乌梅丸的实验研究进展

丁晓洁+++董正平

[摘要] 乌梅丸是主治蛔厥和久利的经典方剂，因其“寒热并用、攻补兼施”的组方特点，临床应用非常广泛，在许多疾病中均有良好的疗效。实验研究表明，乌梅丸具有抗炎、调节免疫、促进胃肠功能恢复、调节肠道菌群、抑制细胞凋亡、修复黏膜屏障和抗氧化损伤等作用。通过回顾近十年乌梅丸的实验研究发现，其实验研究领域主要集中在溃疡性结肠炎、肿瘤及糖尿病领域。进一步拓宽研究领域，阐明乌梅丸多中心、多靶点的作用机制，建立和评价“寒热错杂”病证结合动物模型应是今后研究的重点。

[关键词] 乌梅丸；溃疡性结肠炎；肿瘤；糖尿病；实验研究；寒热错杂

[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（c）-0052-04

[Abstract] Plum pill is a classic formula of attending hatched jue and chronic diarrhea. It has wide range of clinical application and good curative effect in many diseases due to its formula characteristics of "combination of cold and heat， combination of tonification and purgation". Plum pill has effect of anti-inflammatory， immunoregulation， promoting gastrointestinal function recovery， modulating intestinal flora， inhibition of cell apoptosis， repairing the mucosal barrier and anti-oxidative damage. Plum pill was mainly researched in the field of ulcerative colitis， cancer and diabetes by reviewing the experimental study in nearly a decade. Further broadening the research field， clarifying plum pill multicenter， mechanism of action of multiple targets， establishing and evaluating of animal models combined disease and syndrome of intermingled heat and cold are the focus of future research.

[Key words] Plum Pill； Ulcerative Colitis； Cancer； Diabetes； Experimental Research； Intermingled heat and cold

乌梅丸出自张仲景的《伤寒论》338条：“蛔厥者，乌梅丸主之。又主久利”，本方由乌梅、干姜、黄连、黄柏、细辛、附子、蜀椒、当归、桂枝、人参10味药组成。从功效上讲，乌梅酸涩为君药，有涩肠止泻之功；蜀椒、细辛味辛性温为臣药，温肾暖脾化湿；黄连、黄柏味苦性寒，清热燥湿止泻；附子、桂枝、干姜为辛热之品助蜀椒、细辛温肾暖脾；人参、当归味甘性温，益气补血为佐药；炙甘草甘缓和中为使药；从药性上讲，乌梅酸涩，蜀椒、细辛、附子、桂枝、干姜辛热，黄连、黄柏苦寒，人参、当归、炙甘草甘温。全方集酸苦甘辛于一体，辛开苦降，寒热并用，攻补兼施，刚柔相济，既能调和肝脾，又能调和寒热虚实。

乌梅丸“寒热并用、攻补兼施”的组方特点，与消化系统疾病及临床疑难杂症“寒热错杂、虚实夹杂”的病机特点十分吻合。其临床应用发展到今天，治疗范围已非常广泛，除了蛔厥和久利以外，还被广泛应用于内、外、妇、儿、五官科等各科，包括消化、呼吸、内分泌、泌尿、神经系统等多种疾病，且取得较好的疗效。实验研究是探索中药复方具体作用机制和靶点的有效途径，随着乌梅丸的临床疗效被认可，其作用机制的实验研究也在逐步开展，并取得了一定的成果。本文对近十年乌梅丸的实验研究综述如下：

1 溃疡性结肠炎

溃疡性结肠炎（UC）是乌梅丸临床治疗较多的消化系统疾病。目前研究报道，乌梅丸治疗UC的机理主要体现在抗炎、调节免疫、促进胃肠功能恢复、调节肠道菌群、抑制细胞凋亡、修复黏膜屏障、抗氧化损伤等方面。

