优质肉羊超数排卵优化组合方案应用研究

罗生金，黄 浩，张 磊，阿不都力·尼亚孜

（新疆哈密地区畜牧工作站，哈密 839000）

优质肉羊超数排卵优化组合方案应用研究

罗生金，黄 浩，张 磊，阿不都力·尼亚孜

（新疆哈密地区畜牧工作站，哈密 839000）

试验旨在探索优化超排方案，提高肉羊胚胎生产效率。在新疆哈密市牧祥合作社用FSH+PG递减4 d 8针注射法处理供体羊44只，冲胚数503枚、只均冲胚数11.43枚±0.79枚，可用胚数394枚、只均可用胚数8.95枚±0.95枚；同样的方法用FSH+PG+PMSG处理供体45只，冲胚数608枚、只均冲胚数13.51枚±1.04枚，可用胚数435枚、只均可用胚数9.67枚±1.06枚，差异均极显著（P< 0.01）；对39只供体羊分别采用开膣器输精+自然交配+开膣器输精和自然本交方法配种，重复超排跟踪统计，重复超排和不同授精方式冲胚数无明显差异（P>0.05）；选用自然发情与人工诱情法处理，自然发情组可用胚胎数289枚，诱情组可用胚胎数221枚，两者差异极显著（P<0.01）；供体羊在不同营养状态下超排处理，营养良好者与营养中等者只均回收胚胎数分别为14.4枚和8.52枚，只均可用胚胎平均数分别为7.0枚和5.25枚，差异也极显著（P<0.01）。该研究优化了绵羊超排方法和配种授精方案，初步建立了高效胚胎移植体系。

优质肉羊；超数排卵；胚胎移植

羊胚胎移植也叫“借腹怀胎”，就是将1只良种母羊经配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一只生理状态相同的母羊体内，使之继续发育成为新个体的过程。通过胚胎移植技术的实施既可以充分发挥良种羊的遗传性能，又可在短时间内获得一定数量的纯种群。本试验在新疆哈密市牧祥合作社和伊吾县北牧种羊场进行，在同一饲养管理条件下，针对种羊场优质肉羊按不同处理方式、不同营养状态、重复利用实施超数排卵处理；通过开膣器输精与自然交配，筛选出适合生产推广使用的配种方式。通过诱导发情、超数排卵、胚胎鉴定、胚胎移植技术等的系统应用，优化肉羊超排方案，有效降低生产成本，提高胚胎移植效率，以期总结出适合本地区推广应用的肉羊超排方案与胚胎移植技术的操作规程，为推动本地区胚胎移植技术的产业化发展提供依据。

1 材料与方法

1.1 羊只

试验于2015年10—12月、2016年10月—2017年 1月选用哈密市牧祥合作社的体重90～100 kg，体况良好、无繁殖疾病，1～3岁的良种萨福克母羊做供体；受体羊为湖羊母羊，年龄1～3岁，体重40～50 kg以上，膘情良好、无繁殖疾病。杜泊羊选用伊吾县北牧种羊场良种肉羊（做供体羊）。试验前期补饲，确保体况中等以上；采精种公羊为种羊场纯种肉羊，性欲良好，精液品质优良。试情公羊为性欲旺盛的成年湖羊。按程序做好饲喂、饮水、运动、试情等工作。

1.2 设备

专用胚胎移植手术架，内窥镜，B超仪，子宫钳，体视显微镜，水浴锅，恒温台，注射器（1 mL、2.5 mL、5 mL、20 mL、50 mL），冲卵管，三通管，检卵（胚）针，移植管，培养皿，曲别针，小弯缝合针，12号缝合线，10号缝合线，剃毛刀，剪毛剪，电暖器。

1.3 药品与试剂

冲卵液（PBS）由中国农科院研制生产，保存液（holding solution）新西兰生产；前列醇钠、FSH、LHRH-A3、孕马血清促性腺激素（PMSG）均为宁波三生激素制品厂生产；静松灵注射液，利多卡因注射液，黄体酮注射液，160万IU青霉素，100万IU链霉素，100 mL替硝唑注射液，75%酒精，2%碘酒，新洁尔灭，0.9%生理盐水，克林霉素，等等。

