LncRNA TUG1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清中的表达及意义

潘洪川，刘海燕，张月超，肖大宴，谢清平

（四川省眉山市人民医院，四川眉山 620010）

LncRNA TUG1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清中的表达及意义

潘洪川，刘海燕，张月超，肖大宴，谢清平

（四川省眉山市人民医院，四川眉山 620010）

目的探讨检测长链非编码RNA TUG1（long non coding RNA TUG1，LncRNA TUG1，TUG1）在冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者血清中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time polymemse chain reaction，QRT-PCR）检测眉山市人民医院收治的106例冠心病阳性患者和98例冠心病阴性对照组的血清TUG1浓度。采用酶联免疫吸附法检测外周血清中胰岛素样生长因子2B（insulin-like growth factor 2B，IGF2B）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的浓度。分析血清TUG1浓度与血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度的相关性。结果与冠心病阴性组比较，冠心病阳性组血清TUG1浓度维持在相对较低的水平；而血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度在冠心病阳性组明显高于冠心病阴性组，差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析结果显示，血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及TNF-α浓度呈负相关关系（IGF2B：r=-0.767，P<0.001；IL-6：r=-0.671，P<0.001；TNF-α：r=-0.872，P<0.001）。结论冠心病患者血清TUG1浓度显著降低，可能是潜在的诊断和预测冠心病预后的血清标志物。

冠状动脉疾病；长链非编码RNA TUG1；临床意义

动脉粥样硬化是一种由脂质代谢异常、慢性炎症、免疫紊乱及遗传等多种因素相互作用下发生的一种慢性代偿性炎症反应，是许多心血管疾病的病理基础；其病程涉及脂质在血管内膜沉积、内皮细胞受损、血小板和白细胞（单核细胞）黏附、侵袭伴平滑肌细胞和胶原纤维增殖、泡沫细胞的形成。单核细胞黏附、迁移到内皮层下引发炎症反应被认为是动脉粥样硬化的始动环节，也是防止动脉粥样硬化的重要靶点［1，3］。研究发现胰岛素样生长因子2B（insulin-like growth factor 2B，IGF2B）mRNA结合蛋白参与动脉粥样硬化炎症反应。我们通过生物信息学分析发现长链非编码RNA TUG1（long non coding RNA TUG1，LncRNA TUG1，TUG1）可能影响IGF2BmRNA结合蛋白的表达，我们推测LncRNA TUG1可能通过调节IGF2BmRNA结合蛋白表达，从而影响动脉粥样硬化炎症反应。本研究旨在研究LncRNA TUG1在动脉粥样硬化炎症反应中的作用及意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2014年10月至2015年12月期间相继在眉山市人民医院心内科就诊的患者，包括106例冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）阳性患者和98例冠心病阴性对照。冠心病组：冠状动脉造影显示有1支以上狭窄≥75%的患者，其中男67例，女39例，年龄59（35～88）岁。对照组：选择同期就诊、冠状动脉造影显示狭窄≤25%的患者，其中男49例，女48例，年龄56.8（32～85）岁。所有患者间无血缘关系。采集外周血液样本，同时收集患者的临床资料，包括性别、年龄、是否患有原发性高血压（高血压）、是否患有高血脂、是否患有糖尿病、是否发生过心肌梗死。所有入选患者确诊后即刻用含抗凝剂的紫色采血管采集静脉血静置于4℃冷藏30 min后，室温下3 000 r/min离心15 min，留取上层血清，置于-80℃冰箱备用。所有患者均签署知情同意书，经我院伦理委员会批准。

1.2 血清总RNA提取

将分离所得血清置于冰上融化；取250 μL血清样品，加入750 μL Trizol，振荡器混匀，静置5 min；加入200 μL氯仿，振荡器混匀，静置10 min；室温下离心12 000 r/min、10 min，留取上清液并量取其体积，转移至另一个无Rnase的EP管中；分别加入与上清液等体积的异丙醇，振荡器振荡混匀，室温下静置3 min；室温下离心12 000 r/min、10 min；倒出管内液体，加用1 mL75%乙醇；室温12 000 r/min离心2 min；倒出乙醇，并用Tip枪头将剩余液体吸干净，晾干。每管中加入10 μL无Rnase的双蒸水（ddH2O），以能够充分溶解RNA；用分光光度计测定总RNA浓度及纯度。

1.3 实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA TUG1的表达水平

提取血清总RNA，逆转录反应参照AMV逆转录试剂盒说明，在20 μL体系中加2 μg总RNA进行cDNA的合成。实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time polymemse chain reaction，QRT-PCR）采用2xSYBR Green PCR Master Mix，取适量cDNA作为摸板，引物浓度0.4 μmol/L、15 μL体系进行扩增，每个待测样本设置3个平行样，根据目标基因设计合成相应上、下游引物进行PCR扩增，以3-磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作为内参照。PCR反应在定量PCR反应仪上进行。3次独立实验后得到的数据运用公式RQ=2-ΔΔCt的方法进行分析。

1.4 血清指标的检测

血清IGF2B、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）均采用酶联免疫吸附法（ELISA）。酶联免疫分析试剂盒由上海华壹生物技术有限公司提供，实验严格按试剂盒说明进行操作。

1.5 统计学分析

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。血液标本中TUG1、IGF2B、IL-6、TNF-α浓度以（±s）表示，采用t检验或One-way ANOVA方差分析；TUG1与IGF2B、IL-6及TNF-α相关性分析采用线性回归法。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料比较

106例冠心病阳性患者和98例冠心病阴性对照者的临床资料比较，详见表1和表2。与冠心病阴性组比较，冠心病阳性组血清TUG1浓度显著降低，差异有统计学意义（P<0.05），见图1A、图1B。

