杜仲炭抗炎镇痛作用研究

郑斌 杨瑞 解燕

摘要[目的]研究杜仲炭的抗炎镇痛作用。[方法]对杜仲炭进行水煎醇的提取方法处理，分别采用二甲苯诱导小鼠耳壳致炎肿胀法和热板致痛法对其进行小鼠体内的抗炎镇痛作用研究。试验以生理盐水作为空白对照，地塞米松磷酸钠作为对照组，杜仲炭的提取物作为试验组，测定耳廓肿胀率来观察杜仲炭提取物的抗炎作用；以生理盐水作为空白对照，阿司匹林作为对照组，杜仲炭的提取物作为试验组，测定小白鼠的舔足次数或时间以观察杜仲炭的镇痛作用。[结果]杜仲炭提取物具有抗炎镇痛作用的功效，且与浓度相关。随着提取物浓度提高，抗炎作用逐渐增强，但镇痛作用则呈现先增强后下降的趋势。通過对提取物进行紫外鉴定分析，发现其中含有绿原酸有效成分。[结论]杜仲炭具有抗炎镇痛作用，可以为其应用提供理论依据。

关键词杜仲炭；抗炎；镇痛；杜仲炭提取物

中图分类号S567.1文献标识码A文章编号0517-6611（2017）16-0126-02

Study on Antiinflammatory and Analgesic Effects of Charred Cortex Eucommiae

ZHENG Bin，YANG Rui，XIE Yan

（School of Chemistry and Chemical Engineering， Hefei Normal University，Hefei，Anhui 230016）

Abstract[Objective]The research aimed to study the antiinflammatory and analgesic effects of charred cortex eucommiae. [Method]The extracts of charred cortex eucommiae were obtained through water extractionalcohol precipitation method and its effect on antiinflammatory and analgesic action were observed by xylene induced auricular inflammatory swelling of mice and hot plate pain， respectively. Physiological saline was adopted as the blank control， dexamethasone sodium phosphate as the control group， the extract of charred cortex eucommiae as the experimental group to obtain the auricle swelling rate and swelling inhibition rate. Physiological saline was adopted as the blank control， aspirin as the control group， the extract of charred cortex eucommiae as the experimental group to count the number of mice licking foot or time. [Result]The extract of charred cortex eucommiae had antiinflammatory and analgesic effects，and which were associated with the concentration of extracts.With the increase of the concentration of extract， the antiinflammatory effect gradually increased，but the analgesic effect showed an increasing first and then decreasing trend.Through UV qualification， the effective content was found to be chlorogenic acid.[Conclusion]Charred cortex eucommiae has antiinflammatory and analgesic effects and the study provides the theoretical basis for the application of charred cortex eucommiae.

Key wordsCharred cortex eucommiae；Antiinflammatory；Analgesic rates；Extracts of charred cortex eucommiae

基金項目留学人员科技活动择优资助项目（2015LXKJZZ001）；国家自然科学基金青年项目（21504021）；安徽省级质量工程项目教学研究重点项目（2015jyxm277） 。

作者简介郑斌（1986—），女，山东烟台人，副教授，博士，从事生物传感器制备与应用研究。

收稿日期2017-04-12

杜仲是我国独特具有的树种，作为我国的名贵药材已有上千年的历史。赵玉英等[1]研究杜仲皮和杜仲叶发现，其主要药理成分有绿原酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄苷等。由于活性成分的存在使得杜仲具有调节血压、血脂、抗菌、消炎、止血、抗氧化、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长等药理作用，并具有延缓衰老、美白养颜、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎、滋阴补肾等功效[2]，这些功效的发挥与其炮制方法密切相关。通过动物试验表明，降压作用中盐制杜仲比生杜仲好近1倍，而杜仲炭和砂烫杜仲在降压和对子宫抑制作用上基本相同[3]。杜仲制剂对蛋清性脚肿有明显的抑制作用，同时嗜酸性细胞明显降低，说明杜仲有增强肾上腺皮质的功能；在镇静方面，杜仲注射后对小鼠有安静嗜睡现象[3]。杜仲药理作用相比于化学药而言，其副作用较少，有明显的优势。现代研究表明，杜仲皮有增强机体的免疫功能，对细胞免疫有双向调节作用，可促进人体皮肤、骨骼、肌肉中蛋白质胶原的合成和分解，其具有促进代谢、防止衰老等功效。可见，杜仲在临床上的医疗作用有着不可替代的地位。中药类的杜仲提取物对疼痛症状有显著药效，同时恢复较快，副作用较小，并且不易成瘾，安全性比目前的安定类药物大大提高[4]。

