三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中microRNA—21与microRNAlet—7a的表达分析

陈彦彬

【摘要】 目的 分析三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中microRNA-21与microRNAlet-7a的表达。方法 40例女性乳腺癌患者， 其中20例三阴性乳腺癌患者作为观察组， 另20例LuminalA型乳腺癌患者作为对照组， 另选取同时期体检结果健康的20例女性作为健康组。检測三组血清中的miRNA-21与microRNAlet-7a表达水平。结果 观察组血清的microRNA-21水平分别高于对照组和健康组（P<0.05）。

观察组、对照组与健康组血清中的microRNAlet-7a表达水平分别为（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 观察组血清中的microRNAlet-7a表达水平低于健康组（P<0.05）。观察组Ⅰ期microRNA-21的表达量明显低于Ⅱ～Ⅲ期的表达量， 差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 microRNA-21与microRNAlet-7a的表达水平可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。

【关键词】 三阴性乳腺癌；LuminalA型乳腺癌；microRNA-21；microRNAlet-7a

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.31.020

乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下发生基因突变， 使细胞增生失去控制， 出现无限制的恶性增生， 是威胁女性健康的常见恶性肿瘤[1]。本次作者以三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌为例， 分析这两种乳腺癌在血清中microRNA-21与microRNAlet-7a的表达水平， 将结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2015～2016年收治的40例女性乳腺癌患者， 其中20例三阴性乳腺癌患者作为观察组， 另20例

LuminalA型乳腺癌患者作为对照组， 另选取同时期体检结果健康的20例女性作为健康组。观察组年龄25～68岁， 平均年龄（45.2±8.5）岁。对照组年龄24～69岁， 平均年龄（46.0±

8.0）岁。健康组年龄24～68岁， 平均年龄（45.5±8.0）岁。观察组患者雌激素受体[ER]（-）、孕激素受体[PR]（-）、人类表皮生长因子受体[HER-2]（-）。对照组患者ER（+）、PR（+）、HER-2（-）。排除妊娠、感染、严重肝肾功能不全者， 排除糖尿病、心血管疾病等并发症及合并其他肿瘤患者。三组受检者对于本研究均知情且签署知情同意书。三组受检者一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 收集三组受检者5 ml静脉血， 离心后取上层血清250 μl， 予以Trizol LS（Invitrogen）混匀后进行温室裂解， 使用RNA（QiaGen miReasy Mini Kit）提取试剂盒常规提取RNA， 并置于零下20℃保存， 使用反转录试剂盒（U6 snRA， PCR primer set， has-miR-21， LNATM PCR primer set）， 实时荧光定量PCR试剂盒（Roche公司）进行逆转反录， 逆转录反应体系参照Clontech2641A， qRT-PCR， 反应体系参照Takara RR820a， 95℃ 5 s， 60℃ 6 s， 40个循环， 引物序列：

hsa-miR-21（5-CGGCGTAGCTTATCAGACTGATG-3）；hsa-let-7a

（5-GCCGGTGAGGTAGTAGGTTGTATAG-3）；内参：hsa-miR-1610（5-TAGCAGCACTAAA TATTGGCG-3）。

1. 3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；不符合正态分布选择秩次非参数检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 三组microRNA-21与microRNAlet-7a的表达水平比较 观察组、对照组与健康组血清中的microRNA-21表达水平分别为（1.23±0.65）、（0.75±0.50）、（0.40±0.30）， 观察组血清的microRNA-21水平分别高于对照组和健康组（t=2.618、5.185，

P=0.000<0.05）。观察组、对照组与健康组血清中的microRNAlet-7a表达水平分别为（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 观察组血清中的microRNAlet-7a表达水平低于健康组（t=-2.682， P=0.000<0.05）；观察组与对照组的microRNAlet-7a表达水平比较差异无统计学意义（t=1.053， P=0.356>0.05）。