1.1 抗炎

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠细胞因子具有免疫调节作用[1]，可以上调抗炎细胞因子、下调促炎细胞因子，减轻炎症损害、抑制肠道炎症反应[2-4]。乌梅丸可以降低結肠组织前列腺素E2（PGE2）含量，减轻细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达程度[5]。乌梅丸加减方可以通过下调前炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的含量，减轻炎症级联反应，从而减少结肠组织中血小板活化因子（PAF）和P-选择素表达下降，使肠黏膜的损伤减轻[6]。乌梅丸还能下调UC大鼠脾脏组织DOR mRNA、p-arrestin1 mRNA、BcL-2 mRNA以及蛋白表达，从而减轻结肠黏膜的炎性反应[7-10]。乌梅丸及其拆方可显著改善模型大鼠结肠组织炎症程度，其中以全方组和寒热并用组作用最明显；全方组降低结肠组织TNF-α含量作用最强；全方组、寒热并用组、温热组、补益组药物可降低结肠组织PGE2含量；全方组、寒热并用组、温热组药物能显著降低结肠组织PAF，效果相当[10]。乌梅丸组、辛开苦降组对UC大鼠结肠黏膜炎症有较好的缓解作用，其作用机制可能与调节炎性因子平衡，抑制TLR9/MyD88/NF-kBp65信号通路的异常活化有关；辛开苦降、寒温并施的配伍方式可能是乌梅丸治疗UC的内在机制之一[11]。

1.2 调节免疫

乌梅丸可以抑制NF-kBp65活性、降低结肠组织中STAT6的表达、抑制CD44的表达[12-14]。乌梅丸通过多种信号通路调节机体免疫，发挥治疗作用。乌梅丸加减方可能通过抑制IL-4/STAT6通路上的IL-4、STAT6的过高水平，增强SOCS1表达，抑制eotaxin的表达[15]。乌梅丸能抑制TLR4/NF-κB信号通路的传导，对Notch信号通路也有调节作用，可降低大鼠结肠上皮细胞Notch-1、Hes-1mRNA表达，升高Math-1mRNA表达，寒热并用组药物效果最明显[16-18]。DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号通路在UC的发病中也起到了重要作用，乌梅丸可能通过干预此信号通路发挥治疗作用[19]。另外还可能通过抑制结肠黏膜组织IL-6/JAK/STAT3信号通路的异常活化治疗溃疡性结肠炎[20]。

1.3 促进胃肠功能的恢复

乌梅丸全方组、寒热并用组和温热组药物能有效降低胃残留率、升高小肠推进率，有显著的恢复胃肠功能的作用；收敛组则表现出相反作用[10]。乌梅丸能抑制肠黏膜VIP的表达，促进SP表达，降低胃残留率，提高小肠推进率，且温热组药物为该方促进胃肠功能恢复的主要药物[21]。

1.4 调节肠道菌群

王佳林[22]发现乌梅丸加减联合巴柳氮钠可明显改善UC患者的临床症状，并能升高IL-4、乳酸菌和双歧杆菌，降低IL-8、TNF-α和大肠埃希菌，且临床疗效优于单纯使用西药。

1.5 抑制细胞凋亡

乌梅丸可能通过抑制Fas/FasL信号通路的激活，调节Bcl-2和Bax基因表达，抑制结肠上皮细胞的过度凋亡，以大剂量组疗效最佳[23-25]。

1.6 修复黏膜屏障

乌梅丸对动物炎性肠黏膜上皮细胞有修复作用[26]，可以修复溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜屏障的作用，这种作用与剂量成正比关系，其机制可能与促进杯状细胞分泌MUC2和TFF3有关[27]。

1.7 抗氧化损伤

乌梅丸可以升高结肠黏膜组织SOD含量，降低MDA含量，减轻黏膜脂质过氧化反应。乌梅丸组和辛开苦降组作用优于辛开组、苦降组和补益组[28]。

2 肿瘤

乌梅丸用于肿瘤治疗的临床报道较少，实验研究更少，文献报道其治疗肿瘤的机制研究主要是抑制其增殖和转移、促进细胞凋亡、抗诱变、抗促癌及抗氧化等方面。

用乌梅丸化裁组成的胃萎灵胶囊能明显提高小鼠肝脏GST活性和GSH含量，逆转小鼠胃黏膜癌前病变，其作用机理可能与抗诱变、抗促癌及抗氧化作用有关[29]。此外，乌梅丸能够显著抑制人胃癌SGC-7910细胞的生长增殖，其作用机制可能与抑制基因survivin、C-mycmRNA和蛋白的表達有关[30-31]。无论是乌梅丸还是其拆方均可在一定程度上抑制乳腺癌的增殖和转移，其机制可能与调控Fas和FasL分子的表达有关[32]。加味乌梅丸有诱导小鼠体内移植性人胰腺癌细胞凋亡的作用[33]。