1.4 供体羊超排处理和配种

1.4.1 超排处理方式 方法一：对供体羊采用自然观察法，用试情公羊试情一个情期，选出有自然发情周期的母羊全群注射PG，每只1 mL，在24～72 h内每天试情2次，做好发情记录，按照发情先后顺序编号、分组、编制程序，在母羊情期10～11 d采用FSH+PMSG+PG或FSH+ PG递减4 d 8针注射法进行超排处理，FSH+PMSG+PG法同一程序第5针同时注射PMSG+FSH，PMSG注射剂量每只200 IU，第6针注射PG，撤栓，逐量递减，FSH剂量参照罗生金等［1］进行，12 h后开始用公羊试情，间隔6～12 h再试情1次，直至不接受交配为止，并在第2次配种后，每只羊注射LHRH－A3（宁波）25 mg。方法二：采用CIDR法，可在供体羊发情周期内任意一天阴道放入CIDR，此后第10天开始注射FSH，每隔12小时注射1次，第6针注射FSH+PG 1 mL，撤栓，剂量递减。其余部分与方法一相同。

1.4.2 配种输精方式 根据种羊场种公羊质量和数量，采用授精方式一：开膣器输精+自然交配+开膣器输精；方式二：发情后12 h自然交配一次+发情后24 h再自然交配1次，也即母羊发情后12 h和24 h各自然交配一次。1.4.3 试验分组 本试验分不同超排处理方案、重复利用、不同授精方式、营养条件因素对供体绵羊超排效果的影响进行对比试验，为减小误差，每组因素的试验都在同一条件下进行。

1.4.4 胚胎质量鉴定 配种后第5.5～6.6天手术法从子宫角冲卵，在20～40倍体视显微镜下根据受精卵的形态、色泽、卵裂球的大小和数量、均匀度、细胞的密度等确定受精情况以及胚胎发育阶段。

1.4.5 受体羊处理和移植 受体羊与供体羊同步试情处理，采用两次PG法，第1次与第2次间隔11 d，受体羊与供体羊同期时间相差不得超过12 h，采用腹部手术法处理受体羊，腹腔内窥镜观察，单侧卵巢1～3个黄体则移植1～2枚桑葚胚或囊胚。左右创口各缝1针后，解除保定。

1.4.6 供受体羊术后处理 供受体羊术后置于小圈内隔离观察1～2 d，圈舍应保持清洁干燥，有利于术后恢复。

1.5 统计分析

采用Excel进行数据收集，使用SPSS 18.0软件对超排供体羊可用胚胎数、回收胚胎数分别进行t检验和χ2检验。

2 结果与分析

2.1 不同超排方案对超排效果的影响

采用4 d 8针FSH递减+PG与FSH递减+PMSG+PG不同组合注射方式的2个方案进行超排（见表1）。授精方式采用方式一。结果显示：前者供体羊只均冲卵数11.43枚±0.79枚、只均可用胚数8.95枚±0.95枚，后者供体羊只均冲卵数13.51枚±1.04枚、只均可用胚数9.67枚±1.06枚，两者差异均极显著（P＜0.01），且后者比前者获得较多的受精卵，取得了满意效果。

表1 不同超排方案供体羊胚胎数量比较

2.2 重复超排对超排效果的影响

由表2可知，对牧祥合作社两年39只萨福克羊（供体羊）跟踪统计显示：第1次冲胚数510枚、只均冲胚数 13.26枚±1.58枚，可用胚胎数 416枚、只均可用胚胎数 10.67枚±1.48枚；第 2次冲胚数 507枚、只均冲胚数 13.00枚±0.91枚，可用胚胎数 372枚、只均可用胚胎数9.54枚±0.86枚，重复超排和不同授精方式冲胚数无明显差异（P＞0.05）；但供体羊随着年龄的增加、冲胚次数的增多，可用胚胎数减少，可能是冲胚造成粘连，部分供体羊子宫内环境紊乱，有的次年没有产羔。为提高羊只的重复利用率，2017年笔者做供体羊冲胚手术，避开血管，子宫内灌注克林霉素注射液，自动止血后再还纳入腹腔原位。供体羊粘连数量是否减少，还有待于进一步验证。

表2 不同冲胚次数供体羊胚胎数量比较

2.3 不同发情状态对超排效果的影响

如表3所示，供体羊自然发情法只均冲胚数14.65枚±1.42枚，可用胚胎数289枚，只均可用胚胎数11.12枚±1.35枚；而PG诱情法只均冲胚数12.00枚±1.18枚，可用胚胎数221枚，只均可用胚胎数8.50枚±1.27枚，两者间均差异极显著（P＜0.01）。

