布洛芬颗粒有关物质检测方法研究

苏德龙

【摘 要】目的：建立一种能用于布洛芬颗粒中有关物质控制的HPLC方法。方法：采用YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）色谱柱；流速：2 ml·min-1；检测波长：214nm；流动相：磷酸溶液（pH2.5）- 乙腈（66：34）；柱温：30℃；进样量为5μL。结果：布洛芬与其各杂质能达到基线分离；布洛芬颗粒中的辅料不干扰有关物质的测定；方法的线性、准确性、灵敏度均能满足要求。结论：本文所建方法为布洛芬颗粒的评价、质量控制提供了较好的分析手段。

【关键词】布洛芬颗粒 有关物质 RP-HPLC

【Abstract】 Objective：To develop an HPLC method for determination the related substances of Ibuprofen granules.Method：The separation was performed on a column of YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）， with acetonitrile：pH2.5 phosphate buffer （66 ： 34） as the mobile phase at flow rate of 2.0ml/min. The detection wavelength was 214 nm. The injection amounts of sample solutions were 5μL. Result：Ibuprofen and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The excipients in ibuprofen granules did not affect the determination of related substances. Linearity， accuracy，sensitivity and robustness of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method can be successfully applied to the quality control of Ibuprofen granules.

【Keywords】 Ibuprofen granules； related substances； RP-HPLC

布洛芬（Ibuprofen） 是一种疗效确切、安全的非甾体抗炎、解热、镇痛药物。临床上用于风湿性、类风湿性关节炎和骨关节炎的长期治疗， 还广泛用于治疗各种中度疼痛及炎症、发热等疾病， 其治疗效果明显， 对消化道的副作用较阿司匹林、吲哚美辛小。布洛芬颗粒为布洛芬原料药和辅料蔗糖、糊精按比例制成的颗粒剂。目前，由于布洛芬颗粒药品标准中无有关物质检查项目，而有关物质是目前药品安全性评价的一个重要指标。为更好的评价及控制布洛芬颗粒的质量，本研究参考美国药典（USP32-NF27）及相關文献[1]中布洛芬有关物质测定方法，确定了一种专属性好，简单可靠的布洛芬颗粒有关物质检测方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪，LHH-250GP型药品强光稳定性试验箱，LHH-250HD型药品稳定性试验箱，DZF-6210型真空干燥箱。

布洛芬标准品（中国食品药品检定研究院，批号：100179-201105），布洛芬颗粒（哈药集团世一堂制药厂，规格：0.2g），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：YMC C18（150mm×4.6mm，5μm）；流速：2 ml·min-1；检测波长：214nm；流动相：磷酸溶液（pH2.5）-乙腈（66：34）；柱温：30℃。

2.2 溶液制备

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬1 g），精密称定，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3 测定方法

精密吸取供试品溶液和对照溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

2.4 专属性试验

2.4.1 空白辅料干扰试验

（1）布洛芬对照品溶液：精密称取布洛芬对照品适量，用乙腈溶解并稀释成每1ml约含布洛芬1mg的溶液，滤过，取续滤液，即得。

（2）空白辅料溶液：精密称取按处方比例混合均匀的空白辅料约4g，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

（3）布洛芬颗粒供试品溶液：取布洛芬颗粒，研细，精密称取细粉约5g，置100ml量瓶中，同2）中方法制备，即得。

精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色谱条件测定，记录色谱图。结果见图1。结果表明空白辅料不干扰布洛芬有关物质的测定。

2.4.2 酸降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬1 g），置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1盐酸溶液10ml，摇匀，室温放置16h 。用5 mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH至中性，加乙腈稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取5μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在本实验条件下的酸溶液中较为稳定，无明显降解。

2.4.3 碱降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬1g），精密称定，置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1氢氧化钠溶液10ml，摇匀，室温放置16h。用5 mol·L-1盐酸溶液调节pH至中性，加乙腈稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取5μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在本实验条件下的碱溶液中较为稳定，无明显降解。

2.4.4 氧化降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬1 g），精密称定，置100ml量瓶中，加入30%过氧化氢溶液10ml，摇匀，室温放置16h。加乙腈稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取5μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在本实验的氧化条件下较为稳定，无明显降解。