杜仲有种类繁多的化学成分和广泛的药理作用，应用前景极为广阔，在医药领域有巨大潜力。为研究杜仲炭其他功效，开拓其应用范围，笔者拟针对杜仲的抗炎镇痛作用进行药理学验证研究，以期达到合理利用、拓展其应用领域的目的。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1仪器设备。

电子调温电炉220V.AC/1000W，金坛市金城国胜实验仪器厂；

HK-04B摇摆式药材粉碎机，广州华凯机电设备有限公司；

JYT-2托盘天平，上海马头牌天平秤；

SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；

80-2型电动离心机，江苏金坛市金城国胜实验仪器厂；

UV-1800PC，上海美谱达仪器有限公司；

HH-6数显恒温水浴锅，金坛市杰瑞尔电器有限公司；

EX125DZH电子天平，奥豪斯仪器（常州）有限公司。

1 000 mL烧杯、冷凝装置（圆底烧瓶、冷凝管、牛角管、温度计）、25 mL试剂瓶、40 mL锥形瓶、布氏漏斗、抽滤瓶。

1.1.2试验用品。

医用纱布、医用剪刀、打孔器、无水乙醇（AR）、去离子水、二甲苯、阿司匹林泡腾片、注射剂、地塞米松磷酸钠注射液、杜仲炭（四川产）。

1.2试验方法

1.2.1杜仲炭水提取物的制备。

用托盘天平秤取杜仲炭100 g，放置中药粉碎机中粉碎。将粉碎好的粉末用纱布包好，放在1 000 mL的烧杯中用适量的水浸透煎煮3次，时间分别为2.0、1.0、0.5 h。合并3次煎煮液浓缩至100 mL，然后加入适量的无水乙醇（60 mL），使醇含量达到60%（V/V），密封冷藏24 h；而后用抽濾机抽滤取下清夜，再用离心机在4 000 r/min中离心10 min，取上清液。在79 ℃下蒸馏回收乙醇即得杜仲炭的水煎醇提取物，定容至100 mL（含主药1 g/mL），装瓶，消毒备用。

1.2.2

杜仲炭水提取物的鉴定。

杜仲炭的水提取物主要为各种多糖和黄酮类。采用紫外分光光度仪进行测定，分别用标准品的绿原酸和提取物进行对比测定。查阅相关文献得知，绿原酸的紫外最大吸收峰的波长在200～360 nm，在328 nm有最大吸收峰[5]。故将紫外分光光度仪的测量波长定在200～400 nm，扫描间隔为0.2 nm，将待测液放在比色皿中进行吸光度的测定。

1.2.3镇痛试验（热板法）。

将1 000 mL大烧杯放置恒温水浴锅中，温度调节为（ 55±0.5）℃，置小鼠于烧杯上，测定各小鼠正常的痛阈。以小鼠舔足为观察指标，共测2次，每次间隔大于5 min，以均值不超过30 s为合格，共筛选出25只雄性小鼠，称其质量标记，分为5组：空白对照组（生理盐水0.02 mL/g）、杜仲炭水提取物低剂量组（2 mg/g）、杜仲炭水提取物中剂量组（10 mg/g）、杜仲炭水提取物高剂量组（20 mg/g）、阳性对照组（阿司匹林片剂，0.2 mg/g）。各组腹腔注射给药，共注射5次，末次给药1 h后再测定痛阈，如果60 s内无反应按60 s记，并将小鼠取出以防烫伤。

