诺丽发酵果汁中总木脂素含量测定

史晓萌 陈建国 张露

摘要 [目的]建立诺丽发酵果汁中总木脂素的含量测定方法。[方法]以鬼臼毒素为对照品，采用紫外分光光度法建立总木脂素含量的分析测定方法。[结果]鬼臼毒素对照品在0～0.100 mg/mL线性关系良好；平均回收率为99.61%，RSD为1.85%。采用此方法对不同发酵时间的诺丽果汁中总木脂素成分进行含量測定，含量为0.401 9～0.582 7 mg/mL。[结论]该试验建立的含量检测方法简单、迅速、准确、重复性好，适用于液体样品中总木脂素成分含量的测定。随着发酵时间的增长，诺丽果汁中木脂素类成分的含量变化不大。

关键词 诺丽发酵果汁；总木脂素；紫外分光光度法；含量测定

中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）28-0125-02

Abstract [Objective] The research aimed to establish a method for the total lignans content in Noni fermented juice.[Method] Using podophyllotoxin as the reference substance，the determination method of total lignans content was established by ultraviolet spectrophotometry.[Result]The linear relationship of podophyllotoxin reference substance in the 0-0.100 mg/mL was good.The average recovery rate was 99.61%，RSD was 1.85%.The content of total lignans in Noni juice in different fermentation time was 0.401 9-0.582 7 mg/mL.[Conclusion] This method was simple，rapid，accurate and repeatability，which can be applicable for determination of lignans content in liquid samples and the content of lignans in Noni juice was stable with the fermentation time extended.

Key words Noni fermented juice；Total lignans；Ultraviolet spectrometry；Content determination

諾丽（Noni）学名海巴戟天（Morinda citrifolia Linn.），原产于南太平洋群岛、东南亚和澳大利亚等地的茜草科（Rubiaceae）巴戟天属（Morinda）植物[1]，其根、茎、叶、果实和树皮均具有很高的药用价值，在波利尼西亚具有2 000多年的药用历史，用作偏方治疗糖尿病、高血压和癌症[2-4]。现今广泛应用诺丽发酵果汁来预防与生活方式相关的疾病，如糖尿病、高血压、心脏病和动脉硬化引起的脑溢血[3-4]，并有报道指出诺丽果汁具有抑菌、抑制肿瘤细胞增殖、辅助改善放化疗副作用的效果[5-7]。

现有许多研究证实多酚类物质是诺丽植物中重要的活性成分，在发酵果汁中的含量可达1.141 2 mg/mL[8]。目前，从诺丽果实、根、茎和叶中分离得到酚类化合物主要有黄酮类、香豆素类、木脂素类和酚酸类，其中木脂素是一类具有多种生理活性的成分，可抑制脂肪氧合酶活性，表现出很强的抗氧化活性[9-12]。但有关诺丽发酵果汁中木脂素成分含量的研究目前鲜见报道。该研究建立了木脂素成分含量的测定方法，并对不同发酵时间的诺丽果汁样品进行了木脂素含量的测定与比较，以期为诺丽发酵食品的质量控制及评价提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 仪器 紫外分光光度计（UNICO-JV2000），AB204-N万分之一电子天平（瑞士梅特勒仪器有限公司），电子天平（METTLER-TOLEDO 公司），离心机（Eppendorff 公司）。

1.2 试材 诺丽发酵果汁由海南诺尼生物工程开发有限公司提供。鬼臼毒素对照品由北京盈泽纳新化工技术研究院提供（批号15042411）。甲醇、乙醇等其他试剂均为分析纯（北京化工厂）。

1.3 方法

1.3.1 对照品溶液的制备。精密称取鬼臼毒素（Podophyllotoxin）对照品10.00 mg置于50 mL 量瓶中，用甲醇溶解，即得对照品溶液。

1.3.2 样品溶液的制备。精密量取样品10.0 mL，置于100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密移取31.25 mL置于100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀离心，上清即得样品溶液。

