，为全面有效控制该制剂质量提供参考和依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器SPD10A高效液相色谱仪（岛津公司）、FA-2004N电子天平（上海精科）、CPA225D电子天平（赛多利斯）。

1.2 试药橙黄决明素对照品（批号：111900-201001），购自中国药品生物制品研究所；复方绞股蓝袋泡茶（每袋3.0 g，解放军第454医院）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果［4-7］

2.1 色谱条件色谱柱为：InertSustain C18（4.6 mm× 250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60），流速为1.0 ml/min。检测波长为284 nm。理论塔板数按橙黄决明素峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备取橙黄决明素对照品适量，精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每1 ml约含橙黄决明素20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称定本品内容物约1.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，蒸干，加稀盐酸30 ml，置水浴中加热水解1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，30 ml/次，合并三氯甲烷，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，转移至25 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 专属性试验按以上色谱条件分别取对照品溶液、供试品溶液各20 μl，进样，对照品、供试品色谱图见图1。

2.4 线性关系考察精密吸取已配制好的对照品溶液2、6、20、14、18 μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标Y，以对照品进样量（μg）为横坐标X，绘制标准曲线，得回归方程为：Y= 8×106X+67226，r=0.9998；结果表明橙黄决明素在0.042～0.378 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，对照品溶液峰面积的RSD为1.06%，结果表明精密度良好。

2.6 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、8、16、24、48 h进样20 μl，按上述条件测定峰面积，以考察其稳定性，RSD为1.84%，表明供试品溶液至少在48 h内稳定。

2.7 重复性试验精密称取同一供试品，按2.2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，依次测定，计算得橙黄决明素含量，RSD为1.77%，结果表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验精密称取已知含量的批号为20150721的复方绞股蓝袋泡茶样品约1.5 g，加入橙黄决明素约0.16 mg，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下方法检测。其结果见表1。结果表明准确度良好。

图1 复方绞股蓝袋泡茶HPLC

表1 复方绞股蓝袋泡茶加样回收率试验结果（n=5）

2.9 供试品含量测定按“2.2.2”项下方法制备10批供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，计算得橙黄决明素含量分别为0.1063、0.1087、0.1077、0.1046、0.1092、0.1053，0.1079、0.1059、0.1061、0.1073 mg/g，最低0.1046 mg/g，以最低测定值的80%为限，故拟复方绞股蓝袋泡茶中含决明子以橙黄决明素计，不得低于83.7 μg/g。

3 讨论

前期实验中，在定量物质的选择方面，课题组曾以绞股蓝中皂苷类成分绞股蓝皂苷Ⅲ为定量指标，但实验发现，其分离效果不佳，后转为测定制剂中橙黄决明素的含量。查阅文献发现，绞股蓝中约含皂苷130多种，成分比较复杂［8，9］。接下来拟研究以绞股蓝中黄酮类成分槲皮素、异鼠李素为定量成分，以期实现对复方绞股蓝袋泡茶质量的全面控制。

供试品提取方法的选择方面，以甲醇为提取溶剂，提取方法采用加热回流提取1.5、2、2.5 h。测定方法相同，超声提取2、2.5 h时，提取较完全，因此选用甲醇作为提取溶剂、加热回流2 h。

流动相的选择方面，参考相关文献，适当提高磷酸比例，选用乙腈-0.1%磷酸（40∶60）、流速1 ml/ min作为流动相，橙黄决明素与其他成分能完全分离，达到较佳的效果［10-12］。

该实验采用HPLC法测定复方绞股蓝袋泡茶中橙黄决明素的含量，方法简单、准确，测定结果稳定可靠，且重现性好，可用于复方绞股蓝袋泡茶的含量测定和质量控制。

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［8］周建华，张兴亚.绞股蓝开发研究新进展及应用［J］.食品科技，2010，35（2）：74-77.

［9］张钊，李鹏婧，杨洋.绞股蓝研究综述［J］.食品研究与开发，2011，32（11）：193-195.

［10］王小凤，樊淑彦，何晓文，等.山庄降脂片中橙黄决明素、大黄素和大黄酚的HPLC测定［J］.中国医药工业杂志，2009，40（10）：770-772.

［11］卫莹芳，谢达温，万丽，等.HPLC梯度洗脱法同时测定决明子中橙黄决明素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量［J］.世界科学技术：中医药现代化，2009，11（16）：868-871.

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［2016－11－21收稿，2016－12－18修回］［本文编辑：刘一洋］

Determination of aurantio-obtusin content of Compound Jiaogulan Daipaocha by HPLC

LU Yi，LI Yan-si，WANG Ya-wei，et al.Department of Pharmacy，the No.454 Hospital of PLA，Nanjing，Jiangsu 210002，China

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of aurantio-obtusin in Compound Jiaogulan Daipaocha.MethodsThe operating conditions by HPLC were Inert Sustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），the mixture of acetonitrile-0.1%Phosphoric acid water（40∶60）as mobile phase，1.0 ml/min as flow speed and wavelength 284 nm.ResultsAurantio-obtusin can be well separated from other components.Aurantio-obtusin showed a good linear relationship within the range of 0.042-0.378 μg（r=0.9998，n=5）with an average recovery of 98.71%（RSD=1.02%）.ConclusionThe method is accurate and sensitive，which may be used for the quality control of compound Jiaogulan Daipaocha.

Compound Jiaogulan Daipaocha；HPLC；Aurantio-obtusin；Levels（content）

R917

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.06.026

210002江苏南京，解放军454医院药剂科（鲁毅，李燕思，王亚威，段靖，许桂丽）

橙黄决明素与其他组分能较好分离，其在0.042～0.378 μg范围内线性关系良好（r=0.9998，n=5），平均回收率为98.71%，RSD为1.02%。结论该方法测定结果准确、灵敏，可用于复方绞股蓝袋泡茶的质量控制。［关键词］复方绞股蓝袋泡茶；高效液相色谱法；橙黄决明素；含量