玫瑰花中黄酮提取及其抗氧化活性的研究

王 斌

玫瑰花中黄酮提取及其抗氧化活性的研究

王 斌

（桐城师范高等专科学校 小学教育系，安徽 桐城 231403）

以玫瑰花蕾为原料，利用乙醇为溶剂提取玫瑰花中的黄酮物质，通过单因素实验和正交实验探索最佳提取条件．结果表明：提取玫瑰花中黄酮类物质的最佳条件为乙醇浓度65%，料液比为1∶20，80℃恒温提取2．5h．同时利用抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）检测发现，玫瑰花中提取的黄酮物质具有明显的抗氧化作用．

黄酮；玫瑰花；抗氧化活性

随着人们对绿色食品的追求和环保意识的提高，现代的植物学研究越来越深受人们的重视．众多实验表明，黄酮类物质具有广泛活性包括抗氧化活性，抗衰老，抗肿瘤，抗菌等作用［1］，其对药品的开发也有着极其重要的作用［2］．

玫瑰是蔷薇科蔷薇属落叶灌木（Rosa rugosa），玫瑰花中的槲皮素等黄酮类化合物含量非常丰富，而槲皮素等具有很好的抗氧化作用，应用前景广泛．

1 材料与方法

1．1 实验用品

1．1．1 材料

玫瑰花蕾，购于中国药材市场网，产地河南汝南．

1．1．2 试剂

芦丁（纯度≥98%），无水乙醇、亚硝酸钠、柠檬酸、硝酸铝、氢氧化钠、除特殊说明外均用蒸馏水作为溶剂．

1．1．3 仪器设备

电子天平FA2004N（上海精科）、分光光度计UV－2200型（上海奥析）、FZ102微型植物试样粉碎机（黄骅新兴）、恒温水浴锅HHS（上海精科）、循环水真空泵SH2DⅢ（予华仪器）、FRAP试剂盒（南京建成）、布氏漏斗、铁架台、蛇形冷凝管、圆底蒸馏瓶、烧杯、温度计、量筒、容量瓶、试剂瓶、玻璃棒、夹子、洗耳球等．

1．2 实验方法

1．2．1 样品的预处理

玫瑰花蕾去掉花萼，用粉碎机粉碎，按1∶20料液比、65%乙醇为溶剂，在70℃条件下恒温水域回流提取2．5h，然后抽滤得到滤液备用．

1．2．2 总黄酮的测定方法

芦丁对照品0．020g，65%乙醇溶解，定容100mL，制备成0．2mg／mL标准溶液．称取0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL对照溶液，置于50mL容量瓶中，用65%乙醇定容至25mL，各加5%NaNO21．4mL，5min后，加入10%的Al（NO3）31．4mL，6min后再加1mol／L的氢氧化钠20mL，用65%的乙醇定容至刻度线，10min后，波长510nm处测吸光度值［3－4］．结果见图1．

1．2．3 提取单因素试验

1．2．3．1 温度变化时黄酮的提取

称取2g玫瑰花粉末在料液比为1∶20，65%乙醇条件下，60℃、70℃、80℃、90℃分别提取2．5h．

图1 提取的总黄酮含量标准曲线

1．2．3．2 料液比变化时黄酮的提取

称取2g玫瑰花粉末在温度为80℃，65%乙醇条件下，按料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40提取2．5h．

1．2．3．3 时间变化时黄酮的提取

称取2g玫瑰花粉末在温度为80℃，料液比为1∶20，65%乙醇条件下，分别改变提取时间2h、2．5h、3h、3．5h提取黄酮类物质．

1．2．3．4 提取液浓度变化时黄酮的提取

称取2g玫瑰花粉末在料液比为1∶20，温度为80℃的条件下，分别改变提取乙醇浓度55%、60%、65%、70%，提取2．5h，考察其对总黄酮的影响．

1．2．4 正交试验

单因素下，选择乙醇浓度、温度、时间、料液比进行4因素3水平正交试验，确定最佳提取条件．正交试验因素水平见表1．

1．2．5 玫瑰花中黄酮的抗氧化活性测定

利用抗氧化能力检测试剂盒（FRAP）法来检测玫瑰花中黄酮物质的抗氧化活性．

玫瑰花黄酮液的配制：准确称取已制备的玫瑰花黄酮提取物，在75℃下加热用蒸馏水溶解，配制成玫瑰花提取物质量浓度为10mg／mL的溶液．然后将溶液分别用蒸馏水稀释成质量浓度为0．5、1、2、4、5、8mg／mL的测定液备用．