1.2.4抗炎试验。

取雄性小鼠25只，称其体重，随机分为5组，即对照组、地塞米松磷酸钠注射液为阳性组、杜仲炭水提取物高、中、低剂量组。将二甲苯（0.02 mL/只）均匀涂在小鼠右耳的内外两面以致使发炎。30 min后进行给药，给药方法同“1.2.3”，采用腹腔注射，在末次给药2 h后，观察小鼠耳廓颜色的变化。致炎3 h后将小鼠处死，剪下左右两耳，用打孔器9 mm 分别在两耳的同一部位打下圆形耳片，再用分析天平称取耳片的质量，计算各组小鼠的耳片肿胀程度。耳片肿胀程度=致炎侧耳片质量（右耳）-对照侧耳片质量（左耳），肿胀率=肿胀程度/对照侧耳片质量（左耳）×100%。

2结果与分析

2.1杜仲炭的水提取物浓度

用去离子水稀释绿原酸标准物成0.001、0.002和0.005 g/mL的待测溶液，对照组为去离子水，在328 nm处测定，得到绿原酸的标准曲线方程为y=22.642x-0.203 9，r=0.999 9（n=6）。该试验测定得到的杜仲炭水提取物中绿原酸浓度为24.493 μg/mL。

2.2提取物的镇痛试验

从表1可以看出，杜仲炭水提取物对热刺激所致的小鼠疼痛反应具有一定的作用。与空白对照组相比，试验组用药后疼痛阈值的反应时间延长，且与试验剂量和用药时间有关。随着时间延长，疼痛阈值的反应时间呈先增大后减小的趋势；随剂量提高，疼痛阈值的反应时间呈先增大后减小的趋势。与阳性阿司匹林对照组相比，杜仲炭水提取物疼痛阈值稍低，但仍具有一定的镇痛作用。

2.3提取物的抗炎试验

由表2可知，杜仲炭水提取物对二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀发炎有

良好的抑制效果。在空白对照组（生理盐水）中，小鼠耳廓的肿胀率较高，达 25.00%，

而在阳性对照组（地塞米松磷酸钠）中，小鼠的耳廓肿胀率仅为2.20%。在试验组的3个浓度下，小鼠的耳廓肿胀率随浓度升高出现递减的趋势，显示出随浓度增大抗炎作用

增强的趋势，且均比空白对照组小。因此，杜仲炭水提取物在抗炎试验上效果较好，具有一定的抑制作用。

3结论

杜仲炭的主要有效成分是黄酮类和多糖类等化合物，而多糖类化合物本身就具有抗炎抑菌、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌等生理活性[6]，所以可依此推測出杜仲炭具有良好的抗炎镇痛作用。热刺激法是通过热刺激足部的感觉神经末梢致痛，类似于急性锐痛。在试验中小白鼠给予5次给药后，发现杜仲炭具有良好的镇痛效果，因此杜仲炭对急性锐痛和慢性钝痛均有良好的治疗作用。在抗炎试验中，杜仲炭水提取物对二甲苯诱导的耳廓肿胀有明显的抑制作用，表明杜仲炭具有良好的抗炎作用。此次试验只是初步地研究出了杜仲炭的抗炎镇痛效应，而对其作用机制有待深入研究。

参考文献

[1] 赵玉英，耿权，程铁民.杜仲化学成分研究概况[J].天然产物研究与开发，1995，7（3）：46-48.

[2] 晏媛，郭丹.杜仲叶的化学成分及药理活性研究进展[J].中成药，2003，25（6）：491-492.

[3]

方海燕，夏美俊.杜仲的炮制及临床应用研究的进展[J].基层中药杂志，1997，11（3）：52-53.

[4] 李欣，樊金铃，朱文学，等.杜仲雄花正丁醇提取物的镇静催眠作用研究[J].食品与机械，2009，25（4）：56-59.

[5] 李坤，武瑞，伊文君，等.杜仲叶中绿原酸含量测定方法的建立[J].中国兽医杂志，2015，51（3）：61-63.

[6] 唐栩，许东晖，梅雪婷，等.26种黄酮类天然活性成分的药理研究进展[J].中药材，2003，26（1）：46-54.