表1 两组计量临床资料比较 ［±s］

表1 两组计量临床资料比较 ［±s］

临床特征 冠心病阳性组 冠心病阴性组P值n年龄（岁）身高（cm）体质量（kg）收缩压（mmHg）舒张压（mmHg）106 62.1±15.4 160.5±12.7 61.7±16.8 126.0±18.1 77.9±12.0 98 59.5±13.7 158.1±14.4 60.4±17.0 119.8±13.0 72.6±10.4 0.610 0.762 0.649 0.573 0.084

表2 两组计数临床资料比较 ［n（%）］

图1 两组血清TUG1浓度比较图（QRT-PCR分析结果）

2.2 两组血清IGF2B、IL-6及TNF-α浓度比较

冠心病阳性组血清IGF2B、IL-6及TNF-α浓度分别为（121.20±12.48）ng/mL、（150.65±11.48）ng/mL和（160.56±11.175）ng/mL，显著高于阴性对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见图2。

图2 两组血清IGF2B、IL-6及TNF-α浓度比较柱状图

2.3 相关分析结果

线性相关分析结果提示，血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及 TNF-α浓度呈负相关关系（IGF2B：r=-0.767，P<0.001；IL-6：r=-0.671，P< 0.001；TNF-α：r=-0.872，P<0.001），见图3A、图3B、图3C。

图3 血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及TNF-α浓度的相关性散点图

3 讨论

炎症贯穿冠心病发生、发展的整个病理、生理过程，是遗传因素和环境因素共同作用的结果，是导致动脉粥样硬化斑块形成和不稳定的中心环节［6-7］。众所周知，人类基因组中的可转录本超过90%，但是其中只有大约2%为蛋白编码基因。这意味着非编码RNA（non-coding RNAs，ncRNAs）是哺乳动物转录组中的重要组成部分，在这些非编码RNA中，长度为21～23 nt的微小RNA（microRNA，miRNA）已被证明在多种生物及病理学过程中发挥着重要作用。长链非编码RNA（long non-coding RNAs，LncRNAs）及其亚型基因间长链非编码RNA，这一类长度超过200 nt的ncRNA，近年来亦被证明是非编码RNA中可发挥生物学功能的重要组分［2，4］。众多研究结果提示，在肿瘤的发生、发展过程中，LncRNAs均有参与并发挥重要作用，然而，LncRNAs在心血管系统疾病中的作用却尚不十分清楚［5，8］。近年来的研究发现，IGF2BmRNA结合蛋白参与动脉粥样硬化炎症反应。我们通过生物信息学分析发现LncRNA TUG1可能影响IGF2BmRNA结合蛋白的表达，我们推测LncRNA TUG1可能通过调节IGF2BmRNA结合蛋白表达从而影响动脉粥样硬化炎症反应。本研究通过QRT-PCR检测我院收治的106例冠心病阳性患者和98例冠心病阴性对照患者血清TUG1浓度，酶联免疫吸附法检测外周血清中IGF2B、IL-6、TNF-α浓度。分析其TUG1与血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度的相关性。结果发现与冠心病阴性组比较，冠心病阳性组患者血清TUG1浓度维持在相对较低的水平。而IGF2B、IL-6、TNF-α在冠心病阳性组血清中的浓度明显高于冠心病阴性组，差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析发现，血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及TNF-α浓度呈负相关关系。

综上所述，LncRNA TUG1有望成为新的早期诊断冠心病的血清学指标，可作为冠心病早期诊断和鉴别标志物，具有较好的临床应用前景，然而其具体机制仍需进一步深入研究。

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Expression and significance of serum LncRNA TUG1 in patients with coronary atherosclerotic heart disease

PAN Hong-chuan，LIU Hai-yan，ZHANG Yue-chao，XIAO Da-yan，XIE Qing-ping
（People′s Hospital of Meishan City，Meishan，Sichuan 620010，China）

ObjectivesTo investigate the expression and clinical significance of long non coding RNA TUG1（LncRNA TUG1，TUG1）in patients with coronary atherosclerotic heart disease（CAD）.MethodsSerum concentrations of TUG1 in coronary atherosclerotic heart disease positive group（n=106）and coronary heart disease negative group（n=98）were measured by quantitative real time polymemse chain reaction（QRT-PCR）.Serum concentrations of insulin-like growth factor 2B（IGF2B），interleukin-6（IL-6），tumor necrosis factor-α（TNF-α）were tested by enzyme linked immunosorbent assay.Correlations between serum concentrations of IGF2B，IL-6，TNF-α and serum concentration of TUG1 in CAD positive group were analyzed.ResultsCompared with negative group，serum concentrations of TUG1 were maintained at a relatively low level in the positive group；serum concentrations of IGF2B，IL-6 and TNF-αin CAD positive group were significantly higher than those in CAD negative group（P<0.05）. Correlation analysis revealed that serum concentrations of TUG1 and IGF2B，IL-6，TNF-α negatively correlated with serum concentration of TUG1（IGF2B：r=-0.767，P<0.001；IL-6：r=-0.671，P<0.001；TNF-α：r=-0.872，P<0.001）.ConclusionsSerum concentration of TUG1 in patients with CAD significantly decreases，which may be as a potential marker for diagnosis and prognosis of coronary heart disease.

coronary atherosclerotic heart disease；long non coding RNA TUG1；clinical significance

R541.4

：A

：1007-9688（2017）02-0151-04

10.3969/j.issn.1007-9688.2017.02.08

2016-04-05）

潘洪川（1978-），男，副主任医师，研究方向为冠心病病理生理。