表3 不同发情状态供体羊胚胎数量比较

2.4 不同营养状态对超排的影响

2016年12 月在伊吾县北牧种羊场，笔者将杜泊母羊分为两组，粗饲料自由采食，一组45只，每只羊每日饲喂精饲料0.8 kg，饲喂20 d；另一组28只，每只羊每日饲喂精饲料1.2 kg，饲喂40 d。任意一天随机对空怀供体羊埋栓CIDR（宁波三生激素制品厂生产），采用4 d 8针 FSH递减+PMSG注射法。不同营养状态供体羊胚胎数相比较，营养良好的羊只超排回收胚胎数、只均可用胚胎数与营养中等羊只间差异均极显著（P<0.01）。通过试验看出，配种前较长时间短期优饲，会得到较高的排卵数和较好的胚胎质量。可见在良好的营养条件下，供体羊获得良好的体况，可保证正常的繁殖机能［2-3］。

表4 不同营养状态供体羊胚胎数量比较

3 讨论

（1）卵的成熟和排卵是两个相关又相互独立的生理现象，用药物促使多个卵泡的成熟并同时排卵，可能使某些卵子并未发育成熟而排出，这种卵子或者没受精，或者停止在胚胎的早期阶段。本试验采用FSH+PG递减与FSH+PMSG+PG递减4 d 8针注射法（PMSG第5针单独注射）相比较，FSH+PMSG+PG递减方案超排效果优于FSH+PG方案，增加PMSG注射更有利于卵泡的发育，同时有一定的促排卵和黄体形成的功能，该方案可为大规模胚胎移植提供参考。

（2）良好的种质资源应得到高效利用。本研究对39只黑萨福克羊间隔12个月（超排采胚后自然配种，产羔后再进行第2次超排采胚）再次超排，延长了超排处理的时间间隔，使（子宫）卵巢有充足的恢复时间，采胚成功率、平均可用胚数无显著差异（P>0.05）。重复超排可有效降低成本、提高优质种羊的利用率。

（3）对同一种羊重复超排，采用开膣器输精+自然交配+开膣器输精和本交的方法，两者间差异不显著（P> 0.05）。在今后的工作中，种公羊数量多时可采用自然本交方式，种公羊少的种羊场可采用开膣器输精+自然交配+开膣器输精的方式进行配种。在移植前必须按照胚胎移植整体时间计划来安排，供体羊的营养水平必须在做超排和手术时提高，即胚胎移植前40～60 d提高供体羊营养水平特别关键，此结果与马保华等［4］报道相一致。实践证明，上等膘情的供体母羊超排效果极显著好于膘情较差的供体母羊（P<0.01）。

（4）笔者通过2个情期筛选，按照自然发情周期供体羊超排处理的采卵平均数、可用胚胎平均数均高于PG诱情组。究其原因在于自然发情有正常的发情周期，卵巢发育良好，大小适中，排卵点均匀，卵巢上大卵泡较少，胚胎回收数量与排卵点数吻合。而PG诱情组通过激素调节，部分羊只超排效果不明显，卵泡发育不成熟或不能正常排卵，以致对采胚数和可用胚数产生影响。自然发情周期超排处理供体羊组冲胚数和可用胚数与PG诱情组间差异极显著（P<0.01），此结果与梁坤等［5］报道不一致。阴道栓法超数排卵完全可以替代自然同期发情法超数排卵，虽然在可用胚胎率上差异极显著（P<0.01），但在可用胚胎数上没有显著性差异（P>0.05）。在供体种羊数量大的养殖场，最好采用自然发情法来超排处理供体羊。

［1］ 罗生金，张磊，尼亚孜，等.萨福克羊超排处理与胚胎移植技术应用研究［J］.中国草食动物科学，2016，36（2）：26-28.

［2］ 罗生金，尼亚孜.杜泊绵羊胚胎移植技术在哈密地区应用效果观察［J］.黑龙江动物繁殖，2015（5）：12-14.

［3］ 张春香，任有蛇，岳文斌.营养对母羊繁殖性能影响研究［J］.中国草食动物科学，2010，30（6）：62-64.

［4］ 马保华，李键.羊生产性胚胎移植的组织与技术程序［J］.草食家畜，2001（S2）：112-118.

［5］ 梁坤，王宏宝，俞守绪，等.两种不同超数排卵方法的效果分析［J］.黑龙江动物繁殖，2007，15（5）：20-21.

S826.2

A

2095-3887（2017）03-0015-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.03.005

2017-03-16

哈密地区科技兴农项目［哈地党农字（2015）6号］

罗生金(1973-)，男，高级兽医师、执业兽医师，硕士，从事畜牧业科技推广和动物疫病诊疗工作。