3 糖尿病及其并发症

乌梅丸可以降低四氧嘧啶诱发的高血糖小鼠空腹血糖含量[34]，但不能降低正常小鼠空腹血糖含量。其降血糖作用机理可能与促进胰岛β-细胞再生和功能恢复、刺激其分泌胰岛素、增加外周组织对葡萄糖的利用等多方面因素有关，且方中黄连、黄柏药物本身均具有较好的降血糖作用[35]。氨基酸代谢谱与糖尿病血糖高低之间存在相关性，糖尿病患者血清中生糖氨基酸降低，支链氨基酸升高，给予减味乌梅丸干预后患者血清中天冬氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸浓度都明显升高，缬氨酸、异亮氨酸浓度降低，趋向于正常人值[36]。AMPK激活能改善2型糖尿病引起的代谢失衡。乌梅丸及其寒热配伍可有效提高肝脏、骨骼肌、脂肪组织中AMPK的表达，但是寒性药组和热性药组对AMPK的表达影响无显著性差异[37]。糖尿病常并发植物神经功能紊乱，引起胃张力缺乏，胃动力紊乱，导致胃潴留及胃轻瘫。乌梅丸可以降低Hp阳性糖尿病胃瘫患者血浆内皮素、胃泌素水平[38]。

4 肝纤维化

乌梅丸有明显延缓或阻止肝纤维化的作用。其机制是通过阻止Ⅰ、Ⅲ型胶原等的形成，明显减少TGF-β1及其mRNA的表达，促进细胞外基质的降解，从而抑制肝组织损伤，减轻炎性反应，延缓或阻止纤维化的病理改变[39-42]。

5 哮喘

何丰华[43]通过动物实验研究加减乌梅丸治疗激素依赖型哮喘（SDA）的疗效机制，结果发现，在激素撤前，加减乌梅丸可以减轻大鼠呼吸急促、节律不齐等症状；在激素撤中和撤后，加减乌梅丸组呼吸道症状基本控制，四肢发凉，口鼻、眼眶及尾尖紫绀，毛发粗糙少泽，喜群卧不喜动等症状亦得到明显改善。说明乌梅丸可调节神经-内分泌-免疫（NEI）网络系统，激素得以撤除，哮喘得以控制。另有研究表明[44]方中乌梅、人参具有抗过敏作用，能降低气道高反应性；附子、干姜、人参能够兴奋下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPA），可对抗长期服用糖皮质激素造成的副作用，从而有利于激素的撤减。

6 肛门瘙痒

黄文武等[45]采用肚周皮下游离术联合乌梅丸熏洗治疗42例肚门瘙痒患者，取得了较好的临床疗效，其作用机制可能与抑制患者术后肚周皮损中PAR-2的表达有关。

综上所述，乌梅丸的实验研究取得了很大的进展，从一定程度上阐明了乌梅丸具有多中心、多靶点治疗疾病的机理[46]。但相对于临床报道，乌梅丸的实验研究尚处于起步阶段，主要集中在溃疡性结肠炎、肿瘤以及糖尿病领域；所涉及的机制研究多为单个指标的观察，没有形成一个完整的体系；辨证论治是中医的特色，乌梅丸是治疗寒热错杂证的经典方剂，目前已有的动物实验研究报道大多没有使用体现“寒热错杂”证候特点的病证结合的动物模型。因此，有必要在现有研究成果的基础上，充分发挥多学科交叉的技术优势，并结合基因组学、代谢组学、差异蛋白质组学等先进研究方法，进一步拓宽研究领域，深入阐明乌梅丸多中心、多靶点的作用机制。此外，进一步完善病证结合动物模型的制备和证型相关评价指标，对于揭示“寒热错杂”理论的科学内涵具有重要的意义。

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（收稿日期：2017-01-03 本文编辑：苏 畅）