2. 2 观察组和对照组在年龄、TNM肿瘤临床分期、淋巴结转移中microRNA-21的表达量比较 观察组中microRNA-21

Ⅰ期的表达量为（0.50±0.20）， 低于Ⅱ～Ⅲ期的（1.65±0.56）（t=-8.649， P=0.00<0.05）。观察组血清中microRNA-21的表达增高与临床分期呈正相关；观察组microRNA-21在<45岁患者中表达量为（1.15±0.52）， 与≥45岁患者的（1.21±0.60）比较差异无统计学意义（t=-0.351， P=0.813>0.05）；观察组microRNA-21淋巴结转移N1～3的表达量为（0.82±0.40）， 与N0的（1.01±0.50）比较差异无统计学意义（t=1.178， P=0.222>0.05）。对照组microRNA-21Ⅰ期表达量为（0.55±

0.18），与Ⅱ～Ⅲ期的（0.58±0.20）比较差异无统计学意义（t=0.241， P=1.352>0.05）。对照组microRNA-21在年龄≥45岁

患者中的表达量为（0.60±0.22），与<45岁的（0.65±0.25）比较

差异无统计学意义（t=2.010， P=0.351>0.05）。对照组microRNA-21淋巴结转移N1～3的表达量为（0.58±0.38）， 与N0的（0.62±

0.45）比较差异无统计学意义（t=2.310， P=0.301>0.05）。

3 讨论

乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤， 在临床中具有较高的发病率， 成为对女性健康威胁最大的疾病之一。随着医学技术的发展进步， 基因分子水平检测方法的提高， 临床对于乳腺癌发病机制的研究也取得了一定的进展。乳腺癌在临床主要分为LuminalA型、LuminalB型、HER-2过表达和三阴性4种亚型， 不同的类型乳腺癌的治疗手段不同。三阴性乳腺癌以发病年轻、转移快、复发率高为主要临床特点， 且该型在治疗方面缺乏特异性， 治疗预后差。而LuminalA型乳腺癌与三阴性乳腺癌相比治疗的预后效果好。

随着研究发现miR是由2个核苷酸组成的非编码小RNA， 可与靶mRNA的3端非法医区（3untranalated regions， UTRs）进行序列特异性结合， 从而抑制据银的转录后表达， 可调控约60%的蛋白表达， 在乳腺癌患者中一些miRs的表达呈特异性[2]， miR-21与调控Bcl等的癌基因有关， 在肿瘤细胞的发生发展中发挥着重要作用。microRNAlet-7a可通过下调原癌基因RAS/c-MYC和HMGA-2的蛋白表达而抑制肿瘤细胞的增殖， 对癌细胞的基因有抑制作用， microRNAlet-7a表达水平与肿瘤的代谢、乳腺癌患者的生存时间有关[3]。

在作者的研究中， microRNA-21在观察组中的表达量明显高于对照组和健康组（P<0.05）， 说明microRNA-21与临床分期晚、短期生存率低等呈正相关。而microRNAlet-7a在观察组中表达量显著低于健康组（P<0.05）， 说明microRNAlet-7a对乳腺癌细胞的增殖有一定抑制作用。在病理资料方面观察组中microRNA-21Ⅰ期的表达量明显低于Ⅱ～Ⅲ期的表达量（P<0.05）， 說明microRNA-21的表达与淋巴结转移有关， 分期越晚， microRNA-21的表达量就越高。

综上所述， microRNA-21与microRNAlet-7a的表达水平可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。

参考文献

[1] 何佩娜， 窦拉加， 盛捡云. microRNA-21在乳腺浸润性导管癌患者血清中的表达及临床意义.医学研究杂志， 2014， 43（6）：97-100.

[2] 王雷， 马菲. microRNA在三阴型乳腺癌中的研究进展.中国普通外科杂志， 2013， 22（11）：1490-1494.

[3] 曾梓涵， 赵枚， 彭华， 等. microRNA-21、microRNAlet-7a在三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中的表达差异.实用医学杂志， 2015， 31（21）：3499-3502.

[收稿日期：2016-8-16]