1.3.3 线性关系考察。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50、3.00 mL分别置于5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成系列质量浓度的对照品溶液，在292 nm处进行测定，并以吸光度（y）对鬼臼毒素对照品溶液终浓度（x）进行线性回归，绘制标准曲线。

1.3.4 精密度试验。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素对照品溶液3.0 mL置于10.0 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，以甲醇溶液为空白对照，连续6次测定其在波长292 nm处的吸光度，计算RSD值。

1.3.5 重复性试验。取“1.3.2”制备的样品溶液，以甲醇为空白对照，在波长292 nm 处测定吸光度，测得其吸光度并计算RSD值。

1.3.6 穩定性試验。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素对照品溶液，适当稀释一定倍数后，分别在0、10、20、40、80、120、240 min时波长292 nm处进行紫外测定，测得吸光度并计算RSD值，评价对照品稳定性。取“1.3.2”制备的样品溶液，分别在0、10、20、40、80、120、240 min，以甲醇为空白对照，在波长292 nm 处测定吸光度，测得其吸光度并计算RSD值，评价样品稳定性。

1.3.7 加样回收率试验。取“1.3.2”的样品溶液9份，精密量取1.0 mL置于5 mL量瓶中，分别精密量取“1.3.1”对照品溶液0.138 、0.168、0.198 mg 3个水平各3份加入样品中，加甲醇稀释至刻度并以甲醇为空白对照，在波长292 nm 处测定吸光度（n=3）。

1.3.8 样品测定。精密量取4个不同发酵时间的诺丽果汁样品，按照“1.3.2”方法制备样品溶液，以甲醇为空白对照，在292 nm处测定吸光度，由标准曲线计算木脂素含量。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制 通过紫外分光光度计测定对照品，绘制标准曲线，数据经过回归处理，得鬼臼毒素对照品的回归方程为y=0.012 5x+0.007 6（r=0.999 4），结果表明对照品在0～0.100 mg/mL具有良好的线性关系。

2.2 精密度试验 按照“1.3.4”操作，重复进样6次测定含量，计算RSD值为0.14%，表明该方法精密度良好。

2.3 重复性试验 按照“1.3.5”操作，平行进样对照品6次，计算RSD值为0.96%，表明样品的重复性良好。

2.4 稳定性试验 按照“1.3.6”操作，取对照品和样品分别在0、10、20、40、80、120、240 min时292 nm 处进行紫外测定，测得吸光度并计算RSD值分别为1.02%和0.94%，表明对照品和样品在240 min内的稳定性良好。

2.5 加样回收试验 由标准曲线计算鬼臼毒素的平均回收率为99.61%和RSD为1.85%（表1），表明该含量测定方法准确可靠。

2.6 样品含量测定 取发酵25～500 d的诺丽果汁，采用上述建立的方法测定其中总木脂素含量，结果表明（表2），总木脂素含量为0.401 9～0.582 7 mg/mL，其中发酵25 d时含量最高，整个发酵期间变化不大。

3 结论与讨论

该试验建立的紫外分光光度法测定诺丽发酵果汁中总木脂素含量的方法简便快捷且稳定可靠，在0～0.100 mg/mL具有良好的线性关系，适用于液体类样品中木脂素成分含量的检测。采用此方法对不同发酵时间的诺丽果汁中总木脂素成分进行含量测定，得出其含量为0.401 9～0.582 7 mg/mL。前期文献报道，诺丽植物中所含木脂素主要有双四氢呋喃型、苯骈二氧六环型、苯骈呋喃型三大类，是诺丽果中重要的功能性成分[1-4]。该试验结果显示诺丽发酵果汁中木脂素成分的含量随发酵时间的增长变化不大，表明此类成分在发酵过程中较稳定。此结果为后期诺丽发酵工艺的研究及相关生产的质量控制奠定了理论基础。

参考文献

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