2.4.5 高温降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬0.25 g），精密称定，置7ml玻璃管制注射剂瓶中，105℃放置4h 。转移至25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取5μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在105℃高温条件下与降解前相比在46min附近出现一杂质峰，但降解杂质峰能够与主成分峰达到有效分离，符合测试要求。

2.4.6 高湿降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬0.2 g），精密称定，置7ml玻璃管制注射剂瓶中，于75%RH、40℃放置48h 。转移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取25μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在75%RH、40℃条件下较为稳定，无明显降解。

2.4.7 光照降解

取布洛芬颗粒适量（约相当于布洛芬0.2g），精密称定，置7ml玻璃管制注射剂瓶中，于照度为4500lx±500lx、45℃放置5d 。转移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，精密吸取25μl，依2.1中色谱条件测定。结果表明布洛芬颗粒在照度4500lx±500lx、45℃条件下较为稳定，无明显降解。

2.5 检测限

精密称取布洛芬对照品适量，用乙腈溶解并稀释成每1ml约含布洛芬1mg的溶液，将此溶液用乙腈进行倍数梯度稀释后，滤过，取续滤液，精密吸取5μl注人液相色谱仪，记录色谱图。其中，当稀释浓度为12.5ng·ml-1时，S/N （S：布洛芬峰高；N：最大噪音峰高）约为3，将此时的进样量定为检测限，即在本色谱条件下布洛芬的检测限为0.06ng。

2.6 耐用性

2.6.1 溶液稳定性

取供试品溶液及对照溶液室温放置，分别于0、3、6、9、12、15、18 小时精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色谱条件测定，记录色谱图。结果对照溶液主成分峰面积RSD值为0.32%；供试品溶液总杂质峰面积RSD值为2.79%，且未见明显新杂质产生。表明，在室温条件下布洛芬颗粒对照溶液及供试品溶液稳定性均较好，18 h內稳定。

2.6.2 色谱柱

分别考察了3种不同品牌的色谱柱（YMC-pack ODS-A-302、Agilent Eclipse XDB-C18、Phenomenex Luna C18（2） 100A），规格均为150 mm×4. 6 mm 5 μm。结果表明，YMC色谱柱的分离效果最好。因此，本试验中选择YMC色谱柱用于布洛芬颗粒有关物质的检测。

2.6.3 柱温

分别考察了柱温25℃、30℃和35℃条件下的色谱图。结果表明，在柱温上下波动5℃的范围内，各杂质峰与主成分峰军能得到较好的分离。

2.6.4 流动相

分别考察了乙腈与pH为2.5的磷酸水溶液的体积比为33：67、34：66和35：65的色谱图。结果表明，流动相比例的微小变化并不影响各杂质峰与主成分峰的分离。

2.6.5 流速

分别考察了流速为1.9ml·min-1、2.0 ml·min-1、2.1 ml·min-1的色谱图。结果表明，流速的微小变化并不影响各杂质峰与主成分峰的分离。

2.7 样品测定及限度确定

取8批次布洛芬颗粒样品进行测定。除与对照溶液色谱图中溶剂峰相近的色谱峰外，本品的有关物质总和均不大于对照溶液主峰面积（1%），因此，确定本品的有关物质限度不得大于1%。

3 讨论

由于本品的国家标准中无有关物质检查项目，参考美国药典布洛芬有关物质测定方法及相关文献，本实验采用HPLC法进行本品的有关物质研究，实验结果表明该色谱条件专属性好，空白辅料及强制降解实验中各杂质峰与主成分峰均有良好的分离；布洛芬的检测限为0.06ng；室温条件下，18h内布洛芬颗粒对照溶液及供试品溶液均较稳定；且在此检测条件下，色谱柱、柱温、流动相及流速的微小变化对各杂质峰与主峰的分离几乎无影响。

本实验建立了HPLC 测定布洛芬颗粒有关物质的方法，该色谱方法能够使各杂质与主峰得到良好的分离，方法专属性好，简单可靠，分离度好，可以作为布洛芬颗粒有关物质的检测方法。

参考文献：

[1]贺秀婷，翟光喜，等.HPLC法测定布洛芬缓释胶囊有关物质[J].药学研究，2013Vol.32， NO.2： 85-87.