测定方法：Fe3＋还原试剂盒法

总抗氧化能力＝（测定管OD—对照管OD）∗反应体积∗样品稀释倍数／（0．01∗30∗取样量）

表1 正交试验因素

2 结果与讨论

2．1 单因素考察

2．1．1 温度对提取的影响

精确称取玫瑰花粉2g，以料液比为1∶20、65%乙醇溶液提取2．5h，趁热抽滤，将滤液用50mL容量瓶定容到刻度线，摇匀，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由图2可见在料液比、时间和乙醇浓度不变的情况下，黄酮的提取含量随温度增加而不断增加，超过80℃时，黄酮提取含量开始减少．因此在温度为80℃时，其它因素不变的情况下，提取的黄酮含量最多．

图2 不同温度下黄酮含量提取

图3 不同料液比黄酮含量提取

2．1．2 料液比对提取的影响

精确称取玫瑰花粉2g，温度为80℃、65%乙醇溶液提取2．5h，趁热抽滤，将滤液用50mL容量瓶定容到刻度线，摇匀，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由图3可见在温度、乙醇浓度、时间三因素不变情况下，提取黄酮的含量随料液比逐渐增加而不断增加，料液比为1∶20后黄酮的提取量开始减少，因此在料液比为1∶20时提取黄酮的含量最多．

2．1．3 加热时间对提取的影响

精确称取玫瑰花粉2g，以料液比为1∶20、65%乙醇溶液、温度为80℃按不同时间提取，趁热抽滤，将滤液用50mL容量瓶定容到刻度线，摇匀，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由图4可见，在温度、料液比、乙醇浓度不变的情况下改变提取黄酮的时间，提取黄酮的含量是随着加热时间的延长而逐渐升高，在加热时间为2．5小时左右，黄酮的提取量为最佳．

图4 不同加热时间黄酮含量提取

图5 不同乙醇浓度黄酮含量提取

2．1．4 溶剂的浓度对提取的影响

精确称取玫瑰花粉2g，以料液比为1∶20，温度为80℃提取2．5h，趁热抽滤，将滤液用50mL容量瓶定容到刻度线，摇匀，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由图5可见在温度、料液比、时间不变的情况下，随着乙醇浓度的增加黄酮的提取量不断增加，乙醇浓度65%为最佳提取浓度．

2．2 正交试验

在单因素的基础上，选择乙醇浓度、料液比、温度、提取时间4种因素3水平进行正交试验，结果见表2．

表2 正交试验结果

由表2可见，乙醇浓度为65%，料液比为1∶20，温度为80℃条件下，恒温2．5h所提取的黄酮含量最多．

表3 方差分析

由表3中方差分析可见，在温度、料液比、时间、乙醇浓度四因素中，料液比对黄酮的提取最具有显著性影响．

2．3 总抗氧化能力的测定

利用抗氧化能力检测试剂盒对提取的黄酮进行抗氧化能力测定，结果见表4及图6．

表4 提取黄酮的总抗氧化能力

图6 玫瑰花中黄酮提取物的抗氧化能力

从表4和图6中可以看出，玫瑰花中黄酮的提取物抗氧化能力较强，并具有明显的量效关系．

3 结论

从单因素实验和正交实验结果中可以得出，玫瑰花中提取黄酮类物质的最佳条件为：乙醇浓度为65%，料液比为1∶20，在温度为80℃条件下恒温2．5h所提取的黄酮的含量是最多的．利用抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）检测发现，玫瑰花中提取的黄酮物质具有很明显的抗氧化作用．

［1］ 龚晓武，李炳奇，刘丹丹，等．红景天黄酮提取及其抗氧化活性研究［J］．西北林学院学报，2011，26（3）：136－138．

［2］ 邱贺媛，章宋洁．薄荷叶中黄酮类物质提取及其抗氧化活性研究［J］．安徽农业科学，2010，38（34）：19335－19337，19340．

［3］ 谢 琼，张益娜，李 敏，等．紫外分光光度法测定玫瑰花和玫瑰花渣中的总黄酮含量［J］．农产品加工，2007（4）：19－21．

［4］ 张春兰，叶 林，吴晓军，等．蔷薇果黄酮类物质对油脂的抗氧化作用［J］．中国油脂，2010（1）：44－46．

Extraction and Antioxidant Activity of Flavonoids from Rose

WANG Bin
（Department of Primary Education，Tongcheng Teachers College，Tongcheng 231403，China）

The rose bud as raw material，the ethanol as solvent to extract flavonoids from rose，by single factor ex⁃periment and orthogonal experiment，it explored the optimal extraction conditions of flavonoids．The results showed that the optimum conditions for extraction of flavonoids from rose were ethanol concentration 65%，material to liq⁃uid ratio of 1∶20，extraction temperature of 2．5h at constant temperature of 80 degrees．Furthermore，with the help of FRAP，it finds that the flavonoids from rose is of obvious antioxidation．

flavonoids；rose；antioxidant activity

S685．12

A

2095－4476（2017）05－0029－04

（责任编辑：徐 杰）

2016－12－08；

2017－01－10

王 斌（1981—），男，安徽桐城人，桐城师范高等专科学校小学教育系讲师．